Inuliini ja S. Salivarius vähentävät halitoosia

Osallistujat Tähän satunnaistettuun, kontrolloituun, kaksoissokkoutettuun, rinnakkaistutkimukseen, vaiheen II kliiniseen tutkimukseen kutsuttiin osallistumaan aikuisia potilaita (≥18-vuotiaita), jotka valittivat halitoosista kielen päällysteen läsnä ollessa. Heidät tunnistettiin kutsujen muodossa, joita jaettiin Passo Fundon yliopiston (UPF) hammaslääkärikoulun klinikoilla elokuusta marraskuuhun 2015. Hammaskoulu sijaitsee UPF:n pääkampuksella, Passo Fundossa, kaupungissa, jossa on yli 200 000 asukkaat. Suun halitoosi diagnosoitiin alun perin suututkimuksella kielen päällysteen tunnistamiseksi, mitä seurasi aistinvarainen testi halvauksen vahvistamiseksi. Kokonaisotoskoko arvioitiin 45 osallistujalla, ottaen huomioon 80 % ero halimetrin pienenemisessä hoitojen välillä testeissä, joissa α = 5 % ja teho = 80 %. Halitoosi määriteltiin halimetriarvoilla ≥ 75 ppb. Kaikki osallistujat antoivat kirjallisen suostumuksen ennen tutkimukseen osallistumista. Tutkimusprotokolla on paikallisen eettisen komitean hyväksymä (CAAE: 40334914.0.0000.5342).

Kliininen tutkimus Suututkimuksen suoritti koulutettu hammaslääkäri (CRM), joka tunnistaa hammasontelot, plakin, ientulehdukset, periodontaaliset taskut ja mahdolliset hammasproteesit. Pinnoite kuvattiin kielen silmämääräisen tarkastuksen jälkeen ja pinnoiteindeksi luokiteltiin 4 tasoon: 0 - ei pinnoitetta; 1 - ohut pinnoite 1/3; 2 - ohut pinnoite yli 1/3:sta tai paksu pinnoite vain 1/3; 3 - paksu pinnoite yli 1/3,5

Halitoosin arviointi Kliinisen tutkimuksen jälkeen halitoosi kvantifioitiin aistinvaraisilla ja halimeter‡-testeillä. Nämä suoritti koulutettu ja kalibroitu tutkija (CRM), jonka yhteensopivuus ja toistettavuus oli yli 80 % organoleptisen testin ja pinnoiteindeksin osalta käyttäen testi- ja uusintatestien vertailuja asiantuntijatuomarin (CKR) kanssa. Kaikki potilaat tutkittiin klo 8-11 välillä. Potilaita pyydettiin välttämään valkosipulin, sipulin ja muiden ruokien mausteiden syömistä kaksi päivää ennen testausta ja välttämään margariinin, maidon, paistin, sardiinin, salamin, bolognan, makkaran, punaisen lihan, juustojen, rikkipitoisten ruokien (kaali, parsakaali) ylensyöntiä. , kukkakaali, muna), alkoholin juominen ja tupakointi muualla raportoitujen protokollien mukaisesti.5, 13, 15 Tutkimusaamuna potilaiden tulee välttää karkkien ja kumien käyttöä, mutta saivat nauttia aamiaisen ja hampaiden harjauksen vain vedellä. Kun potilaita oli otettu mukaan tutkimukseen, heitä pyydettiin välttämään muita kuin tutkimuksessa tarjottuja ikeniä.

Aistinvarainen testi Potilaita levossa opastettiin pitämään ilmaa suussa ja hengittämään nenän kautta 1 minuutin ajan. Ne puhaltavat suun kautta tutkijan (CRM) ollessa 10 cm:n päässä potilaan suusta. Potilaan hengitys arvioitiin 0 - 5 seuraavasti: 0 - ei hajua, 1 - huono tuskin havaittava haju, 2 - lievä haju, 3 - kohtalainen haisee, 4 - voimakas haju ja 5 - voimakas haju.21 Potilaiden valinnassa halitoosin katsottiin olevan olemassa, kun tämä pistemäärä oli yhtä suuri tai suurempi kuin 1 kielen päällysteen läsnä ollessa.

