Inulin og S. Salivarius reducerer halitosis

Deltagere I dette randomiserede, kontrollerede, dobbeltblindede, parallelle fase II kliniske forsøg, blev voksne patienter (≥18 år gamle), som klagede over halitosis i nærvær af tungebelægning, inviteret til at deltage. De blev identificeret med invitationer i form af plakater, der blev distribueret på tandlægeskolens klinikker, University of Passo Fundo (UPF), fra august til november 2015. Tandlægeskolen er placeret på hovedcampus i UPF, Passo Fundo, en by med >200.000 indbyggere. Oral halitosis blev oprindeligt diagnosticeret ved oral undersøgelse til identifikation af tungebelægning, efterfulgt af organoleptisk test for at bekræfte halitosis. Samlet stikprøvestørrelse blev estimeret hos 45 deltagere under hensyntagen til en forskel på 80 % i Halimeter-reduktion mellem behandlinger, for test med α = 5 % og effekt = 80 %. Halitosis blev defineret ved Halimeter-værdier ≥ 75 ppb. Alle deltagere gav skriftligt samtykke, før de gik ind i undersøgelsen. Forskningsprotokollen blev godkendt af den lokale etiske komité (CAAE: 40334914.0.0000.5342).

Klinisk undersøgelse Mundtlig undersøgelse blev udført af en uddannet tandlæge (CRM), der identificerede huller i tænderne, plak, tandkødsbetændelse, parodontale lommer og eventuelle tandproteser. Belægning blev beskrevet efter visuel inspektion af tungen og belægningsindeks blev klassificeret i 4 niveauer: 0 - ingen belægning; 1 - tynd belægning på 1/3; 2 - tynd belægning på mere end 1/3 eller tyk belægning på kun 1/3; 3 - tyk belægning på mere end 1/3,5

Evaluering af halitosis Efter klinisk undersøgelse blev halitosis kvantificeret ved organoleptiske og Halimeter‡ test. Disse blev udført af en uddannet og kalibreret eksaminator (CRM), med niveauer af overensstemmelse og reproducerbarhed større end 80 % for organoleptisk test og belægningsindeks, ved hjælp af test- og gentestsammenligninger med en ekspertdommer (CKR). Alle patienter blev undersøgt mellem kl. 8 og 11. Patienterne blev bedt om at undgå at spise hvidløg, løg og andre krydderier i to dage før testning og undgå at overspise margarine, mælk, yngel, sardiner, salami, bologna, pølse, rødt kød, oste, fødevarer med svovl i sammensætningen (kål, broccoli , blomkål, æg), drikke alkohol og ryge, efter protokoller rapporteret andetsteds.5, 13, 15 I undersøgelsesmorgenen skulle patienter undgå at bruge slik og tandkød, men fik lov til at spise morgenmad og kun tandbørstning med vand. Når de var inkluderet i undersøgelsen, blev patienterne bedt om at undgå andre tandkød end dem, der blev givet i forsøget.

Organoleptisk test Patienter i hvile blev instrueret i at holde luft i munden, mens de trækker vejret gennem næsen i 1 min. De blæser gennem munden med undersøgeren (CRM) placeret 10 cm fra patientens mund. Patientens åndedræt blev vurderet fra 0 til 5 som følger: 0 - ingen lugt, 1 - dårlig lugt, der næsten ikke kan mærkes, 2 - let stank, 3 - moderat ildelugtende, 4 - stærk stank og 5 - alvorlig stank.21 Med det formål at udvælge patienter blev halitose anset for at være til stede, når denne score var lig med eller højere end 1 i nærvær af tungebelægning.

Halimeter Patienter fik målt deres ånde objektivt ved hjælp af et Halimeter, der er i stand til at måle VSC-niveauet. Halitosis identificeres, når enheden registrerer ≥75 ppb.1, 22 Målingerne blev foretaget ved at indsætte et engangssugerør i patientens mund over tungen. Ifølge producenten blev det endelige resultat opnået som gennemsnittet af tre målinger.

Præbiotisk, probiotisk og placebo Lactobacillus salivarius G60, inulin og placebo§ (sammensat af gomagron) blev fremstillet i form af tyggegummi‖, identisk i fysisk udseende, lugt, smag og konsistens, hvilket gør følgende forsøgsgrupper: LS+inulin: Lactobacillus salivarius G60 1 milliard kolonidannende enheder (CFU) + inulin 1 g; LS: Lactobacillus salivarius G60 1 milliard CFU; og placebo. Patienterne blev instrueret i at bruge 1 tyggegummi hver 12. time (efter morgenmad og efter middag) i 10 dage.

Livskvalitetsvurdering Til oral relateret livskvalitet (QOL) anvendte vi spørgeskemaet OHIP-14, oversat og valideret til brasiliansk portugisisk.23 Slutresultatet spænder fra 0 (bedst) til 56 (dårligst). Deltagerne besvarede spørgeskemaerne på dag 0 og 14.

Undersøgelsesprotokol Patienter blev evalueret på en tandklinik ved at følge trinene illustreret i figur 2. Efter at have underskrevet det informerede samtykke, blev kliniske data og livskvalitetsdata registreret, efterfulgt af mundtlig undersøgelse for at vurdere tungebelægning og organoleptisk test for at bekræfte halitosis. Bagefter blev Halimeteret brugt til objektivt at måle halitosis.

