Vliv operace zmenšení žaludku na parametry amoxicilinu

Studijní populace

Osm obézních dobrovolníků obou pohlaví ve věku od 18 do 60 let bylo vybráno z programu obezity generála Dr. Césara Calse s indikací bariatrické chirurgie na základě kritérií stanovených Federální lékařskou radou (2015) a kteří byli operováni pomocí chirurgické techniky RYGB.

Všechny subjekty podepsaly formulář informovaného souhlasu. Studie byla schválena institucionálním kontrolním výborem (IRB) Federální univerzity v Ceará, akreditovaným Národní komisí pro etiku výzkumu – Národní zdravotní radou, Ministerstvem zdravotnictví a Vědeckým výborem nemocnice General Dr. César Cals. Studie byla provedena v souladu s etickými zásadami Helsinské deklarace revidované v roce 2013 a Pokyny pro správnou klinickou praxi.

Návrh studie a farmakokinetické odběry vzorků

Tato studie byla provedena jako monocentrická, otevřená, randomizovaná studie s jednou dávkou se dvěma léčebnými obdobími - před operací (čas 0 - T0) a 2 měsíce po bariatrické operaci (čas 2 - T2). V každém období obézní dobrovolníci dostali jednu perorální dávku amoxicilinu 500 mg kapsle (Amoxil®, GlaxoSmithKline Brazil Ltda.) s 200 ml vody po celonočním hladovění (přibližně 8 hodin). Subjekty zůstaly nalačno až 3 hodiny po užití léku. Omezení vody a potravy bylo udržováno až 3 hodiny po příjmu formulace. Všem subjektům byla nabízena standardní strava. Dobrovolníci, kteří potřebovali použít jakoukoli medikaci (antihypertenziva, antidiabetika a další), byli instruováni, aby ji použili 3 hodiny po požití amoxicilinu. Vzorky krve (6 ml) pro stanovení plazmatické koncentrace amoxicilinu byly odebrány žilním katetrem do heparinizovaných zkumavek před dávkou (0 h), 0,33, 0,66, 1, 1,5, 2, 2,5, 3, 4, 6 a 8 h po dávce. Vzorky plazmy pro chromatografickou analýzu byly získány centrifugací (2000 g x 12 min při 4 °C) vzorků krve. Vzorky plazmy byly skladovány při -20 °C až do analýzy.

Antropometrické parametry před a po operaci

Při každé návštěvě (T0 a T2) byla měřena hmotnost a výška všech dobrovolníků a následně byl vypočten jejich index tělesné hmotnosti (BMI) pro antropometrické srovnání před a po bariatrické operaci. Tělesná hmotnost byla měřena pomocí digitální váhy a dobrovolníci měli na sobě lehké oblečení, bosi, s prázdnými kapsami a bez doplňků. Výška byla měřena pomocí stadiometru s výsuvem 2 metry. Subjekty byly bosé, s nohama a chodidly paralelně, váha byla rozložena na obě chodidla, paže byly uvolněné po stranách těla a dlaně směřovaly k tělu a hlava byla umístěna ve frankfurtské rovině.

Postup bariatrické chirurgie

Všichni dobrovolníci zahrnutí do této studie byli operováni pomocí chirurgické techniky RYGB, prováděné stejným chirurgickým týmem, po standardizaci velikosti alimentární kličky (1,20 m délky) a biliopankreatické kličky (1 m délky). Gastrojejunoanastomóza byla kalibrována sondou Fouchet 32F, výsledkem byl průměr 12 mm.

Analytická metoda

Plazmatická koncentrace amoxicilinu byla kvantifikována kapalinovou chromatografií spojenou s hmotnostní spektrometrií (LC-MS/MS) a extrakcí kapalina-kapalina.

K přípravě vzorku bylo do skleněné zkumavky přidáno 100 ul každého vzorku plazmy, 50 ul vnitřního standardu (IS) cefalexinu (2,5 ug/ml) a 500 ul acetonitrilu (100 %). Vzorky byly vortexovány (30 sekund) a centrifugovány (2000 g x 4 minuty při 4 °C). Organická fáze byla přenesena do další skleněné zkumavky, do které bylo přidáno 500 ul deionizované vody a vortexována (10 sekund). Ke vzorkům bylo přidáno 10 ml dichlormethanu (100 %), vortexovány (10 sekund) a odstředěny (2000 g x 4 min při 4 °C). Organická fáze byla přenesena do autoinjektorových PCR destiček.

Systém vysokotlaké kapalinové chromatografie (HPLC) (Agilent, Německo) sestával z čerpadla LC-10AD, autoinjektorového modelu CTC HST PAL/ 110695 a pece G1316A/DE03018295. Extrahované roztoky (10 ul) byly vstříknuty do 150 x 4,6 mm (částice 5 μm) Inertsil ODS-C18 kolony udržované při 65 °C a mobilní fáze byla methanol/voda (30/70, v/v) + 0,1 % kyselina mravenčí při průtoku 900 μL/min s dělicím poměrem 1:3. Použitý hmotnostní spektrometr byl Quattro Micro (Micromass, Manchester, UK) s elektrosprejem v pozitivním režimu pro MRM (monitorování vícenásobných reakcí) pro monitorování přechodů 366,00 >348,90 a 348,00 >158,00 pro amoxicilin a cefalexin, v daném pořadí.

