Časosběrná inkubace pro kultivaci embryí - Morfokinetika a stabilita prostředí

Cíle výzkumu:

Nyní se dostáváme do nového věku s příležitostí pokročit k teoreticky lepším kultivačním prostředím a ke zlepšení měřítek hodnocení embryí.

Cílem této výzkumné studie bude vyhodnotit a porovnat reprodukční výsledky při izolaci jedné ze dvou nových intervencí zavedených systémem Time-Lapse Inkubátor (TLI). První bude posouzení prostředí TLI v porovnání se standardním prostředím Bench Incubator (BI). Druhým bude posouzení přidaného morfokinetického gradingu embryí ve srovnání se samotným tradičním morfologickým gradingem.

Ačkoli se primární cíl této studie zaměří na klinickou míru těhotenství a přenos čerstvých embryí, bude proveden další výzkum s použitím embryí zmrazených z této studie, aby se v budoucnu také vyhodnotila kumulativní míra těhotenství na cyklus odběru oocytů (OPU).

Metody Současná studie bude prospektivní randomizovaná a dvojitě zaslepená studie využívající tři ramena pacientů. První rameno bude zahrnovat pacienty randomizované ke kultivaci embryí v tříplynovém stolním inkubátoru (Miri, Benchtop Multi-room inkubátor). Tato embrya podstoupí vícenásobná hodnocení pomocí světelné mikroskopie a tradičního morfologického hodnocení podle přijatých kritérií. Druhá větev bude zahrnovat pacienty randomizované ke kultivaci embryí v časosběrném inkubátoru (Miri TL, Time-Lapse Incubator). Tato embrya zůstanou v TLI a podstoupí jak morfologické, tak morfokinetické hodnocení a klasifikaci podle vícerozměrného skórovacího modelu. Po dobu kultivace nebudou vyjmuty z inkubace. Třetí rameno bude zahrnovat pacienty také randomizované ke kultivaci embryí v časosběrném inkubátoru (Miri TL, Time-Lapse Incubator). Tato embrya zůstanou v TLI a podstoupí pouze tradiční morfologické hodnocení podle přijatých kritérií bez dalšího zobrazování. Po dobu kultivace také nebudou vyjmuty z inkubace. Časové body a hodnocené parametry budou totožné s těmi v rameni 1 studie.

Před zahájením cyklu IVF/ICSI v našem centru budou pacienti posouzeni z hlediska vhodnosti, kritérií pro zařazení a vyloučení lékařem a ošetřovatelským týmem. Jakmile je pacient uznán způsobilým, člen týmu péče s ním prodiskutuje podrobnosti studie.

Schválené subjekty studie podstoupí standardní kontrolovanou ovariální hyperstimulaci (COH). O protokolech a jejich odpovídajících medikamentech rozhodne ošetřující lékař. Ty mohou zahrnovat protokol agonisty hormonu uvolňujícího gonadotropin (GnRH) a protokol antagonisty GnRH. Folikulární aspirace bude provedena na IVF jednotce pomocí transvaginální aspirace jehlou. Preparace endometria a podpora luteální fáze budou doporučeny podle protokolu našeho oddělení. Počet embryí pro transfer bude definován před zahájením cyklu, podle The Israel Society of Obstetrics & Gynecology.

Randomizace pacientů nastane poté, co již bylo zajištěno podání lidského choriového gonadotropinu (hCG), před intracytoplazmatickou injekcí spermií (ICSI). Postup randomizace bude proveden pomocí počítačem generované randomizace.

Po folikulární aspiraci a převozu do laboratoře bude folikulární tekutina vyšetřena na přítomnost oocytů. Oocyty budou poté hodnoceny z hlediska zralosti a jakýchkoli morfologicky abnormálních znaků. ICSI se pak provede s použitím čerstvých spermií od odpovídajícího partnera.

Embrya budou poté umístěna do kultivačního média. Embrya v kultivačním médiu budou poté umístěna buď do inkubátoru Miri Benchtop nebo Miri Timelapse podle jejich odpovídající skupiny randomizace. Pamatujte, že prostředí stolních inkubátorů Miri a Miri TL bude považováno za identické. koncentrace kyslíku a koncentrace oxidu uhličitého nastaveny na 5 % a 5,5 %.

Embrya v rameni 1 studie (Inkubátor Miri Benchtop) budou morfologicky hodnocena světelnou mikroskopií v předem definovaných časových bodech a podle přijatých kritérií jedním z vyškolených laboratorních embryologů. Časové body pro vyhodnocení budou 16 - 20 hodin po ICSI (pro normální oplodnění), 44 - 48 hodin (den 2) po ICSI a poté 64 - 72 hodin (den 3) po ICSI. Vyhodnocené parametry budou zahrnovat počet buněk, velikost buněk, symetrii buněk a procento fragmentace. Jakékoli hrubé abnormality budou zaznamenány. Embrya budou poté 3. den klasifikována podle těchto hodnocených parametrů a přenesena podle preferenční klasifikace. Pokud byl embryotransfer předem určen na 5. den, další hodnocení proběhne přibližně ve 116 hodin.

Embrya v rameni 2 studie (inkubátor Miri TL) budou morfologicky a morfokineticky hodnocena stejnými laboratorními embryology pomocí digitálních snímků generovaných integrovaným časosběrným zobrazovacím systémem inkubátoru. Hodnocení a bodování bude provedeno podle našeho bodovacího klasifikačního systému. Nejprve bude proveden morfologický screening embryí, aby se vyřadila nebo vyloučila embrya, která zjevně nejsou životaschopná pro přenos. Morfokinetické parametry pak budou použity k seřazení kategorií skóre zbývajících embryí od maximálně 4,0 do minima -2,0 v pořadí podle předpokládaného klesajícího implantačního potenciálu.

Embrya v rameni 3 studie (inkubátor Miri TL) budou morfologicky hodnocena embryology pomocí digitálních snímků generovaných integrovaným časosběrným zobrazovacím systémem inkubátoru. Jak je uvedeno výše, časové body a hodnocené parametry budou totožné s těmi v rameni 1 studie. Shodná budou i rozhodnutí o embryích k transferu.

Pro každého pacienta budou vybrána embrya pro přenos na základě jejich samotného morfologického hodnocení (Skupina 1 a 3) nebo podle skóre morfokinického rozhodovacího stromu (Skupina 2). Počet embryí pro transfer bude předem určen (jak je uvedeno výše).

Embrya, která nebudou vybrána a nebudou považována za vhodná pro budoucí přenos, projdou kryokonzervací vitrifikací.

Zaslepení aktuální studie bude zajištěno ve více bodech. Gynekologové provádějící odběr oocytů a embryotransfer budou zaslepeni na předem definovanou a randomizovanou skupinu pacientek. Pacienti nebudou vědět o své skupině randomizace. Statistici budou také zaslepeni vůči skupině randomizace při výpočtu výsledků těhotenství. U embryologů provádějících morfologická a morfokinetická hodnocení bohužel nebude možné zajistit zaslepení.

Výpočet velikosti vzorku:

Četnost těhotenství na naší IVF jednotce v podskupině pacientek s demografickými a klinickými charakteristikami podobnými těm, které byly zahrnuty do studie, je asi 40 %. Za předpokladu, že ve skupině TLI se míra těhotenství zvýší o 10 %, velikost vzorku požadovaná na skupinu je 124 pacientek na rameno, s rizikem alfa 5 % a sílou 80 %.

Statistika:

Statistická analýza bude provedena podle záměru léčit.