Incubación de lapso de tiempo para el cultivo de embriones: morfocinética y estabilidad ambiental

Investigar objetivos:

Ahora estamos llegando a una nueva era con la oportunidad de avanzar hacia entornos de cultivo teóricamente mejores y mejoras en las medidas de evaluación de embriones.

Los objetivos de este estudio de investigación serán evaluar y comparar los resultados reproductivos al aislar una de las dos nuevas intervenciones introducidas por el sistema Time-Lapse Incubator (TLI). La primera será una evaluación del entorno TLI en comparación con el entorno estándar de Bench Incubator (BI). El segundo será una evaluación de la clasificación morfocinética adicional de los embriones en comparación con la clasificación morfológica tradicional sola.

Aunque el objetivo principal de este estudio se centrará en las tasas de embarazo clínico y las transferencias de embriones frescos, se realizarán más investigaciones con embriones congelados de este estudio para evaluar también las tasas de embarazo acumulativas por ciclo de recogida de ovocitos (OPU) en el futuro.

Métodos El estudio actual será un estudio prospectivo, aleatorizado y doble ciego utilizando tres brazos de pacientes. El primer brazo incluirá pacientes aleatorizados para el cultivo de embriones en una incubadora de mesa de tres gases (Miri, Benchtop Multi-room incubator). Estos embriones se someterán a múltiples evaluaciones utilizando microscopía óptica y evaluación morfológica tradicional de acuerdo con los criterios aceptados. El segundo brazo incluirá pacientes aleatorizados para el cultivo de embriones en una incubadora de lapso de tiempo (Miri TL, Incubadora de lapso de tiempo). Estos embriones permanecerán en el TLI y se someterán a una evaluación y clasificación morfológica y morfocinética según un modelo de puntuación multivariable. No se eliminarán de la incubación mientras dure el cultivo. El tercer grupo incluirá pacientes que también se aleatorizarán para el cultivo de embriones en una incubadora de lapso de tiempo (Miri TL, Incubadora de lapso de tiempo). Estos embriones permanecerán en el TLI y solo se someterán a una evaluación morfológica tradicional de acuerdo con los criterios aceptados sin imágenes adicionales. Tampoco se retirarán de la incubación durante la duración del cultivo. Los puntos de tiempo y los parámetros evaluados serán idénticos a los del brazo 1 del estudio.

El médico y el equipo de enfermería evaluarán los criterios de idoneidad, inclusión y exclusión de los pacientes antes de iniciar un ciclo de FIV/ICSI en nuestro centro. Una vez que se considere que el paciente es elegible, un miembro del equipo de atención analizará los detalles del estudio con el paciente.

Los sujetos de estudio aprobados se someterán a hiperestimulación ovárica controlada estándar (HOC). Los protocolos y sus correspondientes medicamentos serán decididos a criterio del médico tratante. Estos pueden incluir un protocolo de agonista prolongado de la hormona liberadora de gonadotropina (GnRH) y un protocolo de antagonista de GnRH. La aspiración folicular se realizará en la unidad de FIV mediante aspiración con aguja transvaginal. Se recomendará la preparación del endometrio y el soporte de la fase lútea según nuestro protocolo departamental. El número de embriones para transferir se definirá antes del inicio del ciclo, según la Sociedad de Obstetricia y Ginecología de Israel.

La aleatorización de los pacientes se realizará después de que se haya asegurado la administración de gonadotropina coriónica humana (hCG), antes de la inyección intracitoplasmática de espermatozoides (ICSI). El procedimiento de aleatorización se realizará mediante aleatorización generada por computadora.

Después de la aspiración folicular y la transferencia al laboratorio, se examinará el líquido folicular para detectar la presencia de ovocitos. A continuación, se evaluará la madurez de los ovocitos y cualquier característica morfológicamente anormal. A continuación, se realizará la ICSI con semen fresco de la pareja correspondiente.