Halimeter Potilaiden hengitys mitattiin objektiivisesti halimetrillä, joka pystyi mittaamaan VSC-tason. Halitoosi tunnistetaan, kun laite rekisteröi ≥75 ppb.1, 22 Mittaukset tehtiin työntämällä kertakäyttöinen pilli potilaan suuhun kielen yläpuolelle. Valmistajan mukaan lopputulos saatiin kolmen mittauksen keskiarvona.

Prebiootti, probiootti ja lumelääke Lactobacillus salivarius G60, inuliini ja plasebo§ (koostuivat gomagronista) valmistettiin kumiksi‖, jotka olivat identtisiä fysikaalisesti ulkonäöltään, tuoksultaan, maultaan ja koostumukseltaan ja jaettiin seuraavat koeryhmät: LS+inuliini: Lactobacillus salivarius G60 1 miljardi pesäkettä muodostavaa yksikköä (CFU) + inuliini 1 g; LS: Lactobacillus salivarius G60 1 miljardi CFU; ja lumelääkettä. Potilaita neuvottiin käyttämään 1 purukumia 12 tunnin välein (aamiaisen ja päivällisen jälkeen) 10 päivän ajan.

Elämänlaadun arviointi Suulliseen elämänlaatuun (QOL) sovellettiin kyselylomaketta OHIP-14, joka on käännetty ja validoitu brasilian portugaliksi.23 Lopulliset pisteet vaihtelevat 0:sta (paras) 56:een (huonoin). Osallistujat vastasivat kyselyihin päivinä 0 ja 14.

Tutkimusprotokolla Potilaat arvioitiin hammasklinikalla kuvassa 2 kuvattujen vaiheiden mukaisesti. Tietoisen suostumuksen allekirjoittamisen jälkeen kliiniset tiedot ja elämänlaatutiedot tallennettiin, mitä seurasi suututkimus kielen pinnoitteen arvioimiseksi ja aistinvarainen testi halitoosin vahvistamiseksi. Myöhemmin halimeteriä käytettiin mittaamaan objektiivisesti halitoosia.

Tutkija (CRM) satunnaisteli ilmoittautuneet potilaat käyttämällä tietokoneella luomaa kirjekuorikoodia, jonka ikenien valmistaja järjesti lohkoiksi kolmelle potilaalle suhteessa 1:1:1, joista jokainen sisälsi yhden kolmesta hoidosta (LS+inuliini, LS ja lumelääke). ). Siksi tutkija ja osallistujat sokeutuivat hoitoihin. Potilaita neuvottiin käyttämään 1 purukumia 12 tunnin välein alkaen neljännestä päivästä haastattelun jälkeen ja keskeyttämään 2 viikkoa ensimmäisen haastattelun jälkeen (10 päivän hoito). Tämä 4 päivän viive ennen hoidon aloittamista mahdollisti 14 päivän tauon OHIP-14:n palautusvihan vaimentamiseen. Jokainen purukumi laitettiin suuhun liukenemaan loppuun, mikä salli hellävaraisen pureskelun. Lopullinen tutkimus tehtiin viimeisenä hoitopäivänä, 12 tuntia viimeisen purukumin käytön, toistuvan pinnoiteindeksin, organoleptisten ja halimetritestien ja elämänlaadun arvioinnin (OHIP-14) jälkeen. Tutkija (CRM) antoi ohjeet suuhygieniasta: potilaita pyydettiin välttämään uusia lähestymistapoja, jotka voisivat muuttaa halitoosia, kuten kielen puhdistusta tai muutoksia rutiininomaiseen hampaiden harjaukseen. Hoidon sitoutuminen arvioitiin käyttämättömien ikenien lukumääränä suhteessa vastaanotettujen ikenien kokonaismäärään. Turvallisuus luonnehdittiin potilaiden kuvaamien sivuvaikutusten mukaan, mukaan lukien päänsärky, suun vaivat ja vatsaoireet (kyllä/ei). Ensisijaiset tulokset olivat organoleptinen testi, halimetri ja pinnoiteindeksi, kun taas toissijaiset tulokset olivat elämänlaatu ja hoidon noudattaminen/turvallisuus. Jakautuminen kolmeen hoitoryhmään paljastui vasta data-analyysin päätyttyä.

