Inulin und S. Salivarius reduzieren Mundgeruch

Teilnehmer An dieser randomisierten, kontrollierten, doppelblinden, parallelen klinischen Studie der Phase II wurden erwachsene Patienten (≥ 18 Jahre alt), die bei Vorhandensein von Zungenbelag über Mundgeruch klagten, zur Teilnahme eingeladen. Sie wurden mit Einladungen in Form von Postern gekennzeichnet, die von August bis November 2015 in den Zahnkliniken der Universität Passo Fundo (UPF) verteilt wurden. Die Dental School befindet sich auf dem Hauptcampus der UPF, Passo Fundo, einer Stadt mit >200.000 Einwohnern Einwohner. Oraler Mundgeruch wurde zunächst durch eine orale Untersuchung zur Identifizierung des Zungenbelags diagnostiziert, gefolgt von einem organoleptischen Test zur Bestätigung des Mundgeruchs. Die Gesamtprobengröße wurde bei 45 Teilnehmern geschätzt, wobei ein Unterschied von 80 % in der Halimeter-Reduktion zwischen den Behandlungen für Tests mit α = 5 % und Power = 80 % berücksichtigt wurde. Mundgeruch wurde durch Halimeter-Werte ≥ 75 ppb definiert. Alle Teilnehmer gaben vor Eintritt in die Studie ihr schriftliches Einverständnis. Das Forschungsprotokoll wurde von der lokalen Ethikkommission genehmigt (CAAE: 40334914.0.0000.5342).

Klinische Untersuchung Die mündliche Untersuchung wurde von einem ausgebildeten Zahnarzt (CRM) durchgeführt, wobei Karies, Plaque, Gingivitis, parodontale Taschen und Zahnersatz identifiziert wurden. Der Belag wurde nach visueller Untersuchung der Zunge beschrieben und der Belagsindex wurde in 4 Stufen eingeteilt: 0 – kein Belag; 1 - dünne Beschichtung auf 1/3; 2 - dünne Beschichtung auf mehr als 1/3 oder dicke Beschichtung auf nur 1/3; 3 - dicke Beschichtung auf mehr als 1/3,5

Bewertung von Mundgeruch Nach der klinischen Untersuchung wurde Mundgeruch durch organoleptische und Halimeter‡-Tests quantifiziert. Diese wurden von einem geschulten und kalibrierten Prüfer (CRM) durchgeführt, mit einem Grad an Übereinstimmung und Reproduzierbarkeit von mehr als 80 % für den organoleptischen Test und den Beschichtungsindex, wobei Test- und Wiederholungsvergleiche mit einem Experten (CKR) verwendet wurden. Alle Patienten wurden zwischen 8 und 11 Uhr untersucht. Die Patienten wurden gebeten, vor dem Test zwei Tage lang auf den Verzehr von Knoblauch, Zwiebeln und anderen Lebensmittelgewürzen zu verzichten und den übermäßigen Verzehr von Margarine, Milch, Braten, Sardinen, Salami, Wurst, rotem Fleisch, Käse, Lebensmitteln mit Schwefel in der Zusammensetzung (Kohl, Brokkoli , Blumenkohl, Ei), Alkoholkonsum und Rauchen, gemäß den an anderer Stelle berichteten Protokollen.5, 13, 15 Am Untersuchungsmorgen sollten die Patienten Bonbons und Kaugummis vermeiden, durften aber nur mit Wasser frühstücken und Zähne putzen. Sobald sie in die Studie aufgenommen wurden, wurden die Patienten gebeten, andere als die in der Studie vorgesehenen Kaugummis zu vermeiden.

Organoleptischer Test Patienten in Ruhe wurden angewiesen, Luft im Mund zu halten, während sie 1 Minute lang durch die Nase atmeten. Sie blasen durch den Mund, wobei der Untersucher (CRM) 10 cm vom Mund des Patienten entfernt positioniert ist. Der Atem des Patienten wurde wie folgt von 0 bis 5 bewertet: 0 – kein Geruch, 1 – schlechter, kaum wahrnehmbarer Geruch, 2 – leichter Gestank, 3 – mäßiger Geruch, 4 – starker Gestank und 5 – starker Gestank.21 Bei der Auswahl der Patienten wurde Mundgeruch als vorhanden betrachtet, wenn dieser Score gleich oder höher als 1 bei Vorhandensein von Zungenbelag war.

