Time-lapse inkubation til embryokultur - morfokinetik og miljøstabilitet

Forskningsmål:

Vi er nu ved at nå en ny tidsalder med en mulighed for at avancere til teoretisk bedre kulturmiljøer og forbedringer af foranstaltninger til embryovurdering.

Formålet med denne forskningsundersøgelse vil være at evaluere og sammenligne de reproduktive resultater ved at isolere en af ​​to nye interventioner introduceret af Time-Lapse Incubator (TLI) systemet. Den første vil være en vurdering af TLI miljøet sammenlignet med standard Bench Incubator (BI) miljøet. Den anden vil være en vurdering af den tilføjede morfokinetiske gradering af embryoner sammenlignet med den traditionelle morfologiske gradering alene.

Selvom det primære formål med denne undersøgelse vil fokusere på kliniske graviditetsrater og friske embryooverførsler, vil yderligere forskning ved hjælp af embryoner frosset fra denne undersøgelse blive udført for også at evaluere kumulative graviditetsrater pr. oocytopsamlingscyklus (OPU) i fremtiden.

Metoder Det aktuelle studie vil være et prospektivt randomiseret og dobbeltblindet studie med tre patientarme. Den første arm vil omfatte patienter randomiseret til embryokultur i en tri-gas bænk-inkubator (Miri, Benchtop Multi-room incubator). Disse embryoner vil gennemgå flere evalueringer ved hjælp af lysmikroskopi og traditionel morfologisk vurdering i henhold til accepterede kriterier. Den anden arm vil omfatte patienter randomiseret til embryokultur i en time-lapse inkubator (Miri TL, Time-Lapse Incubator). Disse embryoner vil forblive i TLI og gennemgå både morfologisk og morfokinetisk evaluering og klassificering i henhold til en multivariabel scoringsmodel. De vil ikke blive fjernet fra inkubation under dyrkningens varighed. Den tredje arm vil omfatte patienter, der også er randomiseret til embryokultur i en time-lapse-inkubator (Miri TL, Time-Lapse Incubator). Disse embryoner forbliver i TLI og gennemgår kun traditionel morfologisk vurdering i henhold til accepterede kriterier uden yderligere billeddannelse. De vil heller ikke blive fjernet fra inkubation under dyrkningens varighed. Tidspunkterne og de evaluerede parametre vil være identiske med dem i arm 1 af undersøgelsen.

Patienter vil blive vurderet for egnetheds-, inklusions- og eksklusionskriterier af lægen og plejeteamet inden påbegyndelse af en IVF/ICSI-cyklus på vores center. Når patienten anses for at være kvalificeret, vil et medlem af plejeteamet diskutere detaljerne i undersøgelsen med patienten.

Godkendte forsøgspersoner vil gennemgå standard kontrolleret ovariehyperstimulering (COH). Protokoller og deres tilsvarende medicin vil blive besluttet efter den behandlende læges skøn. Disse kan omfatte lang gonadotropin-frigivende hormon (GnRH) agonistprotokol og GnRH-antagonistprotokol. Follikulær aspiration vil blive udført i IVF-enheden via transvaginal nålespiration. Endometrieforberedelse og lutealfasestøtte vil blive anbefalet i henhold til vores afdelingsprotokol. Antallet af embryoner til overførsel vil blive defineret før cyklusstart, ifølge The Israel Society of Obstetrics & Gynecology.

Patientrandomisering vil ske, efter administration af humant choriongonadotropin (hCG) allerede er sikret, før intracytoplasmatisk spermainjektion (ICSI). Randomiseringsproceduren vil blive udført ved hjælp af computergenereret randomisering.

Efter follikulær aspiration og overførsel til laboratoriet vil follikulærvæsken blive undersøgt for tilstedeværelse af oocytter. Oocytter vil derefter blive bedømt for modenhed og eventuelle morfologisk unormale træk. ICSI vil derefter blive udført med frisk sæd fra den tilsvarende partner.