Validace metody byla provedena podle pokynů pro validaci bioanalytických metod United States Food and Drug Administration (FDA) [22] a Brazilské národní agentury pro hygienický dohled (ANVISA) [23]. Pro vyhodnocení specifičnosti metody bylo testováno osm různých slepých šarží plazmy (4 normální, 2 hemolyzované a 2 lipemické) na své interference za použití navrženého extrakčního postupu a chromatografických nebo spektroskopických podmínek a porovnány s těmi získanými ve vzorcích zpracovaných z dolní mez kvantifikace (LLOQ). Kalibrační křivky byly připraveny testováním standardních vzorků plazmy při osmi koncentracích amoxicilinu (20-5000 ng/ml) v triplikátech a linearita každé kalibrační křivky byla stanovena vynesením poměru plochy píku (y) amoxicilinu/IS vs. nominální hodnota. koncentrace analytu. Kalibrační křivka byla sestrojena váženou (1/x) lineární regresí nejmenších čtverců. Přesnost a přesnost testu byly hodnoceny intra- a inter-testovými studiemi. Sedm alikvotů LLOQ a každý vzorek plazmy pro kontrolu kvality (QC) (60, 850, 2500, 4000 a 12 000 ng/ml) bylo testováno ve třech validačních várkách ve třech různých dnech. Mezidenní a vnitrodenní přesnosti byly stanoveny jako variační koeficient, CV (%) = (SD/M) x 100 a přesnost jako procentuální relativní chyba, RE (%) = [(E - T)/T] x 100 , kde M je průměr, SD je směrodatná odchylka M, E je experimentálně stanovená koncentrace a T je teoretická koncentrace. Experimenty s matricovým efektem byly provedeny s použitím poměru mezi amoxicilinem (60 a 4000 ng/ml) a IS injikovaným přímo do mobilní fáze a standardními roztoky přidanými do slepých extraktů plazmy (4 normální, 2 hemolyzované a 2 lipemické). Každý vzorek byl získán maticovým faktorem normalizovaným pomocí IS (MFN) podle následujícího vzorce: MFN = (odpověď analytu v matrici/matici odpovědi vnitřního standardu)/(odpověď analytu v roztoku/odpověď roztoku vnitřního standardu ). Vzorky plazmy stability QC (60 a 4000 ng/ml) byly podrobeny krátkodobým (6,0 h) pokojové teplotě, třem cyklům zmrazení-rozmrazení (-20 až 25 °C) a 46,5 h autosampleru (25 °C) testům stability v trojím provedení . Výsledky stability byly porovnány s nominálními hodnotami.

Farmakokinetická analýza

Farmakokinetické parametry byly získány na základě křivek plazmatické koncentrace vs. času analyzovaných nekompartmentovým modelem za použití softwaru Phoenix WinNonlin®, verze 5.0 (Pharsight Corp, MoutainView, CA, USA). Hodnoty pro maximální plazmatickou koncentraci (Cmax) a dobu do Cmax (tmax) byly získány přímo z pozorovaných individuálních plazmatických koncentrací vs. časových křivek. Plocha pod křivkou koncentrace v plazmě vs. čas od času nula do času poslední kvantifikovatelné koncentrace byla vypočtena pomocí lineárního lichoběžníkového pravidla. Rychlostní konstanta eliminace (ke) byla získána log-lineární regresní analýzou a poločas eliminace (t1/2) byl vypočten pomocí rovnice [t1/2=ln(2)/ke].

Statistická analýza

Kvantitativní proměnné (spojité a diskrétní) byly zpočátku analyzovány Kolmogorov-Smirnovovým testem, aby se ověřila normalita rozdělení. Protože byl tento požadavek ve většině případů ověřen, byla pro deskriptivní statistiku vypočtena střední hodnota a směrodatná odchylka (SD). Pro analytickou statistiku byly použity parametrické testy.

Pro srovnání farmakokinetických parametrů obézních dobrovolníků získaných před (T0) a po (T2) bariatrické operaci byl použit t-test pro párová data. Byl také stanoven průměrný rozdíl (nebo průměr rozdílů) a jejich příslušný 95% interval spolehlivosti (95% CI). Dále byl vypočten poměr mezi hodnotami parametrů ověřených před a po bariatrické operaci, vyjádřený jako geometrický průměr a jeho 95% CI. Stupeň a znaménko lineární korelace mezi dvěma proměnnými byly hodnoceny pomocí Pearsonova korelačního koeficientu, doprovázeného jeho 95% CI.

Ve všech analýzách byly použity dvoustranné testy se stanovením hladiny významnosti na 0,05. Pro statistické analýzy i grafiku byl použit software GraphPad Prism, verze 5.00 (GraphPad Software, San Diego, Kalifornie, USA).