Inulin a S. Salivarius snižují halitózu

Účastníci V této randomizované, kontrolované, dvojitě zaslepené, paralelní klinické studii fáze II byli k účasti pozváni dospělí pacienti (≥18 let), kteří si stěžovali na halitózu v přítomnosti povlaku na jazyku. Byli identifikováni s pozvánkami ve formě plakátů distribuovaných na klinikách Dental School, University of Passo Fundo (UPF), od srpna do listopadu 2015. Zubní škola se nachází v hlavním kampusu UPF, Passo Fundo, města s > 200 000 obyvatel. Orální halitóza byla zpočátku diagnostikována orálním vyšetřením pro identifikaci povlaku na jazyku, po kterém následoval organoleptický test k potvrzení halitózy. Celková velikost vzorku byla odhadnuta u 45 účastníků, přičemž byl uvažován rozdíl 80 % v redukci halimetru mezi ošetřeními, pro testy s α = 5 % a silou = 80 %. Halitóza byla definována hodnotami halimetru ≥ 75 ppb. Všichni účastníci dali před vstupem do studie písemný souhlas. Výzkumný protokol byl schválen místní etickou komisí (CAAE: 40334914.0.0000.5342).

Klinické vyšetření Ústní vyšetření bylo provedeno vyškoleným zubním lékařem (CRM), přičemž byly identifikovány zubní kazy, plak, zánět dásní, parodontální váčky a případné zubní náhrady. Povlak byl popsán po vizuální kontrole jazyka a index povlaku byl klasifikován do 4 úrovní: 0 - žádný povlak; 1 - tenký povlak na 1/3; 2 - tenký povlak na více než 1/3 nebo silný povlak pouze na 1/3; 3 - silný povlak na více než 1/3,5

Hodnocení halitózy Po klinickém vyšetření byla halitóza kvantifikována organoleptickými a Halimetrickými testy. Ty byly provedeny vyškoleným a kalibrovaným zkoušejícím (CRM), s úrovní shody a reprodukovatelnosti vyšší než 80 % pro organoleptický test a index nátěru, za použití srovnání testů a opakovaných testů s odborným soudcem (CKR). Všichni pacienti byli vyšetřeni mezi 8. a 11. hodinou. Pacienti byli požádáni, aby dva dny před testováním nejedli česnek, cibuli a další potravinové přísady a nepřejídali se margarínem, mlékem, smažením, sardinkami, salámem, boloňským masem, klobásou, červeným masem, sýry, potravinami se sírou ve složení (zelí, brokolice , květák, vejce), pití alkoholu a kouření podle protokolů uvedených jinde.5, 13, 15 Ráno při vyšetření by se pacienti měli vyvarovat používání bonbónů a žvýkaček, ale měli povolenou snídani a čištění zubů pouze vodou. Jakmile byli pacienti zařazeni do studie, byli požádáni, aby se vyhýbali jiným dásním než těm, které byly poskytnuty ve studii.

Organoleptický test Pacienti v klidu byli instruováni, aby zadrželi vzduch v ústech při dýchání nosem po dobu 1 minuty. Foukají přes ústa vyšetřujícím (CRM) umístěným 10 cm od úst pacienta. Dech pacienta byl hodnocen od 0 do 5 následovně: 0 – žádný zápach, 1 – špatný, sotva znatelný zápach, 2 – slabý zápach, 3 – středně páchnoucí, 4 – silný zápach a 5 – silný zápach.21 Pro účely výběru pacientů byla halitóza považována za přítomnou, pokud bylo toto skóre rovné nebo vyšší než 1 v přítomnosti povlaku na jazyku.

Halimetr Pacientům byl dech objektivně měřen pomocí halimetru, který je schopen měřit hladinu VSC. Halitóza je identifikována, když zařízení registruje ≥75 ppb.1, 22 Měření byla provedena vložením jednorázového brčka do úst pacienta nad jazyk. Konečný výsledek byl podle výrobce získán jako průměr ze tří měření.

Prebiotika, probiotika a placebo Lactobacillus salivarius G60, inulin a placebo§ (složené z gomagronu) byly připraveny ve formě gumy‖, identického fyzikálního vzhledu, vůně, chuti a konzistence, takže byly vytvořeny následující experimentální skupiny: LS+inulin: Lactobacillus salivarius G60 1 miliarda jednotek tvořících kolonie (CFU) + inulin 1 g; LS: Lactobacillus salivarius G60 1 miliarda CFU; a placebo. Pacienti byli instruováni, aby používali 1 žvýkačku každých 12 hodin (po snídani a po večeři) po dobu 10 dnů.

Hodnocení kvality života Pro orální kvalitu života (QOL) jsme použili dotazník OHIP-14, přeložený a ověřený do brazilské portugalštiny.23 Konečné skóre se pohybuje od 0 (nejlepší) do 56 (nejhorší). Účastníci odpovídali na dotazníky ve dnech 0 a 14.

Protokol studie Pacienti byli hodnoceni na zubní klinice podle kroků znázorněných na obrázku 2. Po podepsání informovaného souhlasu byly zaznamenány klinické údaje a údaje o kvalitě života, následovalo orální vyšetření k posouzení povlaku jazyka a organoleptický test k potvrzení halitózy. Poté byl Halimetr použit k objektivnímu měření halitózy.