A continuación, los embriones se colocarán en medios de cultivo. Los embriones dentro de los medios de cultivo se colocarán en la incubadora Miri Benchtop o Miri Timelapse según su grupo de aleatorización correspondiente. Tenga en cuenta que el entorno de las incubadoras Miri de sobremesa y Miri TL se considerará idéntico. concentración de oxígeno y concentraciones de dióxido de carbono fijadas en 5% y 5,5% respectivamente.

Los embriones en el brazo 1 del estudio (incubadora Miri Benchtop) serán evaluados morfológicamente por microscopía óptica en puntos de tiempo predefinidos y de acuerdo con los criterios aceptados por uno de los embriólogos de laboratorio capacitados. Los puntos de tiempo para la evaluación serán a las 16 - 20 horas post-ICSI (para fertilización normal), a las 44 - 48 horas (día 2) post-ICSI, y luego a las 64 - 72 horas (día 3) post-ICSI. Los parámetros evaluados incluirán el número de celdas, el tamaño de las celdas, la simetría de las celdas y el porcentaje de fragmentación. Se anotará cualquier anormalidad grave. A continuación, los embriones se clasificarán el día 3 según estos parámetros evaluados y se transferirán según la clasificación preferencial. Si se ha predeterminado la transferencia de embriones para el día 5, se realizará una evaluación adicional aproximadamente a las 116 horas.

Los embriólogos del brazo 2 del estudio (incubadora Miri TL) serán evaluados morfológica y morfocinéticamente por los mismos embriólogos del laboratorio utilizando imágenes digitales generadas por el sistema de imágenes de lapso de tiempo integrado de la incubadora. La evaluación y la puntuación se realizarán según nuestro sistema de clasificación de puntuación. Inicialmente se realizará un cribado morfológico de los embriones con el fin de descartar o excluir aquellos que claramente no sean viables para la transferencia. A continuación, se utilizarán parámetros morfocinéticos para clasificar las categorías de puntuación de los embriones restantes desde un máximo de 4,0 hasta un mínimo de -2,0, en orden de hipotético potencial de implantación decreciente.

Los embriólogos en el brazo 3 del estudio (incubadora Miri TL) serán evaluados morfológicamente por los embriólogos utilizando imágenes digitales generadas por el sistema de imágenes de lapso de tiempo integrado de la incubadora. Como se señaló anteriormente, los puntos de tiempo y los parámetros evaluados serán idénticos a los del brazo 1 del estudio. Las decisiones sobre embriones para transferencia también serán idénticas.

Para cada paciente, los embriones se seleccionarán para la transferencia en función únicamente de su puntuación morfológica (Brazo 1 y 3) o mediante la puntuación del árbol de decisiones morfocinéticas (Brazo 2). El número de embriones para la transferencia habrá sido predeterminado (como se indicó anteriormente).

Aquellos embriones no seleccionados y considerados aptos para una futura transferencia serán sometidos a criopreservación por vitrificación.

El cegamiento del estudio actual se asegurará en múltiples puntos. Los ginecólogos que realizan la recuperación de ovocitos y la transferencia de embriones no conocerán el grupo de pacientes predefinido y aleatorizado. Los pacientes no serán conscientes de su grupo de aleatorización. Los estadísticos también estarán cegados al grupo de aleatorización al calcular los resultados del embarazo. Lamentablemente, no será posible garantizar el cegamiento de los embriólogos que realizan las evaluaciones morfológicas y morfocinéticas.

Cálculo del tamaño de la muestra:

La tasa de embarazo en nuestra Unidad de FIV en el subgrupo de pacientes con características demográficas y clínicas similares a las incluidas en el estudio, se sitúa en torno al 40%. Suponiendo que en el grupo TLI la tasa de embarazo aumente un 10 %, el tamaño de muestra necesario por grupo es de 124 pacientes por brazo, con un riesgo alfa del 5 % y una potencia del 80 %.

Estadísticas:

El análisis estadístico se hará por intención de tratar.