Inulin og S. Salivarius reduserer halitose

Deltakere I denne randomiserte, kontrollerte, dobbeltblinde, parallelle fase II kliniske studien, ble voksne pasienter (≥18 år) som klaget over halitose i nærvær av tungebelegg invitert til å delta. De ble identifisert med invitasjoner i form av plakater som ble distribuert ved Dental School-klinikkene, University of Passo Fundo (UPF), fra august til november 2015. Tannlegeskolen ligger på hovedcampusen til UPF, Passo Fundo, en by med >200.000 innbyggere. Oral halitose ble opprinnelig diagnostisert ved oral undersøkelse for identifikasjon av tungebelegg, etterfulgt av organoleptisk test for å bekrefte halitose. Total prøvestørrelse ble estimert hos 45 deltakere, tatt i betraktning en forskjell på 80 % i Halimeter-reduksjon mellom behandlinger, for tester med α = 5 % og kraft = 80 %. Halitose ble definert av Halimeter-verdier ≥ 75 ppb. Alle deltakerne ga skriftlig samtykke før de gikk inn i studien. Forskningsprotokollen ble godkjent av den lokale etiske komiteen (CAAE: 40334914.0.0000.5342).

Klinisk undersøkelse Muntlig undersøkelse ble utført av utdannet tannlege (CRM), som identifiserte tannhuler, plakk, gingivitt, periodontale lommer og eventuelle tannproteser. Belegg ble beskrevet etter visuell inspeksjon av tungen og beleggindeks ble klassifisert i 4 nivåer: 0 - ingen belegg; 1 - tynt belegg på 1/3; 2 - tynt belegg på mer enn 1/3 eller tykt belegg på bare 1/3; 3 - tykt belegg på mer enn 1/3,5

Evaluering av halitose Etter klinisk undersøkelse ble halitose kvantifisert ved organoleptiske og Halimeter‡ tester. Disse ble utført av en trent og kalibrert undersøker (CRM), med nivåer av samsvar og reproduserbarhet større enn 80 % for organoleptisk test og beleggindeks, ved bruk av test- og retestsammenligninger med en ekspertdommer (CKR). Alle pasientene ble undersøkt mellom kl. 8 og 11. Pasientene ble bedt om å unngå å spise hvitløk, løk og andre krydder i to dager før testing og unngå å overspise margarin, melk, yngel, sardiner, salami, bologna, pølse, rødt kjøtt, oster, mat med svovel i sammensetningen (kål, brokkoli). , blomkål, egg), drikking av alkohol og røyking, etter protokoller rapportert andre steder.5, 13, 15 På undersøkelsesmorgenen skulle pasienter unngå å bruke godteri og tannkjøtt, men fikk spise frokost og tannpuss kun med vann. Når de ble inkludert i studien, ble pasientene bedt om å unngå andre tannkjøtt enn de som ble gitt i studien.

Organoleptisk test Pasienter i hvile ble bedt om å holde luft i munnen mens de pustet gjennom nesen i 1 min. De blåser gjennom munnen med undersøkeren (CRM) plassert 10 cm fra pasientens munn. Pasientens pust ble vurdert fra 0 til 5, som følger: 0 - ingen lukt, 1 - dårlig lukt, knapt merkbar, 2 - lett stank, 3 - moderat stinkende, 4 - sterk stank og 5 - sterk stank.21 Med det formål å velge pasienter, ble halitose ansett som tilstede når denne skåren var lik eller høyere enn 1 i nærvær av tungebelegg.

Halimeter Pasienter fikk målt pusten objektivt ved hjelp av et Halimeter, i stand til å måle VSC-nivået. Halitose identifiseres når enheten registrerer ≥75 ppb.1, 22 Målingene ble gjort ved å sette inn et engangssugerrør inn i pasientens munn over tungen. I følge produsenten ble det endelige resultatet oppnådd som gjennomsnittet av tre målinger.

Prebiotisk, probiotisk og placebo Lactobacillus salivarius G60, inulin og placebo§ (sammensatt av gomagron) ble fremstilt i form av tyggegummi‖, identisk i fysisk utseende, lukt, smak og konsistens, noe som gjorde følgende eksperimentelle grupper: LS+inulin: Lactobacillus salivarius G60 1 milliard kolonidannende enheter (CFU) + inulin 1 g; LS: Lactobacillus salivarius G60 1 milliard CFU; og placebo. Pasientene ble bedt om å bruke 1 tannkjøtt hver 12. time (etter frokost og etter middag) i 10 dager.

Livskvalitetsvurdering For oral relatert livskvalitet (QOL) brukte vi spørreskjemaet OHIP-14, oversatt og validert til brasiliansk portugisisk.23 Sluttresultatet varierer fra 0 (best) til 56 (dårligst). Deltakerne svarte på spørreskjemaene på dag 0 og 14.

Studieprotokoll Pasienter ble evaluert på en tannklinikk, etter trinnene illustrert i figur 2. Etter å ha signert det informerte samtykket, ble kliniske data og livskvalitetsdata registrert, etterfulgt av muntlig undersøkelse for å vurdere tungebelegg, og organoleptisk test for å bekrefte halitose. Etterpå ble Halimeter brukt til å objektivt måle halitose.

