胚培養のタイムラプス インキュベーション - モルフォキネティクスと環境安定性

調査目的：

私たちは今、理論的により良い培養環境へと前進し、胚評価の手段を改善する機会とともに、新しい時代を迎えようとしています。

この調査研究の目的は、Time-Lapse Incubator (TLI) システムによって導入された 2 つの新しい介入のうちの 1 つを分離する際の生殖結果を評価および比較することです。 1 つ目は、標準のベンチ インキュベーター (BI) 環境と比較した TLI 環境の評価です。 2 つ目は、従来の形態学的グレーディングのみと比較して、追加された胚の形態学的グレーディングの評価です。

この研究の主な目的は、臨床妊娠率と新鮮胚移植に焦点を当てていますが、将来的には、この研究から凍結された胚を使用して、卵母細胞ピックアップ (OPU) サイクルごとの累積妊娠率も評価するために、さらなる研究が行われます。

方法 現在の研究は、3 つの患者アームを使用した前向きランダム化二重盲検研究です。 最初のアームには、トライガスベンチインキュベーター（ミリ、ベンチトップマルチルームインキュベーター）での胚培養にランダム化された患者が含まれます。 これらの胚は、受け入れられた基準に従って、光学顕微鏡と従来の形態学的評価を使用して複数の評価を受けます。 2番目のアームには、タイムラプスインキュベーター（ミリTL、タイムラプスインキュベーター）での胚培養にランダム化された患者が含まれます。 これらの胚は TLI に残り、形態学的評価と形態動態学的評価の両方を受け、多変数スコアリング モデルに従ってグレーディングされます。 それらは、培養期間中のインキュベーションから削除されません。 3 番目のアームには、タイムラプス インキュベーター (ミリ TL、タイムラプス インキュベーター) での胚培養に無作為に割り付けられた患者も含まれます。 これらの胚は TLI に残り、追加のイメージングなしで、受け入れられた基準に従って従来の形態学的評価のみを受けます。 それらは、培養期間中のインキュベーションからも削除されません。 時点と評価されたパラメーターは、研究のアーム 1 のものと同じになります。

患者は、当センターでIVF / ICSIサイクルを開始する前に、医師および看護チームによって適合性、包含および除外基準について評価されます。 患者が適格であると判断されたら、ケアチームのメンバーが研究の詳細について患者と話し合います。

承認された研究対象は、標準的な制御された卵巣過剰刺激（COH）を受けます。 プロトコールとそれに対応する投薬は、担当医師の裁量で決定されます。 これらには、ロング ゴナドトロピン放出ホルモン (GnRH) アゴニスト プロトコルと GnRH アンタゴニスト プロトコルが含まれる場合があります。 卵胞吸引は、経膣針吸引を介して IVF ユニットで実行されます。 子宮内膜の準備と黄体期のサポートは、部門のプロトコルに従って推奨されます。 The Israel Society of Obstetrics & Gynecology によると、移植する胚の数は周期開始前に決定されます。

患者の無作為化は、ヒト絨毛性ゴナドトロピン（hCG）の投与がすでに確認された後、細胞質内精子注射（ICSI）の前に行われます。 無作為化手順は、コンピュータ生成の無作為化を使用して達成されます。

卵胞吸引と実験室への移送後、卵胞液は卵母細胞の存在について検査されます。 卵母細胞はその後、成熟度と形態学的に異常な特徴について採点されます。 ICSI は、対応するパートナーからの新鮮な精子を使用して実行されます。

その後、胚を培地に入れます。 培地内の胚は、ランダム化の対応するグループに従って、Miri Benchtop または Miri Timelapse インキュベーターのいずれかに配置されます。 Miri ベンチトップ インキュベーターと Miri TL インキュベーターの環境は同一と見なされることに注意してください。 酸素濃度は5%、二酸化炭素濃度は5.5%に設定。

研究のアーム 1 (Miri Benchtop インキュベーター) の胚は、事前に定義された時点で、訓練を受けた実験室発生学者の 1 人が受け入れた基準に従って、光学顕微鏡によって形態学的に評価されます。 評価の時点は、ICSI 後 16 ～ 20 時間 (通常の受精の場合)、ICSI 後 44 ～ 48 時間 (2 日目)、ICSI 後 64 ～ 72 時間 (3 日目) です。 評価されるパラメーターには、細胞数、細胞サイズ、細胞対称性、および断片化率が含まれます。 あらゆる重大な異常が記録されます。 胚は、これらの評価されたパラメーターに従って 3 日目に等級付けされ、優先的な等級付けに従って転送されます。 胚移植が 5 日目に予定されている場合は、約 116 時間後に追加の評価が行われます。

研究のアーム 2 (Miri TL インキュベーター) の胚は、インキュベーターの統合タイムラプス イメージング システムによって生成されたデジタル画像を使用して、同じ研究所発生学者によって形態学的および形態学的に評価されます。 評価と採点は、当社の採点分類システムに従って行われます。 胚の形態学的スクリーニングは、最初に実施され、明らかに移植に適していない胚を廃棄または除外します。 次に形態動態パラメーターを使用して、残りの胚スコア カテゴリを最大 4.0 から最小 -2.0 にランク付けします。

研究のアーム 3 (Miri TL インキュベーター) の胚は、インキュベーターの統合タイムラプス イメージング システムによって生成されたデジタル画像を使用して、発生学者によって形態学的に評価されます。 上記のように、時点と評価されたパラメーターは、研究のアーム 1 のものと同じになります。 移植のための胚に関する決定も同じです。

各患者について、形態学的スコアリングのみに基づいて (アーム 1 および 3)、または形態学的決定木スコアリング (アーム 2) に基づいて、移植用の胚が選択されます。 移植する胚の数は、あらかじめ決められています (上記のとおり)。

選択されず、将来の移植に適していると見なされなかった胚は、ガラス化による凍結保存を受けます。

現在の研究の盲検化は、複数のポイントで確実に行われます。 卵母細胞の回収と胚移植を行う婦人科医は、事前に定義され無作為化された患者グループに対して盲検化されます。 患者は無作為化のグループを認識しません。 統計学者はまた、妊娠結果を計算する際の無作為化のグループを知らされません。 残念ながら、形態学的および形態動態学的評価を行っている発生学者を確実に盲検化することはできません。

サンプルサイズの計算:

研究に含まれるものと同様の人口統計学的および臨床的特徴を持つ患者のサブグループのIVFユニットでの妊娠率は、約40％です。 TLI グループの妊娠率が 10% 増加すると仮定すると、グループごとに必要なサンプル サイズは、アームごとに 124 人の患者で、アルファ リスクは 5%、検出力は 80% です。

統計：

統計分析は、治療の意図によって行われます。