배아 배양을 위한 저속 배양 - 형태역학 및 환경 안정성

연구 목표:

우리는 이제 이론적으로 더 나은 배양 환경과 배아 평가 측정의 개선으로 발전할 수 있는 기회와 함께 새로운 시대를 맞이하고 있습니다.

이 연구의 목적은 TLI(Time-Lapse Incubator) 시스템에 의해 도입된 두 가지 새로운 개입 중 하나를 분리하여 생식 결과를 평가하고 비교하는 것입니다. 첫 번째는 표준 Bench Incubator(BI) 환경과 비교하여 TLI 환경을 평가하는 것입니다. 두 번째는 전통적인 형태학적 등급 단독과 비교하여 배아의 추가된 형태동태 등급에 대한 평가입니다.

이 연구의 주요 목적은 임상 임신율과 신선한 배아 이식에 초점을 맞추겠지만, 이 연구에서 동결된 배아를 사용한 추가 연구는 향후 OPU(난자 채취) 주기당 누적 임신율을 평가하기 위해 수행될 것입니다.

방법 현재 연구는 3개의 환자 팔을 사용하는 전향적 무작위 및 이중 맹검 연구가 될 것입니다. 첫 번째 부문에는 tri-gas 벤치 인큐베이터(Miri, Benchtop Multi-room 인큐베이터)에서 배아 배양에 무작위 배정된 환자가 포함됩니다. 이러한 배아는 허용된 기준에 따라 광학 현미경 및 전통적인 형태학적 평가를 사용하여 여러 평가를 받게 됩니다. 두 번째 부문에는 시간 경과 인큐베이터(Miri TL, Time-Lapse Incubator)에서 배아 배양에 무작위 배정된 환자가 포함됩니다. 이러한 배아는 TLI에 남아 있으며 다변수 채점 모델에 따라 형태학적 및 형태동태학적 평가 및 등급을 모두 받습니다. 배양 기간 동안 배양에서 제거되지 않습니다. 세 번째 부문에는 타임랩스 인큐베이터(Miri TL, 타임랩스 인큐베이터)에서 배아 배양에 무작위 배정된 환자도 포함됩니다. 이러한 배아는 TLI에 남아 있으며 추가 이미징 없이 허용된 기준에 따라 전통적인 형태학적 평가만 받습니다. 또한 배양 기간 동안 배양에서 제거되지 않습니다. 시점 및 평가된 매개변수는 연구의 1군과 동일합니다.

환자는 우리 센터에서 IVF/ICSI 주기를 시작하기 전에 의사와 간호 팀에 의해 적합성, 포함 및 제외 기준에 대해 평가됩니다. 환자가 자격이 있는 것으로 간주되면 치료 팀원이 환자와 연구 세부 사항을 논의합니다.

승인된 연구 대상자는 표준 제어 난소과자극(COH)을 받게 됩니다. 프로토콜 및 해당 약물은 치료 의사의 재량에 따라 결정됩니다. 여기에는 긴 성선 자극 호르몬 분비 호르몬(GnRH) 작용제 프로토콜과 GnRH 길항제 프로토콜이 포함될 수 있습니다. 여포 흡인은 경질 바늘 흡인을 통해 IVF 장치에서 수행됩니다. 자궁 내막 준비 및 황체기 지원은 부서 프로토콜에 따라 권장됩니다. The Israel Society of Obstetrics & Gynecology에 따르면 이식할 배아의 수는 주기 시작 전에 정의됩니다.

세포질 내 정자 주입(ICSI) 전에 인간 융모막 성선 자극 호르몬(hCG) 투여가 이미 보장된 후에 환자 무작위 배정이 이루어집니다. 무작위화 절차는 컴퓨터 생성 무작위화를 사용하여 수행됩니다.

난포 흡인 및 검사실로의 이동 후, 난포액은 난모세포의 존재에 대해 검사될 것입니다. 그런 다음 난모세포의 성숙도 및 형태학적으로 비정상적인 특징에 대해 점수를 매깁니다. ICSI는 해당 파트너의 신선한 정자를 사용하여 수행됩니다.

