Kontrolovaná pilotní studie in vivo k posouzení obnovy a přežití radioaktivně značených autologních INTERCEPT ošetřených 7denní skladované složky aferézních destiček ve 35% plazmě a 65% InterSol a 7denní skladované aferézní složky krevních destiček ve 100% plazmě

Dvě fáze této pilotní studie se skládají z následujících: odběr jednorázovou nebo dvojitou dávkou trombocytů aferézou, inaktivace patogenů léčbou INTERCEPT, skladování po dobu 7 dnů, odběr čerstvých krevních destiček, radioaktivní značení, infuze čerstvých a skladovaných autologních krevních destiček ošetřených radioaktivně značenými INTERCEPTem, a odběr vzorků krve pro hodnocení obnovy krevních destiček a přežití (životnosti).

Ve fázi A budou aferézní destičky odebrány pomocí separátoru Amicus a uloženy po dobu 7 dnů v 35% plazmě a 65% InterSol.

Ve fázi B budou aferézní destičky odebrány pomocí separátoru Trima a uloženy po dobu 7 dnů ve 100% plazmě.

Postupy pro obě fáze budou následující: V den 0 se každému zdravému dobrovolníkovi odeberou krevní destičky aferézou. Léčba INTERCEPTem začne buď v den darování (den 0), nebo před koncem dne po darování (den 1). Krevní destičky pak budou skladovány 7 dní po odběru (7. den). Alikvoty pro funkci krevních destiček in vitro budou odebrány v den 0/1 po léčbě INTERCEPT a v den 7. Alikvotní část pro detekci bakterií bude odebrána 5. den.

V den 7 se zdraví dobrovolníci vrátí do laboratoře a 43 ml krve bude odebráno do stříkačky obsahující 9 ml antikoagulačního roztoku citrát-dextrózy, vzorec A (ACD-A). Z tohoto vzorku budou připraveny čerstvé krevní destičky. Z testovací nádobky každého subjektu se asepticky odebere alikvot (10-20 ml) skladovaných (upravených INTERCEPT) krevních destiček. Dříve skladované (testovací) a čerstvé (kontrolní) krevní destičky budou radioaktivně značeny podle randomizačního přiřazení buď 51Cr (≤20 μCi) jako radiochromát sodný (Na251CrO4), nebo 111In (≤15 μCi) jako indium oxinem, podle postupů značení a promývání navržený organizací Biomedical Excellence for Safer Transfusion (BEST) Collaborative. Izotopové značky budou určeny tabulkou náhodných čísel tak, že stejný počet čerstvých a skladovaných (léčených INTERCEPT) krevních destiček bude označen každým izotopem. Alikvoty čerstvých a skladovaných krevních destiček budou radioaktivně značeny ve zkumavkách standardními technikami. Po radioaktivním značení budou pacientovi současně infundovány autologní čerstvé a skladované krevní destičky (přibližně 10-30 ml). Před podáním infuze je vyžadován test na detekci negativních bakterií a negativní těhotenský test u žen ve fertilním věku.

Vzorky krve pro měření radioaktivity se odeberou 0 (před infuzí), 0,5, 1 a 2 hodiny po infuzi a poté se odebere 6 dalších vzorků 1, 2, 3, 4 (nebo 6), 7±1 a 10±1 den po infuzi. Kromě toho, pokud je to logisticky proveditelné, bude 5 dní po infuzi odebrán další vzorek (volitelné).

Měření radioaktivity Vzorky budou odebrány z radioaktivně značených čerstvých a skladovaných krevních destiček před infuzí a použity jako radioaktivní standard. Změřením infuzního objemu se vypočte celková dávka infuze radioaktivity. In vitro eluce značky z transfundovaných krevních destiček bude stanovena dvěma způsoby hodnocení eluce, stejně jako in vivo eluce radioaktivity ze sériových krevních vzorků získaných po infuzi značených destiček.

Standard i vzorky plné krve subjektu budou korigovány na eluci a také na zbytkovou aktivitu v buněčné frakci v den 8. První čtyři datové body po infuzi se použijí k výpočtu in vivo výtěžků a přežití poté, co byly provedeny všechny radioaktivní korekce. Radioaktivita vzorků bude stanovena pomocí gama čítače. K odhadu obnovy a přežití radioaktivně značených krevních destiček bude použit model vícenásobného zásahu s počítačovým programem "COST".