Wirkung der Magenverkleinerung auf die Parameter von Amoxicillin

Studienpopulation

Acht adipöse Probanden beiderlei Geschlechts im Alter zwischen 18 und 60 Jahren wurden aus dem Adipositasprogramm des Hospital General Dr. César Cals mit Indikation Adipositaschirurgie nach den Kriterien der Bundesärztekammer (2015) ausgewählt und operiert mit der RYGB-Operationstechnik.

Alle Probanden unterzeichneten die Einwilligungserklärung. Die Studie wurde vom Institutional Review Board (IRB) der Federal University of Ceará genehmigt, der von der National Commission for Research Ethics – National Health Council, dem Gesundheitsministerium und dem Wissenschaftlichen Ausschuss des Hospital General Dr. César Cals akkreditiert wurde. Die Studie wurde gemäß den ethischen Grundsätzen der Deklaration von Helsinki in der überarbeiteten Fassung von 2013 und den Leitlinien für gute klinische Praxis durchgeführt.

Studiendesign und pharmakokinetische Probenahme

Diese Studie wurde als monozentrische, unverblindete, randomisierte Einzeldosisstudie mit zwei Behandlungsperioden durchgeführt – vor der Operation (Zeitpunkt 0 – T0) und 2 Monate nach der bariatrischen Operation (Zeitpunkt 2 – T2). In jedem Zeitraum erhielten die fettleibigen Freiwilligen eine orale Einzeldosis Amoxicillin 500 mg Kapsel (Amoxil®, GlaxoSmithKline Brazil Ltda.) mit 200 ml Wasser nach nächtlichem Fasten (ungefähr 8 Stunden). Die Probanden blieben bis zu 3 h nach Einnahme des Medikaments nüchtern. Die Wasser- und Nahrungsrestriktion wurde bis zu 3 h nach der Einnahme der Formulierung gehalten. Allen Probanden wurden Standardmahlzeiten angeboten. Die Freiwilligen, die Medikamente (Antihypertensiva, Antidiabetika und andere) einnehmen mussten, wurden angewiesen, diese 3 Stunden nach der Einnahme von Amoxicillin zu verwenden. Blutproben (6 ml) zur Bestimmung der Plasmakonzentration von Amoxicillin wurden über einen Venenkatheter in heparinisierten Röhrchen vor der Dosis (0 h), 0,33, 0,66, 1, 1,5, 2, 2,5, 3, 4, 6 und 8 entnommen h nach der Einnahme. Die Plasmaproben für die chromatographische Analyse wurden durch Zentrifugation (2000 g x 12 min bei 4 °C) der Blutproben gewonnen. Plasmaproben wurden bis zur Analyse bei -20 °C gelagert.

Anthropometrische Parameter vor und nach der Operation

Bei jedem Besuch (T0 und T2) wurden das Gewicht und die Größe aller Freiwilligen gemessen, gefolgt von der Berechnung ihres Body-Mass-Index (BMI) für den anthropometrischen Vergleich vor und nach bariatrischer Operation. Das Körpergewicht wurde mit einer digitalen Waage gemessen, und die Freiwilligen trugen leichte Kleidung, barfuß, mit leeren Taschen und ohne Zubehör. Die Höhe wurde mit einem Stadiometer mit 2 Meter Verlängerung gemessen. Die Probanden waren barfuß, Beine und Füße parallel, das Gewicht auf beide Füße verteilt, die Arme entspannt an der Seite des Körpers und die Handflächen zum Körper gerichtet und der Kopf auf der Frankfurter Ebene positioniert.

Verfahren der bariatrischen Chirurgie

Alle in diese Studie eingeschlossenen Freiwilligen wurden unter Verwendung der RYGB-Operationstechnik operiert, die von demselben Operationsteam durchgeführt wurde, wobei eine Standardisierung für die Größe der Ernährungsschleife (1,20 m Länge) und der biliopankreatischen Schleife (1 m Länge) befolgt wurde. Die Gastrojejunoanastomose wurde mit einer Fouchet-32F-Sonde kalibriert, was zu einem Durchmesser von 12 mm führte.