그런 다음 배아는 배양 배지에 배치됩니다. 배양 배지 내의 배아는 해당 무작위 그룹에 따라 Miri Benchtop 또는 Miri Timelapse 인큐베이터에 배치됩니다. Miri 벤치탑과 Miri TL 인큐베이터의 환경은 동일한 것으로 간주됩니다. 산소 농도 및 이산화탄소 농도는 각각 5% 및 5.5%로 설정됩니다.

연구 부문 1(Miri Benchtop 인큐베이터)의 배아는 사전 정의된 시점에서 숙련된 실험실 배아학자 중 한 명이 허용한 기준에 따라 광학 현미경으로 형태학적으로 평가됩니다. 평가 시점은 ICSI 후 16 - 20시간(정상 수정의 경우), ICSI 후 44 - 48시간(2일) 및 ICSI 후 64 - 72시간(3일)입니다. 평가된 매개변수에는 세포 수, 세포 크기, 세포 대칭 및 단편화 비율이 포함됩니다. 모든 총체적 이상이 기록됩니다. 그런 다음 배아는 이러한 평가된 매개변수에 따라 3일째에 등급이 매겨지고 우선 등급에 따라 전송됩니다. 배아 이식이 5일째로 예정된 경우 약 116시간에 추가 평가가 이루어집니다.

연구 부문 2(Miri TL 인큐베이터)의 배아는 인큐베이터의 통합 저속 촬영 시스템에서 생성된 디지털 이미지를 사용하여 동일한 실험실 배아학자에 의해 형태학적 및 형태동력학적으로 평가됩니다. 평가 및 채점은 채점 분류 시스템에 따라 수행됩니다. 배아의 형태학적 스크리닝은 이전에 분명히 이식할 수 없는 배아를 폐기하거나 제외하기 위해 초기에 수행됩니다. 그런 다음 이식 가능성이 감소한다는 가설에 따라 나머지 배아 점수 범주를 최대 4.0에서 최소 -2.0으로 순위를 매기기 위해 형태동태 매개변수가 사용됩니다.

연구 부문 3(Miri TL 인큐베이터)의 배아는 인큐베이터의 통합 저속 촬영 시스템에서 생성된 디지털 이미지를 사용하여 배아학자에 의해 형태학적으로 평가됩니다. 위에서 언급한 바와 같이 시점과 평가된 매개변수는 연구의 1군과 동일합니다. 이식을 위한 배아에 대한 결정도 동일합니다.

각 환자에 대해 배아는 형태학적 점수 단독(Arm 1 및 3) 또는 형태동력학 결정 트리 점수(Arm 2)에 따라 이식 대상으로 선택됩니다. 이식할 배아의 수는 미리 결정됩니다(위에서 언급한 바와 같이).

선택되지 않고 향후 이식에 적합하다고 판단되는 배아는 유리화에 의해 동결 보존됩니다.

현재 연구의 맹검은 여러 지점에서 보장됩니다. 난자 채취 및 배아 이식을 수행하는 산부인과 전문의는 미리 정의되고 무작위화된 환자 그룹에 대해 눈이 멀게 됩니다. 환자는 자신의 무작위 그룹을 인식하지 못합니다. 통계학자는 또한 임신 결과를 계산할 때 무작위 그룹에 대해 눈이 멀게 됩니다. 불행하게도 형태학적 및 형태동태학적 평가를 수행하는 발생학자의 눈을 멀게 하는 것은 불가능합니다.

샘플 크기 계산:

연구에 포함된 것과 유사한 인구학적 및 임상적 특성을 가진 환자 하위 그룹의 IVF 장치에서 임신률은 약 40%입니다. TLI 그룹에서 임신율이 10% 증가한다고 가정하면 그룹당 필요한 표본 크기는 팔당 124명의 환자이며 알파 위험은 5%이고 검정력은 80%입니다.

통계:

통계 분석은 치료 의도에 따라 수행됩니다.