アモキシシリンのパラメーターに対する胃縮小手術の影響

調査対象母集団

18 歳から 60 歳までの男女 8 人の肥満ボランティアが、連邦医療評議会 (2015) によって確立された基準に基づいて肥満外科手術の適応があるセザール・カルス病院長の肥満プログラムから選ばれ、手術を受けました。 RYGB 手術法を使用します。

すべての被験者は、インフォームド コンセント フォームに署名しました。 この研究は、国立研究倫理委員会 - 国立保健評議会、保健省、および病院総長のセザール・カルズ博士の科学委員会によって認定された、セアラ連邦大学の機関審査委員会 (IRB) によって承認されました。 この研究は、2013 年に改訂されたヘルシンキ宣言の倫理原則とグッド クリニカル プラクティス ガイドラインに従って実施されました。

研究デザインと薬物動態サンプリング

この研究は、手術前 (時間 0 - T0) と肥満手術の 2 か月後 (時間 2 - T2) の 2 つの治療期間で、一中心、非盲検、無作為化、単回投与研究として実施されました。 各期間で、肥満のボランティアは、一晩の絶食後（約 8 時間）、200 mL の水とともにアモキシシリン 500 mg カプセル（Amoxil®、GlaxoSmithKline Brazil Ltda.）の単回経口投与を受けました。 被験者は、投薬後 3 時間まで絶食を続けた。 水分と食物の制限は、製剤の摂取後 3 時間まで保持されました。 標準的な食事はすべての被験者に提供されました。 薬（降圧薬、抗糖尿病薬など）を使用する必要のあるボランティアは、アモキシシリン摂取の3時間後に使用するように指示されました. アモキシシリンの血漿濃度を決定するための血液サンプル (6 mL) は、投与前 (0 h)、0.33、0.66、1、1.5、2、2.5、3、4、6、および 8 で、静脈カテーテルを介してヘパリン添加チューブに収集されました。 h 投与後。 クロマトグラフ分析用の血漿サンプルは、血液サンプルの遠心分離 (4 ºC で 2000 g x 12 分) によって得られました。 血漿サンプルは、分析まで-20°Cで保存されました。

手術前後の人体計測パラメータ

各訪問 (T0 および T2) で、すべてのボランティアの体重と身長が測定され、続いて、肥満手術の前後の人体計測比較のために彼らの体格指数 (BMI) が計算されました。 体重はデジタルスケールを使用して測定され、ボランティアは裸足でポケットが空でアクセサリーのない軽い服を着ていました. 身長は、2 メートルの拡張機能を備えたスタディオメーターを使用して測定されました。 被験者は裸足で、足と足は平行で、体重は両足に分散され、腕は体の側面でリラックスし、手のひらは体に向けられ、頭はフランクフルト平面に置かれました。

肥満手術の手順

この試験に含まれるすべてのボランティアは、同じ外科チームによって行われた RYGB 手術技術を使用して手術を受け、消化ループのサイズ (長さ 1.20 m) と胆膵ループ (長さ 1 m) の標準化に続いて行われました。 胃空腸吻合は Fouchet 32​​F プローブによって較正され、直径は 12 mm になりました。

分析方法

アモキシシリンの血漿中濃度は、質量分析 (LC-MS/MS) と液液抽出を組み合わせた液体クロマトグラフィーによって定量化されました。

サンプル前処理として、各血漿サンプル 100 μL、内部標準 (IS) セファレキシン (2.5 μg/mL) 50 μL、アセトニトリル (100 %) 500 μL をガラス管に加えました。 サンプルをボルテックス (30 秒) し、遠心分離 (4 ºC で 2000 g x 4 分) しました。 有機相を別のガラス管に移し、500 μL の脱イオン水を加えてボルテックスしました (10 秒)。 サンプルに 10 mL のジクロロメタン (100 %) を加え、ボルテックス (10 秒) し、遠心分離 (2000 g x 4 分間、4 ºC) しました。 有機相をオートインジェクター PCR プレートに移した。

高圧液体クロマトグラフィー (HPLC) システム (Agilent、ドイツ) は、LC-10AD ポンプ、オートインジェクター モデル CTC HST PAL/ 110695、および G1316A/DE03018295 オーブンで構成されていました。 抽出した溶液 (10 µL) を 150 x 4.6 mm (5 µm 粒子) の Inertsil ODS-C18 カラムに注入し、65 ℃ に維持しました。移動相はメタノール/水 (30/70、v/v) + 0.1 % でした。流量 900 μL/min、スプリット比 1:3 のギ酸。 使用した質量分析計は、アモキシシリンとセファレキシンの遷移 366.00 > 348.90 と 348.00 > 158.00 を監視するために、MRM (Multiple Reaction Monitoring) 用のポジティブ モードのエレクトロ スプレーを備えた Quattro Micro (Micromass、マンチェスター、英国) でした。