Tilmeldte patienter blev randomiseret af undersøgeren (CRM) ved hjælp af en kuvertkode, der var computergenereret, organiseret af tandkødsproducenten i blokke til 3 patienter 1:1:1, som hver indeholdt en af ​​de 3 behandlinger (LS+inulin, LS og placebo). ). Derfor blev undersøger og deltagere blindet for behandlinger. Patienterne blev instrueret i at bruge 1 tyggegummi hver 12. time begyndende på den fjerde dag efter interviewet og afbryde 2 uger efter det første interview (10 dages behandling). Denne forsinkelse på 4 dage før påbegyndelse af behandlingen tillod et interval på 14 dage til dæmpning af tilbagekaldelsesbias med OHIP-14. Hvert tyggegummi blev anbragt i munden for at fuldende opløsning, hvilket tillod blid tygning. Den afsluttende undersøgelse blev udført på den sidste dag af behandlingen, 12 timer efter brug af det sidste tyggegummi, gentagne belægningsindeks, organoleptiske og Halimeter-tests og vurdering af livskvalitet (OHIP-14). Instruktioner om mundhygiejne blev givet af undersøgeren (CRM): patienterne blev bedt om at undgå enhver ny tilgang, der kunne ændre halitosis, såsom tungerengøring eller ændringer i rutinemæssig tandbørstning. Behandlingsadhærens blev vurderet som antallet af ikke anvendte tandkød i forhold til det samlede antal modtagne tandkød. Sikkerheden blev karakteriseret i henhold til bivirkninger beskrevet af patienterne, herunder hovedpine, orale lidelser og abdominale symptomer (ja/nej). Primære resultater var organoleptisk test, Halimeter og belægningsindeks, mens sekundære resultater var livskvalitet og behandlingsadhærens/sikkerhed. Allokering i de tre behandlingsgrupper blev først afsløret efter afslutning af dataanalyse.

Metabolisme af inulin af Lactobacillus salivarius G60 Lactobacillus salivarius G60's kapacitet til at metabolisere inulin som en kulstofkilde blev testet ved at inokulere 50 ml bakteriesuspension LS (1x108-9 celler/ml) i en halv bufret fysiologisk saltvandsopløsning i miljøet på 5 ml. defineret af metodens detektionsgrænse (LDM) uden glucose og saccharose, men suppleret med inulin. Følgende dyrkningsmedier blev fremstillet: PYG (peptongær + 1% glucose), PYI (peptongær + 1% inulin) og PY (peptongær). Sidstnævnte fungerede som negativ kontrol. Den tidligere dyrkede LS G60 blev inkluderet i henholdsvis disse tre opløsninger og inkuberet ved 30°C i 24 timer.

Spektrofotometri (Genesys 10S VIS, lavet Madison, USA) analyser ved brug af 600 mm for optisk tæthed (OD) blev udført. For at måle absorbans blev opløsningen med LS G60 justeret til OD=1 ifølge formlen C1.V1=C2.V2 (C1: startkoncentration, V1: startvolumen, C2: slutkoncentration og V2: slutvolumen). Målingerne blev udført på det indledende tidspunkt (nul), og efter 2, 4, 6, 8, 10 og 12 timer. Alle test blev gentaget til bekræftelse.

Hæmning af patogene bakterier med Lactobacillus salivarius G60 brønddiffusionstest blev udført. Tre dråber på 10 ml bakteriesuspension (1 x 108-9 celler/ml LS G60) i bufret saltvand blev anbragt i sojatriptisk agar og inkuberet ved 30°C i 3 timer under optimale anaerobe betingelser. Pladerne blev dækket med 10 ml blød sojatriptisk agar (0,7% agar) og podet med 1 ml bakteriesuspension (1x108-9 celler/ml) i pufret saltvand af halitose-forårsagende patogener (Porphyromonas gingivalis og Prevotella intermedia) under anaerobic. betingelser. De blev inkuberet ved 30°C, og zoner med inhiberende halo af mikrobiel vækst omkring dråberne blev undersøgt efter 24, 48 og 72 timer.

Statistisk analyse Data blev statistisk analyseret af en af ​​forfatterne (SMCJ) blindet for interventionerne. Indledende sammenligninger mellem grupper af patienter blev udført ved hjælp af ANOVA (alder) og chi-square (køn) test. Behandlingsværdier på dag 0 og 14 blev først sammenlignet i hver gruppe ved Wilcoxon- eller t-tests for parrede data. Vi brugte generaliserede lineære modeller (GZLM) til at sammenligne behandlingsmidler, der justerede for præ-interventionsværdier. Inklusionen af ​​kovariabelt køn eller alder blev besluttet baseret på Akaikes indeks. Køn indtastet som kovariabel i analysen af ​​Halimeter, alder blev inkluderet i modellerne for OHIP-14, hvorimod ingen kovariabel blev brugt ved analyse af organoleptisk score. Vi brugte Gama-distribution og log-link til analyserne af Halimeter og OHIP-14, samt Poisson-distribution og log-link til organoleptisk score og belægningsindeks. Konstanten 1 blev tilføjet til OHIP-14-værdier for at gøre dem tilgængelige for brug af logaritmer. Der blev foretaget parvise multiple sammenligninger mellem grupper ved hjælp af mindst signifikant forskel. Resultater fra metabolisering af inulin med Lactobacillus salivarius G60 blev analyseret ved hjælp af ANOVA og Tukey post hoc test. De statistiske analyser blev udført ved hjælp af Graph Prism 4.0 og SPSS v.18 software. Grænsen for statistisk signifikans var 5 %.