Inuline en S. Salivarius verminderen halitose

Deelnemers Aan dit gerandomiseerde, gecontroleerde, dubbelblinde, parallelle fase II klinische onderzoek werden volwassen patiënten (≥18 jaar oud) die klaagden over halitose in aanwezigheid van tongbeslag, uitgenodigd om deel te nemen. Ze werden geïdentificeerd met uitnodigingen in de vorm van posters die van augustus tot november 2015 werden uitgedeeld in de klinieken van de Dental School, University of Passo Fundo (UPF). De tandheelkundige school bevindt zich op de hoofdcampus van UPF, Passo Fundo, een stad met >200.000 bewoners. Orale halitose werd in eerste instantie gediagnosticeerd door mondeling onderzoek voor identificatie van het tongbeslag, gevolgd door een organoleptische test om de halitose te bevestigen. De totale steekproefomvang werd geschat bij 45 deelnemers, rekening houdend met een verschil van 80% in Halimeter-reductie tussen behandelingen, voor tests met α = 5% en power = 80%. Halitose werd gedefinieerd door Halimeter-waarden ≥ 75 ppb. Alle deelnemers gaven schriftelijke toestemming voordat ze aan het onderzoek deelnamen. Het onderzoeksprotocol werd goedgekeurd door de lokale ethische commissie (CAAE: 40334914.0.0000.5342).

Klinisch onderzoek Mondeling onderzoek werd uitgevoerd door een getrainde tandarts (CRM), waarbij tandholten, tandplak, gingivitis, parodontale pockets en eventuele tandprothesen werden geïdentificeerd. Coating werd beschreven na visuele inspectie van de tong en coatingindex werd geclassificeerd in 4 niveaus: 0 - geen coating; 1 - dunne laag op 1/3; 2 - dunne coating op meer dan 1/3 of dikke coating op slechts 1/3; 3 - dikke coating op meer dan 1/3,5

Evaluatie van halitose Na klinisch onderzoek werd halitose gekwantificeerd door middel van organoleptische en Halimeter‡-testen. Deze werden uitgevoerd door een getrainde en gekalibreerde examinator (CRM), met niveaus van overeenstemming en reproduceerbaarheid van meer dan 80% voor organoleptische test en coatingindex, met behulp van test- en hertestvergelijkingen met een deskundige rechter (CKR). Alle patiënten werden tussen 8 en 11 uur onderzocht. Patiënten werd gevraagd om gedurende twee dagen vóór het testen geen knoflook, ui en andere voedselkruiden te eten en te veel te eten van margarine, melk, gebraden vlees, sardines, salami, bologna, worst, rood vlees, kaas, voedsel met zwavel in de samenstelling (kool, broccoli , bloemkool, ei), alcohol drinken en roken, volgens elders gerapporteerde protocollen.5, 13, 15 In de ochtend van het onderzoek moesten de patiënten snoep en kauwgom vermijden, maar mochten alleen met water ontbijten en tanden poetsen. Eenmaal opgenomen in de studie, werd de patiënten gevraagd om ander tandvlees te vermijden dan die in de proef.

Organoleptische test Patiënten in rust werden geïnstrueerd om gedurende 1 minuut lucht in de mond te houden terwijl ze door de neus ademen. Ze blazen door de mond met de examinator (CRM) op 10 cm van de mond van de patiënt. De adem van de patiënt werd als volgt beoordeeld van 0 tot 5: 0 - geen geur, 1 - slechte nauwelijks waarneembare geur, 2 - lichte stank, 3 - matig stinkende, 4 - sterke stank en 5 - ernstige stank.21 Met het doel patiënten te selecteren, werd halitose als aanwezig beschouwd wanneer deze score gelijk was aan of hoger dan 1 in aanwezigheid van tongbeslag.

