Zeitraffer-Inkubation für die Embryokultur - Morphokinetik und Umweltstabilität

Forschungsschwerpunkte:

Wir erreichen jetzt ein neues Zeitalter mit der Möglichkeit, zu theoretisch besseren Kulturumgebungen und Verbesserungen bei den Maßnahmen zur Beurteilung von Embryonen vorzudringen.

Die Ziele dieser Forschungsstudie bestehen darin, die reproduktiven Ergebnisse bei der Isolierung einer von zwei neuen Interventionen zu bewerten und zu vergleichen, die durch das Time-Lapse Incubator (TLI)-System eingeführt wurden. Die erste ist eine Bewertung der TLI-Umgebung im Vergleich zur standardmäßigen Bench Incubator (BI)-Umgebung. Die zweite wird eine Bewertung der zusätzlichen morphokinetischen Einstufung von Embryonen im Vergleich zur herkömmlichen morphologischen Einstufung allein sein.

Obwohl sich das Hauptziel dieser Studie auf die klinischen Schwangerschaftsraten und den Transfer frischer Embryonen konzentrieren wird, werden weitere Untersuchungen mit eingefrorenen Embryonen aus dieser Studie durchgeführt, um in Zukunft auch die kumulativen Schwangerschaftsraten pro Zyklus der Eizellenentnahme (OPU) zu bewerten.

Methoden Die vorliegende Studie wird eine prospektive, randomisierte und doppelblinde Studie mit drei Patientenarmen sein. Der erste Arm umfasst Patienten, die randomisiert einer Embryokultur in einem Tri-Gas-Bankinkubator (Miri, Benchtop Multi-room Incubator) zugeteilt werden. Diese Embryonen werden mehreren Bewertungen unter Verwendung von Lichtmikroskopie und traditioneller morphologischer Bewertung gemäß anerkannten Kriterien unterzogen. Der zweite Arm umfasst Patienten, die randomisiert einer Embryokultur in einem Zeitraffer-Inkubator (Miri TL, Time-Lapse Incubator) zugeteilt werden. Diese Embryonen verbleiben im TLI und werden sowohl morphologischen als auch morphokinetischen Bewertungen und Einstufungen gemäß einem multivariablen Bewertungsmodell unterzogen. Sie werden für die Dauer der Kultur nicht aus der Inkubation genommen. Der dritte Arm umfasst Patienten, die ebenfalls randomisiert einer Embryokultur in einem Zeitraffer-Inkubator (Miri TL, Time-Lapse Incubator) zugeteilt wurden. Diese Embryonen verbleiben im TLI und werden nur einer herkömmlichen morphologischen Beurteilung nach anerkannten Kriterien ohne zusätzliche Bildgebung unterzogen. Sie werden auch nicht für die Dauer der Kultur aus der Inkubation genommen. Die Zeitpunkte und ausgewerteten Parameter sind identisch mit denen in Arm 1 der Studie.

Die Patienten werden vor Beginn eines IVF/ICSI-Zyklus in unserem Zentrum vom Arzt und Pflegeteam auf Eignung, Einschluss- und Ausschlusskriterien beurteilt. Sobald der Patient für geeignet befunden wird, wird ein Mitglied des Behandlungsteams die Einzelheiten der Studie mit dem Patienten besprechen.

Zugelassene Studienteilnehmerinnen werden einer standardmäßigen kontrollierten ovariellen Hyperstimulation (COH) unterzogen. Protokolle und die entsprechenden Medikamente werden nach Ermessen des behandelnden Arztes festgelegt. Diese können ein langes Gonadotropin-Releasing-Hormon (GnRH)-Agonisten-Protokoll und ein GnRH-Antagonisten-Protokoll umfassen. Die Follikelpunktion wird in der IVF-Einheit über eine transvaginale Nadelpunktion durchgeführt. Die Vorbereitung des Endometriums und die Unterstützung der Lutealphase werden gemäß unserem Abteilungsprotokoll empfohlen. Die Anzahl der Embryonen für den Transfer wird laut The Israel Society of Obstetrics & Gynecology vor Beginn des Zyklus festgelegt.

Die Randomisierung der Patienten erfolgt, nachdem die Verabreichung von humanem Choriongonadotropin (hCG) bereits vor der intrazytoplasmatischen Spermieninjektion (ICSI) sichergestellt wurde. Das Randomisierungsverfahren wird unter Verwendung einer computergenerierten Randomisierung durchgeführt.

Nach der Follikelpunktion und dem Transfer ins Labor wird die Follikelflüssigkeit auf das Vorhandensein von Eizellen untersucht. Die Oozyten werden dann auf Reife und alle morphologisch abnormalen Merkmale bewertet. ICSI wird dann mit frischem Sperma des entsprechenden Partners durchgeführt.

