Effekt af mave-reduktionskirurgi på parametrene for amoxicillin

Studiepopulation

Otte overvægtige frivillige af begge køn, i alderen mellem 18 og 60 år, blev udvalgt fra fedmeprogrammet for Hospital General Dr. César Cals med indikation af fedmekirurgi baseret på kriterierne fastsat af Federal Medical Council (2015), og som blev opereret ved hjælp af RYGB-kirurgisk teknik.

Alle forsøgspersoner underskrev den informerede samtykkeformular. Undersøgelsen blev godkendt af det institutionelle revisionsudvalg (IRB) på Federal University of Ceará, akkrediteret af den nationale kommission for forskningsetik - det nationale sundhedsråd, sundhedsministeriet og den videnskabelige komité for hospitalets general Dr. César Cals. Undersøgelsen blev udført i overensstemmelse med de etiske principper i Helsinki-erklæringen som revideret i 2013 og retningslinjer for god klinisk praksis.

Studiedesign og farmakokinetisk prøveudtagning

Dette studie blev udført som et monocentrisk, åbent, randomiseret enkeltdosisstudie med to behandlingsperioder - før operationen (Tid 0 - T0) og 2 måneder efter den fedmekirurgiske operation (Tid 2 - T2). I hver periode modtog de overvægtige frivillige en enkelt oral dosis amoxicillin 500 mg kapsel (Amoxil®, GlaxoSmithKline Brazil Ltda.) med 200 ml vand efter en faste natten over (ca. 8 timer). Forsøgspersonerne forblev fastende i op til 3 timer efter at have taget medicinen. Vand- og fødevarerestriktion blev holdt op til 3 timer efter indtagelsen af ​​formuleringen. Standardmåltider blev tilbudt til alle forsøgspersoner. De frivillige, der skulle bruge medicin (antihypertensiv, antidiabetisk og andre), blev instrueret i at bruge den 3 timer efter indtagelsen af ​​amoxicillin. Blodprøver (6 ml) til bestemmelse af plasmakoncentrationen af ​​amoxicillin blev opsamlet via et venekateter i hepariniserede rør ved præ-dosis (0 timer), 0,33, 0,66, 1, 1,5, 2, 2,5, 3, 4, 6 og 8 h efter dosis. Plasmaprøverne til kromatografisk analyse blev opnået ved centrifugering (2000 g x 12 min ved 4 ºC) af blodprøverne. Plasmaprøver blev opbevaret ved -20 °C indtil analysen.

Antropometriske parametre før og efter operationen

Ved hvert besøg (T0 og T2) blev vægten og højden af ​​alle frivillige målt, efterfulgt af beregning af deres kropsmasseindeks (BMI) til antropometrisk sammenligning før og efter fedmekirurgi. Kropsvægten blev målt ved hjælp af en digital vægt, og de frivillige var iført let tøj, barfodet, med tomme lommer og uden tilbehør. Højden blev målt ved hjælp af et stadiometer med 2 meter forlængelse. Forsøgspersonerne var barfodede, med ben og fødder parallelle, vægten fordelt på begge fødder, armene afslappede på siden af ​​kroppen og håndfladerne vendte mod kroppen og hovedet placeret på Frankfurt-flyet.

Fedmekirurgisk procedure

Alle frivillige inkluderet i dette forsøg blev opereret ved hjælp af RYGB-kirurgisk teknik, udført af det samme kirurgiske team, efter en standardisering for fordøjelsesløjfens størrelse (1,20 m længde) og biliopancreatisk løkke (1 m længde). Gastrojejunoanastomosen blev kalibreret med en Fouchet 32F probe, hvilket resulterede i en diameter på 12 mm.

Analytisk metode

Amoxicillin plasmakoncentration blev kvantificeret ved væskekromatografi koblet til massespektrometri (LC-MS/MS) og en væske-væske-ekstraktion.

Til prøveforberedelse blev 100 µL af hver plasmaprøve, 50 µL af den interne standard (IS) cephalexin (2,5 µg/ml) og 500 µL acetonitril (100 %) tilsat i et glasrør. Prøverne blev vortexet (30 sek.) og centrifugeret (2000 g x 4 min ved 4 ºC). Den organiske fase blev overført til et andet glasrør, som blev tilsat 500 µL deioniseret vand og vortexbehandlet (10 sek.). Prøverne blev tilsat 10 ml dichlormethan (100 %), vortexbehandlet (10 sek.) og centrifugeret (2000 g x 4 min ved 4 ºC). Den organiske fase blev overført til autoinjektor-PCR-pladerne.

Højtryksvæskekromatografisystemet (HPLC) (Agilent, Tyskland) bestod af en LC-10AD pumpe, autoinjektor model CTC HST PAL/110695 og en G1316A/DE03018295 ovn. De ekstraherede opløsninger (10 µL) blev injiceret i en 150 x 4,6 mm (5 μm partikler) Inertsil ODS-C18-søjle holdt ved 65 ◦C, og den mobile fase var methanol/vand (30/70, v/v) + 0,1 % myresyre ved en flowhastighed på 900 μL/min med et splitforhold på 1:3. Det anvendte massespektrometer var et Quattro Micro (Micromass, Manchester, UK) med elektrospray i positiv tilstand for MRM (Multiple Reaction Monitoring) for at overvåge overgangene 366,00 >348,90 og 348,00 >158,00 for henholdsvis amoxicillin og cephalexin.