Lactobacillus salivarius G60:n inuliinin aineenvaihdunta Lactobacillus salivarius G60:n kyky metaboloida inuliinia hiilenlähteenä testattiin siirrostamalla 50 ml bakteerisuspensiota LS (1x108-⁹ solua/ml) puskuroituun fysiologiseen suolaliuosympäristöön 5 ml:ssa menetelmän (LDM) havaitsemisrajan määrittelemä ilman glukoosia ja sakkaroosia, mutta täydennettynä inuliinilla. Seuraavat kasvatusalustat valmistettiin: PYG (peptonihiiva + 1 % glukoosia), PYI (peptonihiiva + 1 % inuliinia) ja PY (peptonihiiva). Jälkimmäinen toimi negatiivisena kontrollina. Aiemmin viljelty LS G60 sisällytettiin näihin kolmeen liuokseen, vastaavasti, ja inkuboitiin 30 °C:ssa 24 tuntia.

Suoritettiin spektrofotometria (Genesys 10S VIS, Madison, USA) analyysit käyttäen 600 mm optista tiheyttä (OD). Absorbanssin mittaamiseksi liuos, jossa oli LS G60, säädettiin arvoon OD=1 kaavan C1.V1=C2.V2 mukaisesti (C1: alkupitoisuus, V1: alkutilavuus, C2: loppupitoisuus ja V2: lopputilavuus). Mittaukset suoritettiin alkuhetkellä (nolla) ja 2, 4, 6, 8, 10 ja 12 tunnin kuluttua. Kaikki testit toistettiin varmistuksen vuoksi.

Patogeenisten bakteerien esto Lactobacillus salivarius G60 -kaivolla suoritettiin diffuusiotesti. Kolme tippaa 10 ml bakteerisuspensiota (1 x 108-9 solua/ml LS G60:a) puskuroidussa suolaliuoksessa pantiin soijatrippiagariin ja inkuboitiin 30 °C:ssa 3 tuntia optimaalisissa anaerobisissa olosuhteissa. Levyt peitettiin 10 ml:lla pehmeää soijatrippiagaria (0,7 % agar) ja siirrostettiin 1 ml:lla bakteerisuspensiota (1 x 108-9 solua/ml) halitoosia aiheuttavien patogeenien (Porphyromonas gingivalis ja Prevotella intermedia) puskuroidussa suolaliuoksessa anaerobisessa anaerobisessa tilassa. ehdot. Niitä inkuboitiin 30 °C:ssa ja pisaroiden ympärillä olevia mikrobikasvun estokehoja tutkittiin 24, 48 ja 72 tunnin kohdalla.

Tilastollinen analyysi Tiedot analysoi tilastollisesti yksi kirjoittajista (SMCJ), joka oli sokeutunut interventioihin. Alustavat vertailut potilasryhmien välillä tehtiin käyttämällä ANOVA- (ikä) ja chi-neliö (sukupuoli) testejä. Hoitoarvoja päivinä 0 ja 14 verrattiin ensin kussakin ryhmässä Wilcoxon- tai t-testeillä parillisten tietojen saamiseksi. Käytimme yleistettyjä lineaarisia malleja (GZLM) vertaillaksemme hoitokeinoja, jotka sopeutettiin interventiota edeltäviin arvoihin. Kovariaabelin sukupuolen tai iän sisällyttäminen päätettiin Akaiken indeksin perusteella. Sukupuoli merkittiin kovariaabeliksi Halimeter-analyysissä, ikä sisällytettiin OHIP-14:n malleihin, kun taas aistinvaraisten pisteiden analysoinnissa ei käytetty komuuttujaa. Halimeterin ja OHIP-14:n analyyseihin käytimme Gama-jakauma- ja lokilinkkiä sekä aistinvaraisten pisteiden ja pinnoiteindeksin Poisson-jakaumaa ja lokilinkkiä. Vakio 1 lisättiin OHIP-14-arvoihin, jotta ne olisivat soveltuvia logaritmien käyttöön. Ryhmien väliset parivertailut tehtiin käyttämällä Vähiten merkitsevää eroa. Tulokset inuliinin metaboloinnista Lactobacillus salivarius G60:llä analysoitiin käyttämällä ANOVA- ja Tukeyn post hoc -testiä. Tilastolliset analyysit suoritettiin Graph Prism 4.0- ja SPSS v.18 -ohjelmistoilla. Tilastollisen merkitsevyyden raja oli 5 %.