Halimeter Der Atem der Patienten wurde objektiv mit einem Halimeter gemessen, das in der Lage ist, den VSC-Wert zu messen. Mundgeruch wird erkannt, wenn das Gerät ≥75 ppb registriert.1, 22 Die Messungen wurden durchgeführt, indem ein Einweg-Strohhalm in den Mund des Patienten oberhalb der Zunge eingeführt wurde. Das Endergebnis wurde laut Hersteller als Mittelwert aus drei Messungen ermittelt.

Präbiotikum, Probiotikum und Placebo Lactobacillus salivarius G60, Inulin und Placebo§ (zusammengesetzt aus Gomagron) wurden in Form von Kaugummi hergestellt, identisch in physikalischem Aussehen, Geruch, Geschmack und Konsistenz, wodurch die folgenden Versuchsgruppen gebildet wurden: LS+Inulin: Lactobacillus salivarius G60 1 Milliarde koloniebildende Einheiten (KBE) + Inulin 1 g; LS: Lactobacillus salivarius G60 1 Milliarde KBE; und Placebos. Die Patienten wurden angewiesen, 10 Tage lang alle 12 Stunden (nach dem Frühstück und nach dem Abendessen) 1 Kaugummi zu verwenden.

Bewertung der Lebensqualität Für die mündliche Lebensqualität (QOL) haben wir den Fragebogen OHIP-14 angewendet, der ins brasilianische Portugiesisch übersetzt und validiert wurde.23 Die Endnote reicht von 0 (am besten) bis 56 (am schlechtesten). Die Teilnehmer beantworteten die Fragebögen an den Tagen 0 und 14.

Studienprotokoll Die Patienten wurden in einer Zahnklinik nach den in Abbildung 2 dargestellten Schritten untersucht. Nach Unterzeichnung der Einverständniserklärung wurden klinische und Lebensqualitätsdaten aufgezeichnet, gefolgt von einer mündlichen Untersuchung zur Beurteilung des Zungenbelags und einem organoleptischen Test zur Bestätigung von Mundgeruch. Anschließend wurde der Halimeter verwendet, um Mundgeruch objektiv zu messen.

Eingeschriebene Patienten wurden vom Prüfer (CRM) unter Verwendung eines computergenerierten Umschlagcodes randomisiert, der vom Zahnfleischhersteller in Blöcken für 3 Patienten 1:1:1 organisiert wurde, die jeweils eine der 3 Behandlungen (LS+Inulin, LS und Placebo) enthielten ). Daher waren Untersucher und Teilnehmer gegenüber Behandlungen verblindet. Die Patienten wurden angewiesen, ab dem vierten Tag nach dem Interview alle 12 Stunden 1 Kaugummi zu verwenden und 2 Wochen nach dem ersten Interview zu unterbrechen (10-tägige Behandlung). Diese Verzögerung von 4 Tagen vor dem Beginn der Behandlung ermöglichte ein Intervall von 14 Tagen zur Abschwächung der Rückrufverzerrung mit OHIP-14. Jeder Kaugummi wurde bis zur vollständigen Auflösung in den Mund gegeben, was ein sanftes Kauen ermöglichte. Die Abschlussuntersuchung wurde am letzten Tag der Behandlung, 12 Stunden nach Verwendung des letzten Kaugummis, wiederholter Beschichtungsindex, organoleptische und Halimeter-Tests und Bewertung der Lebensqualität (OHIP-14) durchgeführt. Anweisungen zur Mundhygiene wurden vom Untersucher (CRM) gegeben: Die Patienten wurden gebeten, alle neuen Ansätze zu vermeiden, die Mundgeruch verändern könnten, wie z. B. Zungenreinigung oder Änderungen beim routinemäßigen Zähneputzen. Die Behandlungsadhärenz wurde als die Anzahl der nicht verwendeten Kaugummis im Verhältnis zur Gesamtzahl der erhaltenen Kaugummis bewertet. Die Sicherheit wurde anhand der von den Patienten beschriebenen Nebenwirkungen charakterisiert, darunter Kopfschmerzen, orale Beschwerden und abdominale Symptome (ja/nein). Primäre Endpunkte waren organoleptischer Test, Halimeter und Beschichtungsindex, während sekundäre Endpunkte Lebensqualität und Therapietreue/-sicherheit waren. Die Zuordnung zu den drei Behandlungsgruppen erfolgte erst nach Abschluss der Datenanalyse.