Halimeter Patiënten lieten hun adem objectief meten met behulp van een Halimeter, die het VSC-niveau kan meten. Halitose wordt geïdentificeerd wanneer het apparaat ≥75 ppb registreert.1, 22 De metingen werden uitgevoerd door een wegwerprietje boven de tong in de mond van de patiënt te steken. Volgens de fabrikant werd het eindresultaat verkregen als het gemiddelde van drie metingen.

Prebiotisch, probiotisch en placebo Lactobacillus salivarius G60, inuline en placebo§ (samengesteld uit gomagron) werden bereid in de vorm van gom‖, identiek qua uiterlijk, geur, smaak en consistentie waardoor de volgende experimentele groepen ontstonden: LS+inuline: Lactobacillus salivarius G60 1 miljard kolonievormende eenheden (CFU) + inuline 1 g; LS: Lactobacillus salivarius G60 1 miljard CFU; en placebo. Patiënten kregen de instructie om gedurende 10 dagen elke 12 uur (na het ontbijt en na het avondeten) 1 kauwgom te gebruiken.

Beoordeling van kwaliteit van leven Voor mondeling gerelateerde kwaliteit van leven (QOL) hebben we de vragenlijst OHIP-14 toegepast, vertaald en gevalideerd in het Braziliaans-Portugees.23 De uiteindelijke score varieert van 0 (beste) tot 56 (slechtste). Deelnemers beantwoordden de vragenlijsten op dag 0 en 14.

Studieprotocol Patiënten werden geëvalueerd in een tandheelkundige kliniek, waarbij de stappen werden gevolgd die worden geïllustreerd in afbeelding 2. Na ondertekening van de geïnformeerde toestemming werden klinische gegevens en gegevens over de kwaliteit van leven geregistreerd, gevolgd door een mondeling onderzoek om de tongcoating te beoordelen en een organoleptische test om halitose te bevestigen. Daarna werd de Halimeter gebruikt om halitose objectief te meten.

Ingeschreven patiënten werden gerandomiseerd door de onderzoeker (CRM) met behulp van een envelopcode die door de computer was gegenereerd, georganiseerd door de tandvleesfabrikant in blokken voor 3 patiënten 1:1:1, elk met een van de 3 behandelingen (LS+inuline, LS en placebo ). Daarom waren onderzoeker en deelnemers blind voor behandelingen. Patiënten kregen de instructie om elke 12 uur 1 kauwgom te gebruiken, beginnend op de vierde dag na het interview en 2 weken na het eerste interview (10 dagen behandeling) onderbroken. Deze vertraging van 4 dagen voor het starten van de behandeling maakte een interval van 14 dagen mogelijk voor verzwakking van de herinneringsbias met OHIP-14. Elke kauwgom werd in de mond geplaatst om volledig op te lossen, waardoor voorzichtig gekauwd kon worden. Het eindonderzoek werd uitgevoerd op de laatste dag van de behandeling, 12 uur na het gebruik van de laatste kauwgom, herhalende coatingindex, organoleptische en halimetertesten en beoordeling van de kwaliteit van leven (OHIP-14). Instructies over mondhygiëne werden gegeven door de examinator (CRM): patiënten werd gevraagd om elke nieuwe aanpak die halitose zou kunnen veranderen, zoals tongreiniging of veranderingen in routinematig tandenpoetsen, te vermijden. Therapietrouw werd beoordeeld als het aantal niet-gebruikte tandvlees in verhouding tot het totale aantal ontvangen tandvlees. De veiligheid werd gekarakteriseerd aan de hand van door de patiënten beschreven bijwerkingen, waaronder hoofdpijn, mondklachten en buikklachten (wel/niet). Primaire uitkomstmaten waren organoleptische test, Halimeter en coatingindex, terwijl secundaire uitkomstmaten kwaliteit van leven en therapietrouw/veiligheid waren. Toewijzing in de drie behandelingsgroepen werd pas onthuld na beëindiging van de gegevensanalyse.

