Eine kontrollierte In-vivo-Pilotstudie zur Bewertung der Wiederherstellung und des Überlebens von radioaktiv markierten autologen INTERCEPT-behandelten 7-Tage-gelagerten Apherese-Thrombozytenkomponenten in 35 % Plasma und 65 % InterSol und 7-Tage-gelagerten Apherese-Thrombozytenkomponenten in 100 % Plasma

Die zwei Phasen dieser Pilotstudie bestehen aus Folgendem: Thrombozyten-Apherese-Entnahme mit Einzel- oder Doppeldosis, Pathogeninaktivierung mit INTERCEPT-Behandlung, Lagerung für 7 Tage, Entnahme frischer Thrombozyten, radioaktive Markierung, Infusion frischer und gelagerter INTERCEPT-behandelter radioaktiv markierter autologer Thrombozyten, und Entnahme von Blutproben zur Beurteilung der Blutplättchen-Erholung und des Überlebens (Lebensdauer).

In Stufe A werden Apherese-Thrombozyten mit dem Amicus-Separator gesammelt und für 7 Tage in 35 % Plasma und 65 % InterSol gelagert.

In Stufe B werden Apherese-Thrombozyten mit dem Trima-Separator gesammelt und für 7 Tage in 100 % Plasma gelagert.

Die Verfahren für beide Stufen sind wie folgt: Am Tag 0 werden jedem gesunden freiwilligen Subjekt Apherese-Blutplättchen entnommen. Die Behandlung mit INTERCEPT beginnt entweder am Tag der Spende (Tag 0) oder vor Ablauf des Tages nach der Spende (Tag 1). Die Blutplättchen werden dann 7 Tage nach der Entnahme (Tag 7) gelagert. Aliquots für die In-vitro-Thrombozytenfunktion werden an Tag 0/1 nach der INTERCEPT-Behandlung und an Tag 7 entnommen. An Tag 5 wird ein Aliquot für den Bakteriennachweis entnommen.

An Tag 7 kehren gesunde Freiwillige ins Labor zurück und 43 ml Blut werden in eine Spritze mit 9 ml Antikoagulans-Citrat-Dextrose-Lösung, Formel A (ACD-A) aufgezogen. Aus dieser Probe werden frische Blutplättchen hergestellt. Ein Aliquot (10–20 ml) der gelagerten (mit INTERCEPT behandelten) Blutplättchen wird aseptisch aus dem Testbehälter jedes Probanden entnommen. Zuvor gelagerte (Test) und frische (Kontrolle) Thrombozyten werden entsprechend der Randomisierungszuweisung entweder mit 51Cr (≤20 μCi) als Natriumradiochromat (Na251CrO4) oder 111In (≤15 μCi) als Indiumoxin nach den Markierungs- und Waschverfahren radioaktiv markiert umrissen von der Biomedical Excellence for Safer Transfusion (BEST) Collaborative. Die Isotopenmarkierungen werden durch eine Zufallszahlentabelle bestimmt, so dass gleiche Zahlen frischer und gelagerter (mit INTERCEPT behandelter) Blutplättchen mit jedem Isotop markiert werden. Aliquots der frischen und gelagerten Blutplättchen werden in Röhrchen mit den Standardtechniken radioaktiv markiert. Nach der Radiomarkierung werden die autologen frischen und gelagerten Blutplättchen gleichzeitig in das Subjekt infundiert (ungefähr 10–30 ml). Vor der Infusion sind ein negativer Bakteriennachweistest und ein negativer Schwangerschaftstest für Frauen im gebärfähigen Alter erforderlich.

Blutproben für Radioaktivitätsmessungen werden bei 0 (vor der Infusion), 0,5, 1 und 2 Stunden nach der Infusion entnommen, und dann werden 6 weitere Proben entnommen 1, 2, 3, 4 (oder 6), 7±1 und 10 ± 1 Tage nach der Infusion. Darüber hinaus wird, wenn logistisch machbar, eine zusätzliche Probe 5 Tage nach der Infusion entnommen (optional).

Radioaktivitätsmessungen Von den radioaktiv markierten frischen und gelagerten Blutplättchen werden vor der Infusion Proben entnommen und als radioaktiver Standard verwendet. Durch Messung des infundierten Volumens wird die Gesamtdosis der infundierten Radioaktivität berechnet. Die In-vitro-Elution der Markierung von den transfundierten Blutplättchen wird durch zwei Elutionsbewertungsmethoden sowie die In-vivo-Elution von Radioaktivität aus den nach der Infusion der markierten Blutplättchen erhaltenen seriellen Blutproben bestimmt.

Sowohl der Standard als auch die Vollblutproben des Probanden werden für die Elution und auch für die Restaktivität in der Zellfraktion am Tag 8 korrigiert. Die ersten vier Datenpunkte nach der Infusion werden verwendet, um die In-vivo-Wiederfindung und Überlebensrate zu berechnen, nachdem alle radioaktiven Korrekturen vorgenommen wurden. Die Radioaktivität der Proben wird mit einem Gammazähler bestimmt. Ein Multiple-Hit-Modell mit einem Computerprogramm „COST“ wird verwendet, um die Rückgewinnung und das Überleben der radioaktiv markierten Blutplättchen abzuschätzen.