Metabolismus von Inulin durch Lactobacillus salivarius G60 Die Fähigkeit von Lactobacillus salivarius G60, Inulin als Kohlenstoffquelle zu metabolisieren, wurde durch Inokulation von 50 ml Bakteriensuspension LS (1x10⁸-⁹ Zellen/ml) in gepufferter physiologischer Kochsalzlösung in 5 ml Umgebung halb- definiert durch die Nachweisgrenze der Methode (LDM) ohne Glucose und Saccharose, aber ergänzt mit Inulin. Die folgenden Kulturmedien wurden hergestellt: PYG (Peptonhefe + 1 % Glucose), PYI (Peptonhefe + 1 % Inulin) und PY (Peptonhefe). Letzteres diente als Negativkontrolle. Das zuvor kultivierte LS G60 wurde jeweils in diese drei Lösungen eingeschlossen und bei 30°C für 24 Stunden inkubiert.

Es wurden Spektrophotometrie-Analysen (Genesys 10S VIS, hergestellt in Madison, USA) unter Verwendung von 600 mm für die optische Dichte (OD) durchgeführt. Zur Messung der Extinktion wurde die Lösung mit LS G60 gemäß der Formel C1.V1 = C2.V2 (C1: Anfangskonzentration, V1: Anfangsvolumen, C2: Endkonzentration und V2: Endvolumen) auf OD = 1 eingestellt. Die Messungen wurden zum Anfangszeitpunkt (Null) und nach 2, 4, 6, 8, 10 und 12 Stunden durchgeführt. Alle Tests wurden zur Bestätigung wiederholt.

Hemmung pathogener Bakterien durch Lactobacillus salivarius G60 Es wurde ein Well-Diffusionstest durchgeführt. Drei Tropfen von 10 ml Bakteriensuspension (1 x 10&sup8;&sup9; Zellen/ml LS G60) in gepufferter Kochsalzlösung wurden in Soja-Tripton-Agar gegeben und 3 Stunden bei 30ºC unter optimalen anaeroben Bedingungen inkubiert. Die Platten wurden mit 10 ml weichem Sojatriptikagar (0,7 % Agar) bedeckt und mit 1 ml Bakteriensuspension (1x10&sup8;&supmin;&sup9; Zellen/ml) in gepufferter Salzlösung von Halitosis-verursachenden Pathogenen (Porphyromonas gingivalis und Prevotella intermedia) unter anaeroben Bedingungen inokuliert Bedingungen. Sie wurden bei 30°C inkubiert und die Zonen des Hemmhofs des mikrobiellen Wachstums um die Tröpfchen herum wurden nach 24, 48 und 72 Stunden untersucht.

Statistische Analyse Die Daten wurden statistisch von einem der Autoren (SMCJ) analysiert, der gegenüber den Interventionen verblindet war. Anfängliche Vergleiche zwischen Patientengruppen wurden unter Verwendung von ANOVA- (Alter) und Chi-Quadrat-Tests (Geschlecht) durchgeführt. Die Behandlungswerte an den Tagen 0 und 14 wurden zuerst in jeder Gruppe durch Wilcoxon- oder t-Tests für gepaarte Daten verglichen. Wir haben verallgemeinerte lineare Modelle (GZLM) verwendet, um die Behandlungsmittelwerte zu vergleichen und um Werte vor der Intervention anzupassen. Über die Aufnahme von Kovariable Geschlecht oder Alter wurde auf Basis des Akaike-Index entschieden. Das Geschlecht wurde als Kovariable in die Analyse von Halimeter eingegeben, das Alter wurde in die Modelle für OHIP-14 aufgenommen, während bei der Analyse des organoleptischen Scores keine Kovariable verwendet wurde. Wir verwendeten die Gama-Verteilung und den Log-Link für die Analysen von Halimeter und OHIP-14 sowie die Poisson-Verteilung und den Log-Link für die organoleptischen Bewertungen und den Beschichtungsindex. Die Konstante 1 wurde zu OHIP-14-Werten hinzugefügt, um sie für die Verwendung von Logarithmen zugänglich zu machen. Paarweise Mehrfachvergleiche zwischen den Gruppen wurden unter Verwendung des kleinsten signifikanten Unterschieds durchgeführt. Die Ergebnisse der Metabolisierung von Inulin durch Lactobacillus salivarius G60 wurden unter Verwendung von ANOVA und Tukey-Post-Hoc-Test analysiert. Die statistischen Analysen wurden mit den Softwares Graph Prism 4.0 und SPSS v.18 durchgeführt. Die für die statistische Signifikanz berücksichtigte Grenze betrug 5 %.