Efeito da cirurgia de redução do estômago nos parâmetros da amoxicilina

População do estudo

Oito voluntários obesos de ambos os sexos, com idade entre 18 e 60 anos, selecionados do programa de obesidade do Hospital Geral Dr. César Cals com indicação de cirurgia bariátrica com base nos critérios estabelecidos pelo Conselho Federal de Medicina (2015) e que foram operados usando a técnica de cirurgia RYGB.

Todos os sujeitos assinaram o termo de consentimento informado. O estudo foi aprovado pelo Comitê de Ética em Pesquisa (CIR) da Universidade Federal do Ceará, credenciado pela Comissão Nacional de Ética em Pesquisa - Conselho Nacional de Saúde, Ministério da Saúde e Comitê Científico do Hospital Geral Dr. César Cals. O estudo foi realizado de acordo com os princípios éticos da Declaração de Helsinque revisada em 2013 e as Diretrizes de Boas Práticas Clínicas.

Desenho do estudo e amostragem farmacocinética

Este estudo foi realizado como um estudo monocêntrico, aberto, randomizado, de dose única com dois períodos de tratamento - antes da cirurgia (Tempo 0 - T0) e 2 meses após a cirurgia bariátrica (Tempo 2 - T2). Em cada período, os voluntários obesos receberam uma única dose oral de amoxicilina 500 mg cápsula (Amoxil®, GlaxoSmithKline Brasil Ltda.) com 200 mL de água após jejum noturno (aproximadamente 8 h). Os sujeitos permaneceram em jejum por até 3 h após a ingestão da medicação. A restrição hídrica e alimentar foi mantida até 3 h após a ingestão da formulação. Refeições padrão foram oferecidas a todos os indivíduos. Os voluntários que precisassem usar algum medicamento (anti-hipertensivo, antidiabético e outros) foram orientados a utilizá-lo 3 h após a ingestão da amoxicilina. Amostras de sangue (6 mL) para determinação da concentração plasmática de amoxicilina foram coletadas por meio de um cateter venoso em tubos heparinizados em pré-dose (0 h), 0,33, 0,66, 1, 1,5, 2, 2,5, 3, 4, 6 e 8 h pós-dose. As amostras de plasma para análise cromatográfica foram obtidas por centrifugação (2000 g x 12 min a 4 ºC) das amostras de sangue. As amostras de plasma foram armazenadas a -20 °C até a análise.

Parâmetros antropométricos antes e depois da cirurgia

A cada visita (T0 e T2) foram medidos o peso e a altura de todos os voluntários, seguido do cálculo do índice de massa corporal (IMC) para comparação antropométrica antes e após a cirurgia bariátrica. O peso corporal foi aferido por meio de balança digital, e as voluntárias estavam com roupas leves, descalças, com os bolsos vazios e sem acessórios. A estatura foi medida por meio de um estadiômetro com extensão de 2 metros. Os sujeitos estavam descalços, com pernas e pés paralelos, peso distribuído em ambos os pés, braços relaxados ao lado do corpo e palmas das mãos voltadas para o corpo e cabeça posicionada no plano de Frankfurt.

Procedimento de cirurgia bariátrica

Todos os voluntários incluídos neste estudo foram operados pela técnica de cirurgia RYGB, realizada pela mesma equipe cirúrgica, seguindo uma padronização para o tamanho da alça alimentar (1,20 m de comprimento) e da alça biliopancreática (1 m de comprimento). A gastrojejunoanastomose foi calibrada por uma sonda Fouchet 32F, resultando em um diâmetro de 12 mm.

Método Analítico

A concentração plasmática de amoxicilina foi quantificada por cromatografia líquida acoplada a espectrometria de massas (LC-MS/MS) e extração líquido-líquido.

Para a preparação da amostra, 100 µL de cada amostra de plasma, 50 µL do padrão interno (IS) cefalexina (2,5 µg/mL) e 500 µL de acetonitrila (100%) foram adicionados em um tubo de vidro. As amostras foram agitadas em vórtex (30 seg) e centrifugadas (2000 g x 4 min a 4 ºC). A fase orgânica foi transferida para outro tubo de vidro, ao qual foram adicionados 500 µL de água deionizada e agitado no vórtex (10 seg). As amostras foram adicionadas de 10 mL de diclorometano (100 %), agitadas em vórtex (10 seg) e centrifugadas (2000 g x 4 min a 4 ºC). A fase orgânica foi transferida para as placas de PCR do auto-injetor.

O sistema de cromatografia líquida de alta pressão (HPLC) (Agilent, Alemanha) consistia em uma bomba LC-10AD, autoinjetor modelo CTC HST PAL/110695 e um forno G1316A/DE03018295. As soluções extraídas (10 µL) foram injetadas em uma coluna Inertsil ODS-C18 de 150 x 4,6 mm (partículas de 5 μm) mantida a 65 ◦C e a fase móvel foi metanol/água (30/70, v/v) + 0,1% ácido fórmico a uma taxa de fluxo de 900 μL/min com uma proporção de divisão de 1:3. O espectrômetro de massa utilizado foi um Quattro Micro (Micromass, Manchester, Reino Unido) com eletrospray em modo positivo para MRM (Multiple Reaction Monitoring) para monitorar as transições 366,00 >348,90 e 348,00 >158,00 para amoxicilina e cefalexina, respectivamente.