Metabolisme van inuline door Lactobacillus salivarius G60 Het vermogen van Lactobacillus salivarius G60 om inuline als koolstofbron te metaboliseren werd getest door 50 ml bacteriesuspensie LS (1x10⁸-⁹ cellen/ml) te inoculeren in een gebufferde fysiologische zoutoplossing in 5 ml omgevingshalf- gedefinieerd door de detectielimiet van de methode (LDM) zonder glucose en sucrose maar aangevuld met inuline. De volgende kweekmedia werden bereid: PYG (peptongist + 1% glucose), PYI (peptongist + 1% inuline) en PY (peptongist). De laatste diende als negatieve controle. De eerder gekweekte LS G60 werd in respectievelijk deze drie oplossingen opgenomen en gedurende 24 uur bij 30°C geïncubeerd.

Spectrofotometrie (Genesys 10S VIS, made Madison, VS) analyses met 600 mm voor optische dichtheid (OD) werden uitgevoerd. Om de absorptie te meten, werd de oplossing met LS G60 afgesteld op OD=1, volgens de formule C1.V1=C2.V2 (C1: beginconcentratie, V1: beginvolume, C2: eindconcentratie en V2: eindvolume). De metingen werden uitgevoerd op het begintijdstip (nul) en na 2, 4, 6, 8, 10 en 12 uur. Alle tests werden herhaald ter bevestiging.

Remming van pathogene bacteriën door Lactobacillus salivarius G60 Well diffusietest werd uitgevoerd. Drie druppels van 10 ml bacteriesuspensie (1 x 10⁸-⁹ cellen/ml LS G60) in gebufferde zoutoplossing werden in soja-triptische agar geplaatst en gedurende 3 uur bij 30°C onder optimale anaerobe omstandigheden geïncubeerd. De platen werden bedekt met 10 ml triptische agar-agar van zachte soja (0,7% agar) en geïnoculeerd met 1 ml bacteriesuspensie (1 x 10⁸-⁹ cellen/ml) in gebufferde zoutoplossing van halitose-veroorzakende pathogenen (Porphyromonas gingivalis en Prevotella intermedia) onder anaerobe omstandigheden. conditie. Ze werden bij 30°C geïncubeerd en zones van remmende halo van microbiële groei rond de druppeltjes werden na 24, 48 en 72 uur onderzocht.

Statistische analyse Gegevens werden statistisch geanalyseerd door een van de auteurs (SMCJ) die blind was voor de interventies. Eerste vergelijkingen tussen groepen patiënten werden gedaan met behulp van ANOVA (leeftijd) en chi-kwadraat (geslacht) tests. Behandelingswaarden op dag 0 en 14 werden eerst vergeleken in elke groep door middel van Wilcoxon- of t-testen voor gepaarde gegevens. We gebruikten gegeneraliseerde lineaire modellen (GZLM) om behandelingsmiddelen te vergelijken, gecorrigeerd voor pre-interventiewaarden. De opname van covariabele geslacht of leeftijd werd besloten op basis van Akaike's index. Geslacht ingevoerd als covariabele in de analyse van Halimeter, leeftijd werd opgenomen in de modellen voor OHIP-14, terwijl er geen covariabele werd gebruikt bij het analyseren van de organoleptische score. We gebruikten Gama-distributie en log-link voor de analyses van Halimeter en OHIP-14, evenals Poisson-distributie en log-link voor organoleptische scores en coating-index. De constante 1 is toegevoegd aan OHIP-14-waarden om ze geschikt te maken voor het gebruik van logaritmen. Paarsgewijze meerdere vergelijkingen tussen groepen werden gemaakt met behulp van het minst significante verschil. Resultaten van de metabolisatie van inuline door Lactobacillus salivarius G60 werden geanalyseerd met behulp van ANOVA en Tukey post hoc-test. De statistische analyses werden uitgevoerd met behulp van Graph Prism 4.0 en SPSS v.18-software. De limiet voor statistische significantie was 5%.