Registrerte pasienter ble randomisert av undersøkeren (CRM) ved bruk av en konvoluttkode som var datamaskingenerert, organisert av tannkjøttprodusenten i blokker for 3 pasienter 1:1:1, hver med en av de 3 behandlingene (LS+inulin, LS og placebo ). Derfor ble undersøker og deltakere blindet for behandlinger. Pasientene ble instruert om å bruke 1 tyggegummi hver 12. time fra den fjerde dagen etter intervjuet, og avbryte 2 uker etter det første intervjuet (10 dagers behandling). Denne forsinkelsen på 4 dager før behandlingen startet tillot et intervall på 14 dager for demping av tilbakekallingsbias med OHIP-14. Hver tyggegummi ble plassert i munnen for å fullføre oppløsning, noe som muliggjorde skånsom tygging. Den endelige undersøkelsen ble utført siste behandlingsdag, 12 timer etter bruk av siste tyggegummi, gjentatt beleggindeks, organoleptiske og Halimeter-tester, og livskvalitetsvurdering (OHIP-14). Instruksjoner om munnhygiene ble gitt av undersøkeren (CRM): Pasientene ble bedt om å unngå enhver ny tilnærming som kunne endre halitose, som for eksempel tungerengjøring eller endringer i rutinemessig tannpuss. Behandlingsadherens ble vurdert som antall tannkjøtt som ikke ble brukt i forhold til totalt antall mottatt tannkjøtt. Sikkerhet ble karakterisert i henhold til bivirkninger beskrevet av pasientene, inkludert hodepine, orale plager og abdominale symptomer (ja/ikke). Primære utfall var organoleptisk test, Halimeter og beleggindeks, mens sekundære utfall var livskvalitet og behandlingsoverholdelse/sikkerhet. Allokering i de tre behandlingsgruppene ble avslørt først etter avsluttet dataanalyse.

Metabolisme av inulin av Lactobacillus salivarius G60 Kapasiteten til Lactobacillus salivarius G60 til å metabolisere inulin som en karbonkilde ble testet ved å inokulere 50 ml bakteriesuspensjon LS (1x10⁸-⁹ celler/ml) i bufret fysiologisk saltvannsløsning i 5 ml miljø. definert av metodens deteksjonsgrense (LDM) uten glukose og sukrose men supplert med inulin. Følgende kulturmedier ble fremstilt: PYG (peptongjær + 1% glukose), PYI (peptongjær + 1% inulin) og PY (peptongjær). Sistnevnte fungerte som negativ kontroll. LS G60 tidligere dyrket ble inkludert i disse tre løsningene henholdsvis og inkubert ved 30°C i 24 timer.

Spektrofotometri (Genesys 10S VIS, laget Madison, USA) analyser ved bruk av 600 mm for optisk tetthet (OD) ble utført. For å måle absorbansen ble løsningen med LS G60 justert til OD=1, i henhold til formelen C1.V1=C2.V2 (C1: startkonsentrasjon, V1: startvolum, C2: sluttkonsentrasjon og V2: sluttvolum). Målingene ble utført ved starttidspunktet (null), og etter 2, 4, 6, 8, 10 og 12 timer. Alle testene ble gjentatt for bekreftelse.

Hemming av patogene bakterier med Lactobacillus salivarius G60 Brønndiffusjonstest ble utført. Tre dråper på 10 ml bakteriesuspensjon (1x108-9 celler/ml LS G60) i bufret saltvann ble plassert i soya triptisk agar og inkubert ved 30°C i 3 timer under optimale anaerobe forhold. Platene ble dekket med 10 ml myk soyatriptisk agar (0,7 % agar) og inokulert med 1 ml bakteriesuspensjon (1x108-9 celler/ml) i bufret saltvann av halitose-forårsakende patogener (Porphyromonas gingivalis og Prevotella intermedia) under anaerobic. forhold. De ble inkubert ved 30°C og inhiberingssoner for mikrobiell vekst rundt dråpene ble undersøkt etter 24, 48 og 72 timer.

Statistisk analyse Data ble statistisk analysert av en av forfatterne (SMCJ) blindet for intervensjonene. Innledende sammenligninger mellom grupper av pasienter ble gjort ved å bruke ANOVA (alder) og kjikvadrat (kjønn) tester. Behandlingsverdier på dag 0 og 14 ble først sammenlignet i hver gruppe ved Wilcoxon- eller t-tester for sammenkoblede data. Vi brukte generaliserte lineære modeller (GZLM) for å sammenligne behandlingsmidler som justerer for verdier før intervensjon. Inkludering av kovariabelt kjønn eller alder ble bestemt basert på Akaikes indeks. Kjønn angitt som kovariabel i analysen av Halimeter, alder ble inkludert i modellene for OHIP-14, mens ingen kovariabel ble brukt ved analyse av organoleptisk poengsum. Vi brukte Gama-distribusjon og loggkobling for analysene av Halimeter og OHIP-14, samt Poisson-distribusjon og loggkobling for organoleptisk poengsum og beleggindeks. Konstanten 1 ble lagt til OHIP-14-verdier for å gjøre dem tilgjengelige for bruk av logaritmer. Parvise flere sammenligninger mellom grupper ble gjort ved å bruke minst signifikante forskjeller. Resultater fra metabolisering av inulin av Lactobacillus salivarius G60 ble analysert ved bruk av ANOVA og Tukey post hoc test. De statistiske analysene ble utført med Graph Prism 4.0 og SPSS v.18 programvare. Grensen som ble vurdert for statistisk signifikans var 5 %.