Zařazení pacienti byli randomizováni vyšetřujícím (CRM) pomocí obálkového kódu, který byl vygenerován počítačem, uspořádaný výrobcem dásní do bloků pro 3 pacienty 1:1:1, z nichž každý obsahoval jednu ze 3 léčeb (LS+inulin, LS a placebo ). Zkoušející a účastníci byli proto vůči léčbě zaslepeni. Pacienti byli instruováni, aby používali 1 žvýkačku každých 12 hodin počínaje čtvrtým dnem po rozhovoru a přerušili 2 týdny po prvním rozhovoru (10denní léčba). Toto zpoždění 4 dny před zahájením léčby umožnilo 14denní interval pro zmírnění zkreslení paměti pomocí OHIP-14. Každá žvýkačka byla umístěna do úst k úplnému rozpuštění, což umožnilo jemné žvýkání. Závěrečné vyšetření bylo provedeno poslední den léčby, 12 hodin po použití poslední gumy, opakování indexu povlaku, organoleptické a halimetrické testy a hodnocení kvality života (OHIP-14). Instrukce o ústní hygieně poskytl vyšetřující lékař (CRM): pacienti byli požádáni, aby se vyvarovali jakéhokoli nového přístupu, který by mohl změnit zápach z úst, jako je čištění jazyka nebo změny v běžném čištění zubů. Přilnavost k léčbě byla hodnocena jako počet nepoužitých dásní ve vztahu k celkovému počtu přijatých dásní. Bezpečnost byla charakterizována podle vedlejších účinků popsaných pacienty, včetně bolesti hlavy, orálních potíží a břišních příznaků (ano/ne). Primárními výstupy byly organoleptický test, Halimetr a index povlaku, zatímco sekundárními výstupy byla kvalita života a dodržování/bezpečnost léčby. Rozdělení do tří léčebných skupin bylo odhaleno až po ukončení analýzy dat.

Metabolismus inulinu Lactobacillus salivarius G60 Schopnost Lactobacillus salivarius G60 metabolizovat inulin jako zdroj uhlíku byla testována naočkováním 50 ml bakteriální suspenze LS (1x10⁸-⁹ buněk/ml) v pufrovaném fyziologickém solném roztoku v 5 ml prostředí napůl- definovaný limitem detekce metody (LDM) bez glukózy a sacharózy, ale doplněný o inulin. Byla připravena následující kultivační média: PYG (peptonové kvasinky + 1 % glukózy), PYI (peptonové kvasinky + 1 % inulin) a PY (peptonové kvasinky). Ten sloužil jako negativní kontrola. Dříve kultivovaný LS G60 byl zahrnut do těchto tří roztoků a inkubován při 30 °C po dobu 24 hodin.

Byla provedena spektrofotometrická analýza (Genesys 10S VIS, made Madison, USA) s použitím 600 mm pro optickou hustotu (OD). Pro měření absorbance byl roztok s LS G60 upraven na OD=1 podle vzorce C1.V1=C2.V2 (C1: počáteční koncentrace, V1: počáteční objem, C2: konečná koncentrace a V2: konečný objem). Měření byla provedena v počátečním čase (nula) a po 2, 4, 6, 8, 10 a 12 hodinách. Všechny testy byly pro potvrzení opakovány.

Byl proveden difúzní test inhibice patogenních bakterií Lactobacillus salivarius G60. Tři kapky 10 ml bakteriální suspenze (1x108-9 buněk/ml LS G60) v pufrovaném fyziologickém roztoku byly umístěny do sójového triptic agaru a inkubovány při 30 °C po dobu 3 hodin za optimálních anaerobních podmínek. Destičky byly pokryty 10 ml měkkého sójového triptického agaru (0,7% agar) a naočkovány 1 ml bakteriální suspenze (1x108-⁹ buněk/ml) v pufrovaném fyziologickém roztoku patogenů způsobujících halitózu (Porphyromonas gingivalis a Prevotella intermedia) za anaerobních podmínek. podmínky. Byly inkubovány při 30 °C a zóny inhibice halo mikrobiálního růstu kolem kapiček byly zkoumány po 24, 48 a 72 hodinách.

Statistická analýza Data byla statisticky analyzována jedním z autorů (SMCJ) zaslepeným k intervencím. Počáteční srovnání mezi skupinami pacientů byla provedena pomocí testů ANOVA (věk) a chí-kvadrát (pohlaví). Hodnoty léčby ve dnech 0 a 14 byly nejprve porovnány v každé skupině pomocí Wilcoxonových nebo t testů pro párová data. Použili jsme zobecněné lineární modely (GZLM) k porovnání léčebných prostředků s úpravou na hodnoty před intervencí. O zařazení kovariálního pohlaví nebo věku bylo rozhodnuto na základě Akaikeho indexu. Pohlaví bylo v analýze Halimetru zadáno jako kovariální, věk byl zahrnut v modelech pro OHIP-14, zatímco při analýze organoleptického skóre nebyla použita žádná kovariální. Pro analýzy Halimetru a OHIP-14 jsme použili rozdělení Gama a log link, stejně jako Poissonovo rozdělení a log link pro organoleptické skóre a index povlaku. Konstanta 1 byla přidána k hodnotám OHIP-14, aby byly přístupné pro použití logaritmů. Párová vícenásobná srovnání mezi skupinami byla provedena pomocí nejméně významného rozdílu. Výsledky z metabolizace inulinu Lactobacillus salivarius G60 byly analyzovány pomocí ANOVA a Tukeyho post hoc testu. Statistické analýzy byly provedeny pomocí softwaru Graph Prism 4.0 a SPSS v.18. Uvažovaný limit pro statistickou významnost byl 5 %.