Analytische Methode

Die Amoxicillin-Plasmakonzentration wurde durch Flüssigkeitschromatographie gekoppelt mit Massenspektrometrie (LC-MS/MS) und einer Flüssig-Flüssig-Extraktion quantifiziert.

Zur Probenvorbereitung wurden 100 µL jeder Plasmaprobe, 50 µL des internen Standards (IS) Cephalexin (2,5 µg/mL) und 500 µL Acetonitril (100 %) in ein Glasröhrchen gegeben. Die Proben wurden gevortext (30 s) und zentrifugiert (2000 g x 4 min bei 4 ºC). Die organische Phase wurde in ein anderes Glasröhrchen überführt, das mit 500 &mgr;l deionisiertem Wasser versetzt und gevortext wurde (10 Sekunden). Die Proben wurden mit 10 ml Dichlormethan (100 %) versetzt, gevortext (10 Sek.) und zentrifugiert (2000 g x 4 min bei 4 °C). Die organische Phase wurde auf die Autoinjektor-PCR-Platten überführt.

Das Hochdruckflüssigkeitschromatographie(HPLC)-System (Agilent, Deutschland) bestand aus einer LC-10AD-Pumpe, einem Autoinjektor Modell CTC HST PAL/110695 und einem G1316A/DE03018295-Ofen. Die extrahierten Lösungen (10 µl) wurden in eine 150 x 4,6 mm (5 µm Partikel) Inertsil ODS-C18-Säule injiziert, die bei 65 °C gehalten wurde, und die mobile Phase war Methanol/Wasser (30/70, v/v) + 0,1 %. Ameisensäure bei einer Flussrate von 900 μL/min mit einem Teilungsverhältnis von 1:3. Das verwendete Massenspektrometer war ein Quattro Micro (Micromass, Manchester, UK) mit Elektrospray im positiven Modus für MRM (Multiple Reaction Monitoring), um die Übergänge 366,00 > 348,90 und 348,00 > 158,00 für Amoxicillin bzw. Cephalexin zu überwachen.

Die Methodenvalidierung wurde gemäß den bioanalytischen Methodenvalidierungsrichtlinien der United States Food and Drug Administration (FDA) [22] und der brasilianischen National Sanitary Surveillance Agency (ANVISA) [23] durchgeführt. Zur Bewertung der Spezifität des Verfahrens wurden acht verschiedene Blindplasmachargen (4 normale, 2 hämolysierte und 2 lipämische) mit dem vorgeschlagenen Extraktionsverfahren und den chromatographischen bzw untere Bestimmungsgrenze (LLOQ). Die Kalibrierungskurven wurden erstellt, indem Standard-Plasmaproben bei acht Konzentrationen von Amoxicillin (20–5000 ng/ml) in dreifacher Ausführung untersucht wurden, und die Linearität jeder Kalibrierungskurve wurde durch Auftragen des Peakflächenverhältnisses (y) von Amoxicillin/IS gegen den Nominalwert bestimmt Konzentration des Analyten. Die Kalibrierungskurve wurde durch gewichtete (1/x) lineare Regression der kleinsten Quadrate erstellt. Die Genauigkeit und Präzision des Assays wurden durch Intra- und Inter-Assay-Studien bewertet. Sieben Aliquots von LLOQ und jede Plasmaprobe zur Qualitätskontrolle (QC) (60, 850, 2500, 4000 und 12000 ng/ml) wurden in drei Validierungschargen an drei verschiedenen Tagen getestet. Die Inter- und Intraday-Präzision wurde als Variationskoeffizient bestimmt, CV (%) = (SD/M) x 100 und die Genauigkeit als prozentualer relativer Fehler, RE (%) = [(E - T)/T] x 100 , wobei M der Mittelwert, SD die Standardabweichung von M, E die experimentell bestimmte Konzentration und T die theoretische Konzentration ist. Die Matrixeffekt-Experimente wurden unter Verwendung des Verhältnisses zwischen Amoxicillin (60 und 4000 ng/ml) und direkt in die mobile Phase injiziertem IS und Standardlösungen durchgeführt, die zu leeren Plasmaextrakten (4 normale, 2 hämolysierte und 2 lipämische) hinzugefügt wurden. Jede Probe wurde durch einen durch IS (MFN) normalisierten Matrixfaktor gemäß der folgenden Formel erhalten: MFN = (Antwort des Analyten in der Matrix/Antwortmatrix des internen Standards)/(Antwort des Analyten in Lösung/Antwort der Lösung des internen Standards). ). Stabilität QC-Plasmaproben (60 und 4000 ng/ml) wurden kurzfristig (6,0 h) bei Raumtemperatur, drei Gefrier-Auftau-Zyklen (-20 bis 25 °C) und 46,5 h Autosampler (25 °C) Stabilitätstests in dreifacher Ausführung unterzogen . Die Stabilitätsergebnisse wurden mit den Nennwerten verglichen.

