Inkubacja poklatkowa dla hodowli zarodków - morfokinetyka i stabilność środowiska

Cele badań:

Obecnie wkraczamy w nową erę z możliwością przejścia do teoretycznie lepszych środowisk hodowlanych i ulepszeń w zakresie środków oceny zarodków.

Celem tego badania będzie ocena i porównanie wyników reprodukcyjnych w izolacji jednej z dwóch nowych interwencji wprowadzonych przez system Time-Lapse Incubator (TLI). Pierwszym będzie ocena środowiska TLI w porównaniu ze standardowym środowiskiem Bench Incubator (BI). Drugim będzie ocena dodanej oceny morfokinetycznej zarodków w porównaniu z samą klasyfikacją morfologiczną.

Chociaż głównym celem tego badania będzie skupienie się na wskaźnikach ciąż klinicznych i transferach świeżych zarodków, dalsze badania z wykorzystaniem zamrożonych zarodków z tego badania zostaną przeprowadzone w celu oceny skumulowanych wskaźników ciąż na cykl pobierania oocytów (OPU) w przyszłości.

Metody Obecne badanie będzie prospektywnym, randomizowanym i podwójnie zaślepionym badaniem z udziałem trzech grup pacjentów. Pierwsza grupa obejmie pacjentów przydzielonych losowo do hodowli zarodków w inkubatorze trójgazowym (Miri, inkubator Benchtop Multi-room). Zarodki te zostaną poddane wielokrotnej ocenie przy użyciu mikroskopii świetlnej i tradycyjnej oceny morfologicznej zgodnie z przyjętymi kryteriami. Drugie ramię obejmie pacjentów przydzielonych losowo do hodowli zarodków w inkubatorze poklatkowym (Miri TL, Time-Lapse Incubator). Te zarodki pozostaną w TLI i przejdą zarówno ocenę morfologiczną, jak i morfokinetyczną oraz klasyfikację zgodnie z wielowymiarowym modelem punktacji. Nie zostaną usunięte z inkubacji na czas trwania hodowli. Trzecie ramię obejmie również pacjentów przydzielonych losowo do hodowli zarodków w inkubatorze poklatkowym (Miri TL, Time-Lapse Incubator). Zarodki te pozostaną w TLI i zostaną poddane jedynie tradycyjnej ocenie morfologicznej zgodnie z przyjętymi kryteriami, bez dodatkowego obrazowania. Nie zostaną również usunięte z inkubacji na czas trwania hodowli. Punkty czasowe i oceniane parametry będą identyczne jak w ramieniu 1 badania.

Pacjenci będą oceniani pod kątem przydatności, kryteriów włączenia i wyłączenia przez lekarza i zespół pielęgniarski przed rozpoczęciem cyklu IVF/ICSI w naszym ośrodku. Gdy pacjent zostanie uznany za kwalifikującego się, członek zespołu opieki omówi z pacjentem szczegóły badania.

Zatwierdzone osoby do badania zostaną poddane standardowej kontrolowanej hiperstymulacji jajników (COH). Protokoły i odpowiadające im leki zostaną ustalone według uznania lekarza prowadzącego. Mogą one obejmować protokół długiego agonisty hormonu uwalniającego gonadotropinę (GnRH) i protokół antagonisty GnRH. Aspiracja pęcherzyków zostanie przeprowadzona na oddziale IVF przezpochwową aspirację igłą. Przygotowanie endometrium i wspomaganie fazy lutealnej będą zalecane zgodnie z naszym protokołem oddziałowym. Liczba zarodków do przeniesienia zostanie określona przed rozpoczęciem cyklu, zgodnie z Izraelskim Towarzystwem Położnictwa i Ginekologii.

Randomizacja pacjentów nastąpi po zapewnieniu podania ludzkiej gonadotropiny kosmówkowej (hCG) przed wykonaniem docytoplazmatycznej iniekcji plemnika (ICSI). Procedura randomizacji zostanie przeprowadzona przy użyciu randomizacji generowanej komputerowo.

Po aspiracji pęcherzyków i przekazaniu do laboratorium płyn pęcherzykowy zostanie zbadany na obecność oocytów. Oocyty zostaną następnie ocenione pod kątem dojrzałości i wszelkich nieprawidłowych cech morfologicznych. ICSI zostanie następnie przeprowadzone przy użyciu świeżego nasienia od odpowiedniego partnera.