Embryonen werden dann in Kulturmedien platziert. Die Embryonen in Kulturmedien werden dann entsprechend ihrer entsprechenden Randomisierungsgruppe entweder in den Miri Benchtop- oder den Miri Timelapse-Inkubator gegeben. Beachten Sie, dass die Umgebung des Miri Benchtop-Inkubators und des Miri TL-Inkubators als identisch betrachtet wird. Sauerstoffkonzentration und Kohlendioxidkonzentration auf 5 % bzw. 5,5 % eingestellt.

Embryonen in Arm 1 der Studie (Miri Benchtop-Inkubator) werden zu vordefinierten Zeitpunkten und gemäß akzeptierten Kriterien von einem der ausgebildeten Laborembryologen morphologisch durch Lichtmikroskopie beurteilt. Die Bewertungszeitpunkte sind 16–20 Stunden nach ICSI (für normale Befruchtung), 44–48 Stunden (Tag 2) nach ICSI und dann 64–72 Stunden (Tag 3) nach ICSI. Ausgewertete Parameter umfassen Zellzahl, Zellgröße, Zellsymmetrie und prozentuale Fragmentierung. Alle groben Anomalien werden notiert. Die Embryonen werden dann am Tag 3 gemäß diesen bewerteten Parametern bewertet und gemäß der bevorzugten Einstufung übertragen. Wenn der Embryotransfer für Tag 5 festgelegt wurde, findet eine zusätzliche Beurteilung um etwa 116 Uhr statt.

Embryonen in Arm 2 der Studie (Miri TL-Inkubator) werden morphologisch und morphokinetisch von denselben Laborembryologen unter Verwendung digitaler Bilder bewertet, die vom integrierten Zeitraffer-Bildgebungssystem des Inkubators erstellt wurden. Die Bewertung und Bewertung erfolgt gemäß unserem Bewertungsklassifizierungssystem. Zunächst wird ein morphologisches Screening von Embryonen durchgeführt, um diejenigen zu verwerfen oder auszuschließen, die eindeutig für einen Transfer nicht lebensfähig sind. Morphokinetische Parameter werden dann verwendet, um die Bewertungskategorien der verbleibenden Embryonen von einem Maximum von 4,0 bis zu einem Minimum von -2,0 in der Reihenfolge des hypothetisch abnehmenden Implantationspotentials einzustufen.

Embryonen in Arm 3 der Studie (Miri TL-Inkubator) werden morphologisch von den Embryologen unter Verwendung digitaler Bilder bewertet, die vom integrierten Zeitraffer-Bildgebungssystem des Inkubators erstellt wurden. Wie oben erwähnt, sind die Zeitpunkte und ausgewerteten Parameter mit denen in Arm 1 der Studie identisch. Entscheidungen über Embryonen für den Transfer werden ebenfalls identisch sein.

Für jeden Patienten werden Embryonen für den Transfer allein aufgrund ihrer morphologischen Bewertung (Arm 1 und 3) oder anhand der morphokinetischen Entscheidungsbaumbewertung (Arm 2) ausgewählt. Die Anzahl der Embryonen für den Transfer wurde vorher festgelegt (wie oben erwähnt).

Diejenigen Embryonen, die nicht ausgewählt und für einen zukünftigen Transfer als geeignet erachtet werden, werden einer Kryokonservierung durch Vitrifikation unterzogen.

Die Verblindung der aktuellen Studie wird an mehreren Stellen sichergestellt. Die Gynäkologen, die die Eizellentnahme und den Embryotransfer durchführen, werden für die vordefinierte und randomisierte Patientengruppe verblindet. Die Patienten sind sich ihrer Randomisierungsgruppe nicht bewusst. Statistiker werden auch bei der Berechnung der Schwangerschaftsergebnisse gegenüber der Gruppe der Randomisierung verblindet sein. Leider kann die Verblindung derjenigen Embryologen, die die morphologischen und morphokinetischen Untersuchungen durchführen, nicht gewährleistet werden.

Berechnung der Stichprobengröße:

Die Schwangerschaftsrate in unserer IVF-Station in der Untergruppe der Patientinnen mit ähnlichen demografischen und klinischen Merkmalen wie in der Studie liegt bei etwa 40 %. Unter der Annahme, dass die Schwangerschaftsrate in der TLI-Gruppe um 10 % steigen wird, beträgt die erforderliche Stichprobengröße pro Gruppe 124 Patientinnen pro Arm, mit einem Alpha-Risiko von 5 % und einer Power von 80 %.

Statistiken:

Die statistische Auswertung erfolgt nach Intention-to-treat.