Incubazione time-lapse per coltura embrionale - Morfocinetica e stabilità ambientale

Gli obiettivi della ricerca:

Ora stiamo raggiungendo una nuova era con l'opportunità di avanzare verso ambienti di coltura teoricamente migliori e miglioramenti sulle misure di valutazione degli embrioni.

Gli obiettivi di questo studio di ricerca saranno valutare e confrontare i risultati riproduttivi nell'isolare uno dei due nuovi interventi introdotti dal sistema Time-Lapse Incubator (TLI). Il primo sarà una valutazione dell'ambiente TLI rispetto all'ambiente Bench Incubator (BI) standard. Il secondo sarà una valutazione del grading morfocinetico aggiunto degli embrioni rispetto al solo grading morfologico tradizionale.

Sebbene l'obiettivo principale di questo studio si concentri sui tassi di gravidanza clinica e sui trasferimenti di embrioni freschi, saranno condotte ulteriori ricerche utilizzando embrioni congelati da questo studio per valutare anche i tassi di gravidanza cumulativi per ciclo di prelievo di ovociti (OPU) in futuro.

Metodi L'attuale studio sarà uno studio prospettico randomizzato e in doppio cieco utilizzando tre bracci di pazienti. Il primo braccio includerà pazienti randomizzati alla coltura dell'embrione in un incubatore da banco tri-gas (Miri, incubatore multi-room da banco). Questi embrioni saranno sottoposti a valutazioni multiple utilizzando la microscopia ottica e la valutazione morfologica tradizionale secondo criteri accettati. Il secondo braccio includerà pazienti randomizzati alla coltura di embrioni in un incubatore time-lapse (Miri TL, Time-Lapse Incubator). Questi embrioni rimarranno nel TLI e saranno sottoposti a valutazione e classificazione sia morfologica che morfocinetica secondo un modello di punteggio multivariato. Non saranno rimossi dall'incubazione per la durata della coltura. Il terzo braccio includerà anche pazienti randomizzati alla coltura di embrioni in un incubatore time-lapse (Miri TL, Time-Lapse Incubator). Questi embrioni rimarranno nel TLI e saranno sottoposti solo alla tradizionale valutazione morfologica secondo criteri accettati senza ulteriori immagini. Inoltre, non verranno rimossi dall'incubazione per la durata della coltura. I punti temporali e i parametri valutati saranno identici a quelli del braccio 1 dello studio.

I pazienti saranno valutati per criteri di idoneità, inclusione ed esclusione dal medico e dal team infermieristico prima dell'inizio di un ciclo di fecondazione in vitro/ICSI presso il nostro centro. Una volta che il paziente è ritenuto idoneo, un membro del team di assistenza discuterà i dettagli dello studio con il paziente.

I soggetti dello studio approvati saranno sottoposti a iperstimolazione ovarica controllata standard (COH). I protocolli ei relativi farmaci saranno decisi a discrezione del medico curante. Questi possono includere il protocollo dell'agonista dell'ormone di rilascio delle gonadotropine lunghe (GnRH) e il protocollo dell'antagonista del GnRH. L'aspirazione follicolare verrà eseguita nell'unità di fecondazione in vitro tramite agoaspirazione transvaginale. La preparazione dell'endometrio e il supporto della fase luteale saranno raccomandati secondo il nostro protocollo dipartimentale. Il numero di embrioni per il trasferimento sarà definito prima dell'inizio del ciclo, secondo The Israel Society of Obstetrics & Gynecology.

La randomizzazione dei pazienti avverrà dopo che la somministrazione di gonadotropina corionica umana (hCG) è già stata assicurata, prima dell'iniezione intracitoplasmatica di spermatozoi (ICSI). La procedura di randomizzazione verrà eseguita utilizzando la randomizzazione generata dal computer.

Dopo l'aspirazione follicolare e il trasferimento in laboratorio, il fluido follicolare verrà esaminato per la presenza di ovociti. Gli ovociti verranno quindi valutati per maturità e per qualsiasi caratteristica morfologicamente anomala. L'ICSI verrà quindi eseguita utilizzando lo sperma fresco del partner corrispondente.