Embriony zostaną następnie umieszczone w pożywkach hodowlanych. Zarodki w pożywce hodowlanej zostaną następnie umieszczone w inkubatorze Miri Benchtop lub Miri Timelapse zgodnie z odpowiednią grupą randomizacji. Należy pamiętać, że środowisko inkubatorów stołowych Miri i Miri TL będzie uważane za identyczne. stężenia tlenu i stężenia dwutlenku węgla ustawione odpowiednio na 5% i 5,5%.

Zarodki w ramieniu 1 badania (inkubator Miri Benchtop) zostaną ocenione morfologicznie za pomocą mikroskopii świetlnej we wcześniej określonych punktach czasowych i zgodnie z przyjętymi kryteriami przez jednego z przeszkolonych embriologów laboratoryjnych. Punktami czasowymi oceny będą 16 - 20 godzin po ICSI (w przypadku normalnego zapłodnienia), 44 - 48 godzin (dzień 2) po ICSI, a następnie 64 - 72 godziny (dzień 3) po ICSI. Oceniane parametry będą obejmować liczbę komórek, rozmiar komórek, symetrię komórek i procent fragmentacji. Wszelkie poważne nieprawidłowości zostaną odnotowane. Zarodki będą następnie oceniane w dniu 3 zgodnie z tymi ocenionymi parametrami i przenoszone zgodnie z preferencyjną oceną. Jeśli transfer zarodków został ustalony na dzień 5, dodatkowa ocena odbędzie się około 116 godzin.

Zarodki w ramieniu 2 badania (inkubator Miri TL) zostaną ocenione morfologicznie i morfokinetycznie przez tych samych embriologów laboratoryjnych z wykorzystaniem obrazów cyfrowych generowanych przez zintegrowany system obrazowania poklatkowego inkubatora. Ocena i punktacja zostaną przeprowadzone zgodnie z naszym systemem klasyfikacji punktowej. Morfologiczne badania przesiewowe zarodków będą początkowo przeprowadzane w celu odrzucenia lub wykluczenia tych, które wyraźnie nie nadają się do transferu. Parametry morfokinetyczne zostaną następnie wykorzystane do uszeregowania pozostałych kategorii punktacji zarodków od maksimum 4,0 do minimum -2,0, w kolejności hipotetycznego malejącego potencjału implantacji.

Zarodki w ramieniu 3 badania (inkubator Miri TL) zostaną ocenione morfologicznie przez embriologów przy użyciu obrazów cyfrowych generowanych przez zintegrowany system obrazowania poklatkowego inkubatora. Jak wspomniano powyżej, punkty czasowe i oceniane parametry będą identyczne jak w ramieniu 1 badania. Identyczne będą również decyzje dotyczące zarodków do transferu.

W przypadku każdego pacjenta zarodki zostaną wybrane do transferu na podstawie samej oceny morfologicznej (Ramię 1 i 3) lub na podstawie oceny drzewa decyzyjnego morfokinetyki (Ramię 2). Liczba zarodków do przeniesienia zostanie wcześniej ustalona (jak wspomniano powyżej).

Te zarodki, które nie zostaną wybrane i uznane za odpowiednie do przyszłego transferu, zostaną poddane kriokonserwacji przez witryfikację.

Zaślepienie bieżącego badania zostanie zapewnione w wielu punktach. Ginekolodzy wykonujący pobieranie oocytów i transfer zarodków będą zaślepieni na wcześniej zdefiniowaną i randomizowaną grupę pacjentów. Pacjenci nie będą świadomi swojej grupy randomizacji. Statystycy będą również ślepi na grupę randomizacji w obliczaniu wyników ciąży. Niestety nie będzie możliwe zapewnienie zaślepienia embriologów wykonujących oceny morfologiczne i morfokinetyczne.

Obliczenie wielkości próbki:

Wskaźnik ciąż w naszym Oddziale IVF w podgrupie pacjentek o charakterystyce demograficznej i klinicznej zbliżonej do objętej badaniem wynosi około 40%. Zakładając, że w grupie TLI wskaźnik ciąż wzrośnie o 10%, wymagana wielkość próby na grupę wynosi 124 pacjentek na ramię, z ryzykiem alfa 5% i mocą 80%.

Statystyka:

Analiza statystyczna zostanie przeprowadzona z zamiarem leczenia.