Efecto de la Cirugía de Reducción de Estómago sobre los Parámetros de Amoxicilina

Población de estudio

Se seleccionaron ocho voluntarios obesos de ambos sexos, con edades comprendidas entre los 18 y los 60 años, del programa de obesidad del Hospital General Dr. César Cals con indicación de cirugía bariátrica en base a los criterios establecidos por el Consejo Médico Federal (2015) y que fueron operados utilizando la técnica de cirugía RYGB.

Todos los sujetos firmaron el formulario de consentimiento informado. El estudio fue aprobado por el comité de revisión institucional (IRB) de la Universidad Federal de Ceará, acreditado por la Comisión Nacional de Ética en Investigación - Consejo Nacional de Salud, Ministerio de Salud y el Comité Científico del Hospital General Dr. César Cals. El estudio se realizó de acuerdo con los principios éticos de la Declaración de Helsinki revisada en 2013 y las Guías de Buenas Prácticas Clínicas.

Diseño del estudio y muestreo farmacocinético

Este estudio se realizó como un estudio monocéntrico, abierto, aleatorizado y de dosis única con dos períodos de tratamiento: antes de la cirugía (Tiempo 0 - T0) y 2 meses después de la cirugía bariátrica (Tiempo 2 - T2). En cada período, los voluntarios obesos recibieron una dosis única oral de cápsulas de amoxicilina de 500 mg (Amoxil®, GlaxoSmithKline Brasil Ltda.) con 200 mL de agua después de una noche de ayuno (aproximadamente 8 h). Los sujetos permanecieron en ayunas hasta 3 h después de tomar el medicamento. La restricción de agua y alimentos se mantuvo hasta 3 h después de la ingesta de la formulación. Se ofrecieron comidas estándar a todos los sujetos. A los voluntarios que necesitaban utilizar algún medicamento (antihipertensivo, antidiabético y otros) se les indicó que lo hicieran 3 h después de la toma de amoxicilina. Se recogieron muestras de sangre (6 ml) para la determinación de la concentración plasmática de amoxicilina mediante un catéter venoso en tubos heparinizados antes de la dosis (0 h), 0,33, 0,66, 1, 1,5, 2, 2,5, 3, 4, 6 y 8 h posdosis. Las muestras de plasma para el análisis cromatográfico se obtuvieron por centrifugación (2000 g x 12 min a 4 ºC) de las muestras de sangre. Las muestras de plasma se almacenaron a -20 °C hasta el momento del análisis.

Parámetros antropométricos antes y después de la cirugía

En cada visita (T0 y T2), se midió el peso y la altura de todos los voluntarios, seguido del cálculo de su índice de masa corporal (IMC) para la comparación antropométrica antes y después de la cirugía bariátrica. El peso corporal se midió con una balanza digital, y los voluntarios vestían ropa ligera, descalzos, con los bolsillos vacíos y sin accesorios. La altura se midió con un estadiómetro de 2 metros de extensión. Los sujetos estaban descalzos, con las piernas y los pies paralelos, el peso distribuido en ambos pies, los brazos relajados a los lados del cuerpo y las palmas de las manos mirando hacia el cuerpo y la cabeza posicionada en el plano de Frankfurt.

Procedimiento de cirugía bariátrica

Todos los voluntarios incluidos en este ensayo fueron operados con la técnica de cirugía RYGB, realizada por el mismo equipo quirúrgico, siguiendo una estandarización para el tamaño del asa alimentaria (1,20 m de longitud) y del asa biliopancreática (1 m de longitud). La gastroyeyunoanastomosis se calibró con sonda Fouchet 32F, resultando un diámetro de 12 mm.

Método analítico

La concentración plasmática de amoxicilina se cuantificó mediante cromatografía líquida acoplada a espectrometría de masas (LC-MS/MS) y extracción líquido-líquido.

Para la preparación de la muestra, se agregaron a un tubo de vidrio 100 µL de cada muestra de plasma, 50 µL del estándar interno (IS) cefalexina (2.5 µg/mL) y 500 µL de acetonitrilo (100 %). Las muestras se agitaron en vortex (30 seg) y se centrifugaron (2000 g x 4 min a 4 ºC). La fase orgánica se transfirió a otro tubo de vidrio, al que se le añadieron 500 µL de agua desionizada y se agitó (10 segundos). A las muestras se les adicionó 10 mL de diclorometano (100 %), se agitaron en vortex (10 seg) y se centrifugaron (2000 g x 4 min a 4 ºC). La fase orgánica se transfirió a las placas PCR autoinyectoras.

El sistema de cromatografía líquida de alta presión (HPLC) (Agilent, Alemania) consistió en una bomba LC-10AD, autoinyector modelo CTC HST PAL/ 110695 y un horno G1316A/DE03018295. Las soluciones extraídas (10 µL) se inyectaron en una columna Inertsil ODS-C18 de 150 x 4,6 mm (partículas de 5 µm) mantenida a 65 ◦C y la fase móvil fue metanol/agua (30/70, v/v) + 0,1 %. ácido fórmico a un caudal de 900 μL/min con una relación de división de 1:3. El espectrómetro de masas utilizado fue un Quattro Micro (Micromass, Manchester, UK) con electrospray en modo positivo para MRM (Multiple Reaction Monitoring) para monitorear las transiciones 366.00 >348.90 y 348.00 >158.00 para amoxicilina y cefalexina, respectivamente.