Pharmakokinetische Analyse

Die pharmakokinetischen Parameter wurden basierend auf den Plasmakonzentrations-gegen-Zeit-Kurven erhalten, die durch ein Nicht-Kompartiment-Modell unter Verwendung der Phoenix WinNonlin®-Software, Version 5.0 (Pharsight Corp, MoutainView, CA, USA) analysiert wurden. Die Werte für die maximale Plasmakonzentration (Cmax) und die Zeit bis zur Cmax (tmax) wurden direkt aus den beobachteten individuellen Plasmakonzentrations-Zeit-Kurven erhalten. Die Fläche unter der Plasmakonzentrations-Zeit-Kurve vom Zeitpunkt Null bis zum Zeitpunkt der letzten quantifizierbaren Konzentration wurde nach der linearen Trapezregel berechnet. Die Eliminationsgeschwindigkeitskonstante (ke) wurde durch log-lineare Regressionsanalyse erhalten, und die Eliminationshalbwertszeit (t1/2) wurde mit der Gleichung [t1/2 = ln(2)/ke] berechnet.

statistische Analyse

Die quantitativen Variablen (kontinuierlich und diskret) wurden zunächst mit dem Kolmogorov-Smirnov-Test analysiert, um die Normalverteilung der Verteilung zu überprüfen. Da diese Anforderung in den meisten Fällen verifiziert wurde, wurden Mittelwert und Standardabweichung (SD) für die deskriptive Statistik berechnet. Parametrische Tests wurden für die analytische Statistik verwendet.

Um die pharmakokinetischen Parameter der fettleibigen Probanden vor (T0) und nach (T2) bariatrischer Operation zu vergleichen, wurde der t-Test für gepaarte Daten verwendet. Die mittlere Differenz (oder Mittelwert der Differenzen) und ihr jeweiliges 95-%-Konfidenzintervall (95-%-KI) wurden ebenfalls bestimmt. Außerdem wurde das Verhältnis zwischen den verifizierten Parameterwerten vor und nach bariatrischer Operation berechnet, ausgedrückt als geometrischer Mittelwert und dessen 95 %-KI. Grad und Vorzeichen der linearen Korrelation zwischen zwei Variablen wurden anhand des Pearson-Korrelationskoeffizienten bewertet, begleitet von seinem 95 %-KI.

Bei allen Analysen wurden zweiseitige Tests verwendet, die das Signifikanzniveau auf 0,05 festlegten. Sowohl für statistische Auswertungen als auch für Grafiken wurde die Software GraphPad Prism, Version 5.00 (GraphPad Software, San Diego, California, USA) verwendet.