Gli embrioni verranno quindi collocati nei terreni di coltura. Gli embrioni all'interno dei terreni di coltura verranno quindi collocati nell'incubatore Miri Benchtop o Miri Timelapse in base al corrispondente gruppo di randomizzazione. Si noti che l'ambiente degli incubatori da banco Miri e Miri TL sarà considerato identico. concentrazione di ossigeno e concentrazioni di anidride carbonica fissate rispettivamente al 5% e al 5,5%.

Gli embrioni nel braccio 1 dello studio (incubatore da banco Miri) saranno valutati morfologicamente mediante microscopia ottica in punti temporali predefiniti e secondo criteri accettati da uno degli embriologi di laboratorio addestrati. I punti temporali per la valutazione saranno a 16-20 ore post-ICSI (per la fertilizzazione normale), a 44-48 ore (giorno 2) post-ICSI e quindi a 64-72 ore (giorno 3) post-ICSI. I parametri valutati includeranno il numero di cella, la dimensione della cella, la simmetria della cella e la frammentazione percentuale. Eventuali anomalie grossolane saranno annotate. Gli embrioni verranno quindi classificati il ​​giorno 3 in base a questi parametri valutati e trasferiti in base alla classificazione preferenziale. Se il trasferimento dell'embrione è stato predeterminato per il giorno 5, un'ulteriore valutazione avrà luogo a circa 116 ore.

Gli embrioni nel braccio 2 dello studio (incubatore Miri TL) saranno valutati morfologicamente e morfocineticamente dagli stessi embriologi del laboratorio utilizzando immagini digitali generate dal sistema integrato di imaging time-lapse dell'incubatore. La valutazione e il punteggio saranno eseguiti secondo il nostro sistema di classificazione dei punteggi. Lo screening morfologico degli embrioni verrà inizialmente eseguito al fine di scartare o escludere quelli chiaramente non idonei al trasferimento. I parametri morfocinetici verranno quindi utilizzati per classificare le categorie di punteggio degli embrioni rimanenti da un massimo di 4.0 a un minimo di -2.0, in ordine di ipotetico potenziale decrescente di impianto.

Gli embrioni nel braccio 3 dello studio (incubatore Miri TL) saranno valutati morfologicamente dagli embriologi utilizzando immagini digitali generate dal sistema integrato di imaging time-lapse dell'incubatore. Come notato sopra, i punti temporali e i parametri valutati saranno identici a quelli del braccio 1 dello studio. Anche le decisioni sugli embrioni da trasferire saranno identiche.

Per ogni paziente, gli embrioni saranno selezionati per il trasferimento in base al solo punteggio morfologico (Braccio 1 e 3) o in base al punteggio dell'albero decisionale morfocinetico (Braccio 2). Il numero di embrioni per il trasferimento sarà stato predeterminato (come indicato sopra).

Gli embrioni non selezionati e ritenuti idonei per il futuro trasferimento saranno sottoposti a crioconservazione mediante vetrificazione.

L'accecamento dello studio in corso sarà assicurato in più punti. I ginecologi che eseguono il prelievo di ovociti e il trasferimento di embrioni saranno all'oscuro del gruppo di pazienti predefinito e randomizzato. I pazienti non saranno a conoscenza del loro gruppo di randomizzazione. Gli statistici saranno anche ciechi rispetto al gruppo di randomizzazione nel calcolo degli esiti della gravidanza. Purtroppo non sarà possibile garantire l'accecamento di quegli embriologi che eseguono le valutazioni morfologiche e morfocinetiche.

Calcolo della dimensione del campione:

Il tasso di gravidanza nella nostra Unità IVF nel sottogruppo di pazienti con caratteristiche demografiche e cliniche simili a quelle incluse nello studio, è di circa il 40%. Supponendo che nel gruppo TLI il tasso di gravidanza aumenti del 10%, la dimensione del campione richiesta per gruppo è di 124 pazienti per braccio, con un rischio alfa del 5% e una potenza dell'80%.

Statistiche:

L'analisi statistica sarà effettuata per intenzione di trattare.