A validação do método foi realizada de acordo com as diretrizes de validação de métodos bioanalíticos da Food and Drug Administration (FDA) dos Estados Unidos [22] e da Agência Nacional de Vigilância Sanitária (ANVISA) [23]. Para avaliar a especificidade do método, oito diferentes lotes de plasma em branco (4 normais, 2 hemolisados ​​e 2 lipêmicos) foram testados quanto às suas interferências usando o procedimento de extração proposto e as condições cromatográficas ou espectroscópicas e comparados com os obtidos nas amostras processadas do limite inferior de quantificação (LLOQ). As curvas de calibração foram preparadas analisando amostras de plasma padrão em oito concentrações de amoxicilina (20-5000 ng/mL) em triplicado e a linearidade de cada curva de calibração foi determinada traçando a razão da área do pico (y) de amoxicilina/IS vs. nominal concentração do analito. A curva de calibração foi construída por regressão linear de mínimos quadrados ponderada (1/x). A exatidão e a precisão do ensaio foram avaliadas por estudos intra e interensaios. Sete alíquotas de LLOQ e cada amostra de plasma de controle de qualidade (QC) (60, 850, 2.500, 4.000 e 12.000 ng/mL) foram executadas em três lotes de validação em três dias diferentes. As precisões entre e intradias foram determinadas como coeficiente de variação, CV (%) = (SD/M) x 100 e a precisão como o erro relativo percentual, RE (%) = [(E - T)/T] x 100 , onde M é a média, SD é o desvio padrão de M, E é a concentração determinada experimentalmente e T é a concentração teórica. Os experimentos de efeito de matriz foram realizados usando a proporção entre amoxicilina (60 e 4000 ng/mL) e SI injetado diretamente na fase móvel e soluções padrão adicionadas aos extratos de plasma em branco (4 normais, 2 hemolisados ​​e 2 lipêmicos). Cada amostra foi obtida por um fator de matriz normalizado por IS (MFN) de acordo com a seguinte fórmula: MFN = (resposta do analito na matriz/matriz de resposta padrão interno)/(resposta do analito em solução/resposta da solução padrão interno ). As amostras de plasma de CQ de estabilidade (60 e 4000 ng/mL) foram submetidas a testes de estabilidade de curto prazo (6,0 h) à temperatura ambiente, três ciclos de congelamento-descongelamento (-20 a 25 °C) e testes de estabilidade de amostrador automático de 46,5 h (25 °C) em triplicata . Os resultados de estabilidade foram comparados com os valores nominais.

Análise farmacocinética

Os parâmetros farmacocinéticos foram obtidos com base nas curvas de concentração plasmática versus tempo analisadas por um modelo não compartimental usando o software Phoenix WinNonlin®, versão 5.0 (Pharsight Corp, MoutainView, CA, EUA). Os valores para a concentração plasmática máxima (Cmax) e o tempo até à Cmax (tmax) foram obtidos directamente a partir da concentração plasmática individual observada vs. curvas de tempo. A área sob a curva concentração plasmática versus tempo desde o tempo zero até o momento da última concentração quantificável foi calculada pela regra trapezoidal linear. A constante de taxa de eliminação (ke) foi obtida por análise de regressão log-linear, e a meia-vida de eliminação (t1/2) foi calculada com a equação [t1/2=ln(2)/ke].

Análise estatística

As variáveis ​​quantitativas (contínuas e discretas) foram inicialmente analisadas pelo teste de Kolmogorov-Smirnov para verificar a normalidade da distribuição. Como essa exigência foi verificada na maioria dos casos, média e desvio padrão (DP) foram calculados para estatística descritiva. Testes paramétricos foram usados ​​para estatísticas analíticas.

Para comparar os parâmetros farmacocinéticos dos voluntários obesos obtidos antes (T0) e depois (T2) da cirurgia bariátrica, foi utilizado o teste t para dados pareados. A diferença média (ou média das diferenças) e seus respectivos intervalos de confiança de 95% (IC 95%) também foram determinados. Além disso, calculou-se a razão entre os valores dos parâmetros verificados antes e após a cirurgia bariátrica, sendo expressa em média geométrica e seu IC 95%. O grau e o sinal da correlação linear entre duas variáveis ​​foram avaliados pelo coeficiente de correlação de Pearson, acompanhado de seu IC 95%.

Em todas as análises foram utilizados testes bicaudais, estabelecendo-se o nível de significância de 0,05. O software GraphPad Prism, versão 5.00 (GraphPad Software, San Diego, Califórnia, EUA) foi utilizado tanto para análises estatísticas quanto para gráficos.