メソッドの検証は、米国食品医薬品局 (FDA) の生物分析メソッド検証ガイダンス [22] およびブラジル国立衛生監視局 (ANVISA) [23] に従って実施されました。 メソッドの特異性を評価するために、8 つの異なるブランク血漿ロット (4 つの正常、2 つの溶血および 2 つの脂肪血症) を、提案された抽出手順およびクロマトグラフィーまたは分光条件を使用してその干渉についてテストし、から処理されたサンプルで得られたものと比較しました。定量下限 (LLOQ)。 検量線は、アモキシシリンの 8 つの濃度 (20 ～ 5000 ng/mL) で標準血漿サンプルを 3 回アッセイすることによって作成され、各検量線の直線性は、アモキシシリン/IS 対公称値のピーク面積比 (y) をプロットすることによって決定されました。分析物の濃度。 検量線は、加重 (1/x) 最小二乗線形回帰によって作成されました。 アッセイの精度と精度は、アッセイ内およびアッセイ間研究によって評価されました。 LLOQ の 7 つのアリコートと各品質管理 (QC) 血漿サンプル (60、850、2500、4000、および 12000 ng/mL) を、3 つの異なる日に 3 つの検証バッチで実行しました。 間および日中の精度は、変動係数 CV (%) = (SD/M) x 100 として決定され、精度は相対誤差のパーセンテージ RE (%) = [(E - T)/T] x 100 として決定されました。ここで、M は平均、SD は M の標準偏差、E は実験的に決定された濃度、T は理論上の濃度です。 マトリックス効果実験は、アモキシシリン (60 および 4000 ng/mL) と IS を移動相に直接注入し、標準溶液をブランク血漿抽出物 (4 正常、2 溶血および 2 脂肪血症) に添加して実行しました。 各サンプルは、次の式に従って、IS (MFN) によって正規化されたマトリックス係数によって得られました。 ）。 安定性 QC 血漿サンプル (60 および 4000 ng/mL) は、短期間 (6.0 時間) 室温、3 回の凍結融解 (-20 ～ 25 °C) サイクル、および 46.5 時間のオートサンプラー (25 ºC) 安定性テストを 3 回実施しました。 . 安定性の結果は公称値と比較されました。

薬物動態分析

薬物動態パラメーターは、Phoenix WinNonlin® ソフトウェア、バージョン 5.0 (Pharsight Corp、MoutainView、CA、USA) を使用した非コンパートメント モデルによって分析された血漿濃度対時間曲線に基づいて取得されました。 最大血漿濃度 (Cmax) および Cmax までの時間 (tmax) の値は、観察された個々の血漿濃度対時間曲線から直接得られました。 時間ゼロから最後の定量化可能な濃度の時間までの血漿濃度対時間曲線の下の面積は、線形台形則によって計算されました。 排泄速度定数 (ke) は、対数線形回帰分析によって得られ、排泄半減期 (t1/2) は式 [t1/2=ln(2)/ke] で計算されました。

統計分析

量的変数 (連続および離散) は、分布の正規性を検証するために、最初に Kolmogorov-Smirnov 検定によって分析されました。 この要件はほとんどの場合に検証されたため、記述統計量の平均と標準偏差 (SD) が計算されました。 パラメトリック検定は、分析統計に使用されました。

肥満手術の前 (T0) と後 (T2) に得られた肥満志願者の薬物動態パラメータを比較するために、対応のあるデータの t 検定を使用しました。 平均差 (または差の平均) とそれぞれの 95% 信頼区間 (95% CI) も決定されました。 さらに、肥満手術の前後に検証されたパラメーター値の比率が計算され、幾何平均とその 95% CI として表されます。 2 つの変数間の線形相関の程度と符号は、95% CI を伴うピアソン相関係数によって評価されました。

すべての分析で、両側検定が使用され、0.05 の有意水準が確立されました。 GraphPad Prism ソフトウェア、バージョン 5.00 (GraphPad Software、米国カリフォルニア州サンディエゴ) は、統計分析とグラフィックスの両方に使用されました。