Metodevalideringen blev udført i overensstemmelse med USAs Food and Drug Administration (FDA) vejledning om validering af bioanalytiske metoder [22] og det brasilianske nationale sundhedsovervågningsagentur (ANVISA) [23]. For at evaluere metodens specificitet blev otte forskellige blindplasma lots (4 normale, 2 hæmolyserede og 2 lipæmiske) testet for dens interferenser ved hjælp af den foreslåede ekstraktionsprocedure og de kromatografiske eller spektroskopiske betingelser og sammenlignet med dem opnået i prøverne behandlet fra nedre kvantificeringsgrænse (LLOQ). Kalibreringskurverne blev fremstillet ved at analysere standardplasmaprøver ved otte koncentrationer af amoxicillin (20-5000 ng/ml) i tre eksemplarer, og lineariteten af ​​hver kalibreringskurve blev bestemt ved at plotte toparealforholdet (y) af amoxicillin/IS vs. nominel koncentration af analyt. Kalibreringskurven blev konstrueret ved vægtet (1/x) mindste kvadraters lineær regression. Nøjagtigheden og præcisionen af ​​assay blev evalueret ved intra- og inter-assay undersøgelser. Syv alikvoter af LLOQ og hver kvalitetskontrol (QC) plasmaprøver (60, 850, 2500, 4000 og 12000 ng/mL) blev kørt i tre valideringsbatcher på tre forskellige dage. Inter- og intra-dag-præcisions blev bestemt som variationskoefficient, CV (%) = (SD/M) x 100 og nøjagtigheden som den procentvise relative fejl, RE (%) = [(E - T)/T] x 100 , hvor M er middelværdien, SD er standardafvigelsen af ​​M, E er den eksperimentelt bestemte koncentration og T er den teoretiske koncentration. Matrixeffekteksperimenterne blev udført under anvendelse af forholdet mellem amoxicillin (60 og 4000 ng/ml) og IS injiceret direkte i den mobile fase og standardopløsninger tilsat til blanke plasmaekstrakter (4 normale, 2 hæmolyserede og 2 lipæmiske). Hver prøve blev opnået med en matrixfaktor normaliseret med IS (MFN) i henhold til følgende formel: MFN = (respons af analytten i matrix/intern standard responsmatrix)/(respons af analytten i opløsning/respons af den interne standardopløsning ). Stabilitet QC plasmaprøver (60 og 4000 ng/mL) blev udsat for kortvarige (6,0 timer) stuetemperatur, tre fryse-optøningscyklusser (-20 til 25 °C) og 46,5 timers autosampler (25 ºC) stabilitetstests i tre eksemplarer . Stabilitetsresultaterne blev sammenlignet med de nominelle værdier.

Farmakokinetisk analyse

De farmakokinetiske parametre blev opnået baseret på kurverne for plasmakoncentration vs. tid analyseret af en ikke-kompartmenteret model ved anvendelse af Phoenix WinNonlin®-softwaren, version 5.0 (Pharsight Corp, MoutainView, CA, USA). Værdier for den maksimale plasmakoncentration (Cmax) og tid til Cmax (tmax) blev opnået direkte fra de observerede individuelle plasmakoncentration vs. tidskurver. Arealet under kurven for plasmakoncentration vs. tid fra tid nul til tidspunktet for den sidste kvantificerbare koncentration blev beregnet ved den lineære trapezformede regel. Eliminationshastighedskonstant (ke) blev opnået ved log-lineær regressionsanalyse, og eliminationshalveringstiden (t1/2) blev beregnet med ligningen [t1/2=ln(2)/ke].

Statistisk analyse

De kvantitative variable (kontinuerlige og diskrete) blev oprindeligt analyseret ved Kolmogorov-Smirnov-testen for at verificere normaliteten af ​​fordelingen. Da dette krav blev verificeret i de fleste tilfælde, blev middelværdi og standardafvigelse (SD) beregnet for beskrivende statistik. Parametriske test blev brugt til analytisk statistik.

For at sammenligne de farmakokinetiske parametre for de overvægtige frivillige opnået før (T0) og efter (T2) fedmekirurgi, blev t-testen for parrede data brugt. Den gennemsnitlige forskel (eller gennemsnittet af forskelle) og deres respektive 95 % konfidensinterval (95 % CI) blev også bestemt. Endvidere blev forholdet mellem parameterværdierne verificeret før og efter fedmekirurgi beregnet, udtrykt som geometrisk middelværdi og dets 95% CI. Graden og tegnet af den lineære korrelation mellem to variable blev evalueret af Pearson-korrelationskoefficienten, ledsaget af dens 95% CI.

I alle analyser blev der anvendt to-halede test, der fastlagde signifikansniveauet på 0,05. GraphPad Prism-softwaren, version 5.00 (GraphPad Software, San Diego, Californien, USA) blev brugt til både statistiske analyser og grafik.