Incubação Time-Lapse para Cultura de Embriões - Morfocinética e Estabilidade Ambiental

Objetivos de pesquisa:

Agora estamos alcançando uma nova era com a oportunidade de avançar para ambientes de cultura teoricamente melhores e melhorias nas medidas de avaliação de embriões.

Os objetivos deste estudo de pesquisa serão avaliar e comparar os resultados reprodutivos no isolamento de uma das duas novas intervenções introduzidas pelo sistema Time-Lapse Incubator (TLI). A primeira será uma avaliação do ambiente TLI em comparação com o ambiente padrão da Bench Incubator (BI). A segunda será uma avaliação da classificação morfocinética adicionada de embriões em comparação com a classificação morfológica tradicional sozinha.

Embora o objetivo principal deste estudo se concentre nas taxas de gravidez clínica e transferências de embriões frescos, pesquisas adicionais usando embriões congelados deste estudo serão realizadas para também avaliar as taxas de gravidez cumulativas por ciclo de captação de oócitos (OPU) no futuro.

Métodos O estudo atual será um estudo prospectivo randomizado e duplo-cego usando três braços de pacientes. O primeiro braço incluirá pacientes randomizados para cultura de embriões em uma incubadora de bancada trigás (Miri, Benchtop Multi-room incubator). Esses embriões serão submetidos a múltiplas avaliações usando microscopia de luz e avaliação morfológica tradicional de acordo com critérios aceitos. O segundo braço incluirá pacientes randomizados para cultura de embriões em uma incubadora de lapso de tempo (Miri TL, incubadora de lapso de tempo). Esses embriões permanecerão no TLI e passarão por avaliação morfológica e morfocinética e classificação de acordo com um modelo de pontuação multivariável. Eles não serão removidos da incubação durante a cultura. O terceiro braço incluirá pacientes também randomizados para cultura de embriões em uma incubadora de lapso de tempo (Miri TL, Time-Lapse Incubator). Esses embriões permanecerão no TLI e serão submetidos apenas à avaliação morfológica tradicional de acordo com os critérios aceitos, sem imagens adicionais. Eles também não serão removidos da incubação durante a cultura. Os pontos de tempo e os parâmetros avaliados serão idênticos aos do braço 1 do estudo.

Os pacientes serão avaliados quanto à adequação, critérios de inclusão e exclusão pelo médico e pela equipe de enfermagem antes do início de um ciclo de fertilização in vitro/ICSI em nosso centro. Assim que o paciente for considerado elegível, um membro da equipe de atendimento discutirá os detalhes do estudo com o paciente.

As participantes do estudo aprovadas serão submetidas a hiperestimulação ovariana controlada padrão (COH). Os protocolos e suas respectivas medicações serão decididos a critério do médico assistente. Estes podem incluir protocolo longo de agonista do hormônio liberador de gonadotropina (GnRH) e protocolo de antagonista de GnRH. A aspiração folicular será realizada na unidade de fertilização in vitro por meio de aspiração transvaginal com agulha. A preparação endometrial e o suporte da fase lútea serão recomendados de acordo com nosso protocolo departamental. O número de embriões para transferência será definido antes do início do ciclo, de acordo com a Sociedade Israelita de Obstetrícia e Ginecologia.

A randomização dos pacientes ocorrerá após a administração de Gonadotrofina Coriônica Humana (hCG) já ter sido assegurada, antes da Injeção Intracitoplasmática de Espermatozoides (ICSI). O procedimento de randomização será realizado usando randomização gerada por computador.

Após aspiração folicular e transferência para o laboratório, o líquido folicular será examinado quanto à presença de ovócitos. Os oócitos serão então avaliados quanto à maturidade e quaisquer características morfologicamente anormais. A ICSI será então realizada com esperma fresco do parceiro correspondente.

Os embriões serão então colocados em meios de cultura. Os embriões dentro do meio de cultura serão então colocados na incubadora Miri Benchtop ou Miri Timelapse de acordo com seu grupo correspondente de randomização. Observe que o ambiente das incubadoras de bancada Miri e Miri TL serão considerados idênticos. concentração de oxigênio e concentrações de dióxido de carbono fixadas em 5% e 5,5%, respectivamente.

Os embriões no braço 1 do estudo (incubadora de bancada Miri) serão avaliados morfologicamente por microscopia de luz em pontos de tempo pré-definidos e de acordo com critérios aceitos por um dos embriologistas de laboratório treinados. Os pontos de tempo para avaliação serão 16 - 20 horas pós-ICSI (para fertilização normal), 44 - 48 horas (dia 2) pós-ICSI e, em seguida, 64 - 72 horas (dia 3) pós-ICSI. Os parâmetros avaliados incluirão número de células, tamanho da célula, simetria da célula e fragmentação percentual. Qualquer anormalidade grosseira será anotada. Os embriões serão classificados no dia 3 de acordo com esses parâmetros avaliados e transferidos de acordo com a classificação preferencial. Se a transferência do embrião tiver sido predeterminada para o dia 5, uma avaliação adicional ocorrerá aproximadamente às 116 horas.

Os embriões no braço 2 do estudo (incubadora Miri TL) serão avaliados morfologicamente e morfocineticamente pelos mesmos embriologistas de laboratório, usando imagens digitais geradas pelo sistema de imagem de lapso de tempo integrado da incubadora. A avaliação e pontuação serão realizadas de acordo com nosso sistema de classificação de pontuação. A triagem morfológica dos embriões será inicialmente realizada a fim de descartar ou excluir aqueles claramente inviáveis ​​para transferência. Os parâmetros morfocinéticos serão então usados ​​para classificar as categorias de pontuação dos embriões remanescentes de um máximo de 4,0 a um mínimo de -2,0, em ordem hipotética de diminuição do potencial de implantação.

Os embriões no braço 3 do estudo (incubadora Miri TL) serão avaliados morfologicamente pelos embriologistas usando imagens digitais geradas pelo sistema de imagem de lapso de tempo integrado da incubadora. Conforme observado acima, os pontos de tempo e os parâmetros avaliados serão idênticos aos do braço 1 do estudo. As decisões sobre embriões para transferência também serão idênticas.

Para cada paciente, os embriões serão selecionados para transferência com base apenas em sua pontuação morfológica (Arm 1 e 3) ou pela pontuação da árvore de decisão morfocinética (Arm 2). O número de embriões para transferência terá sido pré-determinado (conforme observado acima).

Os embriões não selecionados e considerados adequados para futura transferência serão submetidos à criopreservação por vitrificação.

O cegamento do estudo atual será assegurado em vários pontos. Os ginecologistas que realizam a coleta de oócitos e a transferência de embriões serão cegos para o grupo de pacientes predefinido e randomizado. Os pacientes não terão conhecimento de seu grupo de randomização. Os estatísticos também serão cegos para o grupo de randomização no cálculo dos resultados da gravidez. Infelizmente, não será possível garantir o cegamento dos embriologistas que realizam as avaliações morfológicas e morfocinéticas.

Cálculo do tamanho da amostra:

A taxa de gravidez na nossa Unidade de FIV, no subgrupo de doentes com características demográficas e clínicas semelhantes às incluídas no estudo, é de cerca de 40%. Assumindo que no grupo TLI a taxa de gravidez aumentará em 10%, o tamanho da amostra necessário por grupo é de 124 pacientes por braço, com um risco alfa de 5% e um poder de 80%.

Estatisticas:

A análise estatística será feita por intenção de tratar.