Диагностика трисомии хромосомы 21 с помощью высокопроизводительного секвенирования (SEQ21)

Обоснование исследования:

Трисомия 21 является наиболее частой причиной инвалидности генетического происхождения с частотой 1,3/1000 рождений, которая увеличивается с возрастом матери. Было разработано несколько стратегий антенатального скрининга. Высшее управление здравоохранения недавно рекомендовало предложить беременным женщинам комбинированный скрининг 1-го триместра, проводимый между 11+0 и 13+6 неделями аменореи, сочетающий измерение прозрачности NUCALE и дозировку в материнской сыворотке: PAPP-A (связанный с беременностью). белок плазмы А) и βhCG (свободный β хорионический гонадотропин человека 1-го триместра). Однако чувствительность этих скрининговых тестов составляет около 80 % при 5 % ложных положительных результатов. Диагноз анеуплоидии затем устанавливается в популяции, отнесенной к группе высокого риска, по кариотипу плода (требующей инвазивной процедуры: биопсии трофобласта или амниоцентеза). Положительный скрининг увеличивает материнскую и медицинскую тревогу. Кроме того, несоответствующая комбинация тестов является причиной многочисленных бесполезных инвазивных процедур (национальный показатель амниоцентеза 11 %), риска потери плода (0,5 из 1 %). Это раздувание инвазивных процедур приводит к большому количеству потерь здоровых детей, таких как дети с трисомией, и к плохо известной материнской заболеваемости.

Несколько исследований показали, что 10 % свободной ДНК, обнаруженной в первой четверти беременности в материнской плазме, имеет эмбриональное происхождение и что эта ДНК специфична для ядерной ДНК плода текущей беременности. Это открыло путь к возможной неинвазивной антенатальной диагностике анеуплоидии плода, которая за последние 10 лет столкнулась с возможностями, ограниченными изоляцией и секвенированием ДНК плода в материнской плазме. Новый метод анализа путем широкополосного секвенирования ДНК, циркулирующей в материнской крови, для диагностики наиболее часто встречающихся анеуплоидов, трисомия 21 из которых была возвращена (сообщено). Высокопроизводительное секвенирование всей ДНК, циркулирующей в материнской крови, затем чтение и идентификация всех хромосомных последовательностей позволяет анализировать количество ДНК, полученное из нештатной хромосомы, без необходимости дифференцировать ДНК матери и плода. На основе самых последних работ 10 этот избыток последовательностей, возникающий именно из-за сверхштатной хромосомы 21 плода, позволяет провести различие между трисомией 21 и дисомией 21. Однако в этом исследовании проанализировано только 9 случаев трисомии 21, а забор материнской крови был осуществлен после амниоцентеза или хориоцентеза, что могло искусственно увеличить количество циркулирующей ДНК плода.

Цели:

Продемонстрировать, что высокопроизводительное секвенирование ДНК плода в материнской крови может позволить полностью различить матерей трисомного плода 21 или плода DISOMIQUE 21 в первой четверти беременности и, таким образом, получить надежную альтернативу инвазивным процедура.

Метод Два государственных центра дородового скрининга были созданы специально для выполнения рекомендаций Высшего управления здравоохранения и имеют возможность проводить 20 000 актов скрининга в год. Всем женщинам с высоким риском (> 1/250) анеуплоидии и кандидатам на инвазивную процедуру будет предложено принять участие в исследовании. Включенные пациенты будут иметь образец материнской крови перед инвазивным тестом. Это взятие будет приостановлено при температуре -80°C после центрифугирования в соответствии с рекомендуемым протоколом. В конце включения будет реализован метод анализа циркулирующей ДНК, а затем вслепую в лаборатории на всех диагностированных случаях (при обычном инвазивном исследовании или при заключении беременности) трисомии 21 и на контрольных представителях всех спектр уровней риска. Будет проведено исследование воспроизводимости количественного определения ДНК хромосомы 21.

Количество предметов:

мы планируем включить 75 случаев трисомии 21 и 150 контрольных случаев с нормальным кариотипом, что позволяет выявить чувствительность 99,9 % и специфичность 99,99 % с мощностью не менее 95 %.

Продолжительность исследования:

эти цели выполнимы через два года на основе количества инвазивных взятий, проведенных как в центре, так и уже проведенного исследования.

Этические аспекты: исследование данных и биологический сбор. Никакое индивидуальное медицинское решение не будет принято в соответствии с предполагаемым тестом.

Перспективы:

эта новая методика, в случае ее универсальности, позволит ограничить количество процедур инвазивной диагностики (амниоцентез и хориоцентез), которые содержат значительный риск тяжелых осложнений для матери и плода, оптимизируя при этом возможности этого скрининга.