Embryoer vil derefter blive placeret i kulturmedier. Embryonerne i kulturmedier vil derefter blive placeret i enten Miri Benchtop eller Miri Timelapse inkubatoren i henhold til deres tilsvarende gruppe af randomisering. Bemærk, at miljøet i Miri-bord- og Miri TL-inkubatorerne vil blive betragtet som identiske. iltkoncentration og kuldioxidkoncentrationer sat til henholdsvis 5 % og 5,5 %.

Embryoer i arm 1 af undersøgelsen (Miri Benchtop inkubator) vil blive morfologisk vurderet ved lysmikroskopi på foruddefinerede tidspunkter og i henhold til accepterede kriterier af en af ​​de uddannede laboratorieembryologer. Tidspunkterne for evaluering vil være 16 - 20 timer efter ICSI (for normal befrugtning), 44 - 48 timer (dag 2) efter ICSI og derefter 64 - 72 timer (dag 3) efter ICSI. Evaluerede parametre vil omfatte celleantal, cellestørrelse, cellesymmetri og procentvis fragmentering. Eventuelle grove abnormiteter vil blive noteret. Embryoer vil derefter blive klassificeret på dag 3 i henhold til disse evaluerede parametre og overført i henhold til præferenceklassificering. Hvis embryooverførsel er forudbestemt til dag 5, vil yderligere vurdering finde sted efter ca. 116 timer.

Embryoer i arm 2 af undersøgelsen (Miri TL-inkubator) vil blive morfologisk og morfokinetisk vurderet af de samme laboratorie-embryologer ved hjælp af digitale billeder genereret af inkubatorens integrerede time-lapse-billeddannelsessystem. Vurdering og scoring vil blive udført i henhold til vores scoringsklassifikationssystem. Morfologisk screening af embryoner vil indledningsvis blive udført for at kassere eller udelukke dem, der klart ikke er levedygtige for overførsel. Morfokinetiske parametre vil derefter blive brugt til at rangere resterende embryos scorekategorier fra et maksimum på 4,0 til et minimum på -2,0 i rækkefølge efter hypotese om faldende implantationspotentiale.

Embryoer i arm 3 af undersøgelsen (Miri TL inkubator) vil blive morfologisk vurderet af embryologerne ved hjælp af digitale billeder genereret af inkubatorens integrerede time-lapse billeddannelsessystem. Som nævnt ovenfor vil tidspunkterne og de evaluerede parametre være identiske med dem i arm 1 af undersøgelsen. Beslutninger om embryoner til overførsel vil også være identiske.

For hver patient vil embryoner blive udvalgt til overførsel baseret på deres morfologiske scoring alene (arm 1 og 3) eller ved den morfokinetiske beslutningstræ-scoring (arm 2). Antallet af embryoner til overførsel vil være forudbestemt (som nævnt ovenfor).

De embryoner, der ikke er udvalgt og anses for passende til fremtidig overførsel, vil undergå kryokonservering ved forglasning.

Blænding af den nuværende undersøgelse vil blive sikret på flere punkter. De gynækologer, der udfører oocytudtagning og embryooverførsel, vil blive blindet for den foruddefinerede og randomiserede patientgruppe. Patienter vil være uvidende om deres gruppe af randomisering. Statistikere vil også blive blindet for gruppen af ​​randomisering ved beregning af graviditetsresultater. Det vil desværre ikke være muligt at sikre blinding af de embryologer, der udfører de morfologiske og morfokinetiske vurderinger.

Beregning af prøvestørrelse:

Graviditetsraten i vores IVF-enhed i undergruppen af ​​patienter med demografiske og kliniske karakteristika svarende til dem, der er inkluderet i undersøgelsen, er omkring 40 %. Hvis det antages, at graviditetsraten i TLI-gruppen vil stige med 10 %, er den nødvendige stikprøvestørrelse pr. gruppe 124 patienter pr. arm, med en alfarisiko på 5 % og en styrke på 80 %.

Statistikker:

Den statistiske analyse vil blive udført med intention om at behandle.