La validación del método se realizó de acuerdo con la guía de validación de métodos bioanalíticos de la Administración de Drogas y Alimentos de los Estados Unidos (FDA) [22] y la Agencia Nacional de Vigilancia Sanitaria de Brasil (ANVISA) [23]. Para evaluar la especificidad del método, se ensayaron las interferencias de ocho lotes de plasma blanco diferentes (4 normales, 2 hemolizados y 2 lipémicos) utilizando el procedimiento de extracción propuesto y las condiciones cromatográficas o espectroscópicas y se compararon con los obtenidos en las muestras procesadas a partir del límite inferior de cuantificación (LLOQ). Las curvas de calibración se prepararon analizando muestras de plasma estándar a ocho concentraciones de amoxicilina (20-5000 ng/ml) por triplicado y la linealidad de cada curva de calibración se determinó trazando la relación del área del pico (y) de amoxicilina/IS frente a la concentración nominal. concentración de analito. La curva de calibración se construyó mediante regresión lineal de mínimos cuadrados ponderados (1/x). La exactitud y precisión del ensayo se evaluaron mediante estudios intraensayo e interensayo. Se analizaron siete alícuotas de LLOQ y cada muestra de plasma de control de calidad (QC) (60, 850, 2500, 4000 y 12000 ng/mL) en tres lotes de validación en tres días diferentes. Las precisiones inter e intradía se determinaron como coeficiente de variación, CV (%) = (SD/M) x 100 y la precisión como el error relativo porcentual, RE (%) = [(E - T)/T] x 100 , donde M es la media, SD es la desviación estándar de M, E es la concentración determinada experimentalmente y T es la concentración teórica. Los experimentos de efecto matriz se realizaron utilizando la relación entre amoxicilina (60 y 4000 ng/mL) e IS inyectada directamente en la fase móvil y soluciones estándar añadidas a extractos de plasma blanco (4 normales, 2 hemolizados y 2 lipémicos). Cada muestra se obtuvo por un factor de matriz normalizado por IS (MFN) de acuerdo con la siguiente fórmula: MFN = (respuesta del analito en matriz/matriz de respuesta del estándar interno)/(respuesta del analito en solución/respuesta de la solución del estándar interno) ). Las muestras de plasma de CC de estabilidad (60 y 4000 ng/ml) se sometieron a pruebas de estabilidad a corto plazo (6,0 h) a temperatura ambiente, tres ciclos de congelación-descongelación (-20 a 25 °C) y 46,5 h con automuestreador (25 ºC) por triplicado. . Los resultados de estabilidad se compararon con los valores nominales.

Análisis farmacocinético

Los parámetros farmacocinéticos se obtuvieron a partir de las curvas de concentración plasmática vs. tiempo analizadas mediante un modelo no compartimental utilizando el software Phoenix WinNonlin®, versión 5.0 (Pharsight Corp, MoutainView, CA, EE. UU.). Los valores para la concentración plasmática máxima (Cmax) y el tiempo hasta la Cmax (tmax) se obtuvieron directamente de las curvas de concentración plasmática individual observada frente al tiempo. El área bajo la curva de concentración plasmática frente al tiempo desde el momento cero hasta el momento de la última concentración cuantificable se calculó mediante la regla trapezoidal lineal. La constante de velocidad de eliminación (ke) se obtuvo mediante análisis de regresión lineal logarítmica, y la vida media de eliminación (t1/2) se calculó con la ecuación [t1/2=ln(2)/ke].

análisis estadístico

Las variables cuantitativas (continuas y discretas) fueron inicialmente analizadas por la prueba de Kolmogorov-Smirnov para verificar la normalidad de la distribución. Como este requisito se verificó en la mayoría de los casos, se calculó la media y la desviación estándar (DE) para las estadísticas descriptivas. Se utilizaron pruebas paramétricas para la estadística analítica.

Para comparar los parámetros farmacocinéticos de los voluntarios obesos obtenidos antes (T0) y después (T2) de la cirugía bariátrica se utilizó la prueba t para datos apareados. También se determinó la diferencia de medias (o media de las diferencias) y su respectivo intervalo de confianza del 95% (IC del 95%). Además, se calculó la relación entre los valores de los parámetros verificados antes y después de la cirugía bariátrica, expresada como media geométrica y su IC del 95%. El grado y signo de la correlación lineal entre dos variables fueron evaluados por el coeficiente de correlación de Pearson, acompañado de su IC 95%.

En todos los análisis se utilizaron pruebas de dos colas, estableciendo el nivel de significación en 0,05. Se utilizó el software GraphPad Prism, versión 5.00 (GraphPad Software, San Diego, California, EE. UU.) tanto para los análisis estadísticos como para los gráficos.