Histologisk evaluering af dannelse af hårdt væv efter direkte pulpafdækning med RetroMTA (RetroMTA)

Undersøgelsen blev udført i overensstemmelse med principperne i World Medical Association Declaration of Helsinki. Syv cariesfrie, intakte, maxillære og mandibular tredje kindtænder fra mennesker i alderen 30-37 år, som var planlagt til ekstraktion til ortodontiske eller kirurgiske formål, blev inkluderet i undersøgelsen. Patienterne fik en grundig forklaring på det eksperimentelle rationale, kliniske procedurer og mulige komplikationer. Alle eksperimentelle protokoller blev uafhængigt gennemgået og godkendt af den lokale etiske komité ved Pomeranian Medical University, Szczecin, Polen (godkendelsesnummer KB-0012/27/13).

Klinisk protokol. For alle inkluderede tænder blev der taget periapikale røntgenbilleder for at udelukke tilstedeværelsen af ​​caries eller periapikal patologi. Tandfølsomhed blev vurderet ved termisk test (Kältespray; M&W Dental, Büdingen, Tyskland) og elektrisk følsomhedstest (Vitality Scanner Pulp Vitality Tester; SybronEndo, Orange, CA, USA). Disse tænder blev udsat for pulpeksponering, direkte afdækning med RetroMTA og restaurering med en kompositharpiks. Syv måneder senere blev tænderne undersøgt klinisk og radiografisk. Klinisk vurdering blev udført 1 uge og 7 måneder efter proceduren. Under kliniske interviews blev patienterne spurgt om tilstedeværelsen af ​​smerte, dens type og varighed. Reaktioner på termiske stimuli blev klassificeret i tre kategorier: 1 = normal respons (smerte, der varer op til 10 s); 2 = en forlænget respons (smerte > 10 s); 3 = intet svar. En elektrisk test blev udført med en Vitality Scanner og blev gentaget tre gange. Syv måneder efter proceduren blev tænderne ekstraheret og underkastet histologisk behandling og evaluering.

Histologisk bearbejdning. Umiddelbart efter ekstraktion blev tænderne nedsænket i en 10% neutral bufret formalinopløsning og forsigtigt vasket fra blod og spyt. Efter kort præfiksering (≤10 minutter) blev der taget særlige forholdsregler for at lette pulpavævsfiksering. Rødderne blev adskilt 5 mm apikalt til cemento-emaljeforbindelsen under anvendelse af en diamantskive under rigelig vandkøling. Derefter blev tænderne slebet med en højhastigheds cylindrisk diamantbor under vandspray i et mesio-distalt eller bucco-lingualt plan, indtil et eller flere pulphorn blev blotlagt. Der blev taget fotografier og røntgenbilleder af hver prøve før successive trin. Til demineralisering blev prøverne nedsænket i 3 til 4 uger i en vandig opløsning bestående af en blanding af 22,5 % (v/v) myresyre og 10 % (v/v) natriumcitrat med radiografisk bestemmelse af endepunktet. Derefter blev alle prøver vasket i rindende postevand i 24 timer, dehydreret ved anvendelse af stigende kvaliteter af ethanol, renset i xylen, infiltreret og indlejret i paraffin (smeltepunkt på 56 °C) efter standardprocedurer. Paraffinblokkene blev trimmet. Med mikrotomen indstillet til 5 μM blev der taget serielle snit, indtil hele pulpvævet i kammeret blev udtømt. Seks til otte sektioner blev opsamlet på hvert objektglas. Hvert femte objektglas blev farvet med hæmatoxylin og eosin til screening og evaluering af mineraliseret vævsdannelse. Disse farvede sektioner blev brugt til at lokalisere de områder, der udviser de mest alvorlige inflammatoriske reaktioner, og dem med mindre gunstig brodannelse. Baseret på denne indledende evaluering blev alle objektglas, der støder op til stedet med de mindre gunstige betingelser, farvet. Derudover blev de udvalgte objektglas udsat for en modificeret Brown og Brenn-teknik (Taylor 1966) til farvning af bakterier. Derefter blev dækglas placeret på objektglassene, og snittene blev undersøgt ved hjælp af et lysmikroskop. For hver pulp blev den værste observerede histologiske tilstand registreret. Hvis der blev observeret bakterier på hulrumsvæggene eller i eksponeringsområdet, blev tilfældet udelukket fra evaluering.

To intakte tænder (en maxillær og en mandibular tredje molar) ekstraheret for pericoronitis blev brugt som kontrol. For at teste pålideligheden af ​​bakteriepletten blev to tænder med dyb caries undersøgt, ekstraheret, fordi de blev anset for ikke-genoprettelige. Disse tænder blev behandlet ved hjælp af samme protokol som forsøgsgruppen.

Objektglas blev observeret under et lysmikroskop (Leica DMLB; Leica Microsystems, Wetzlar, Tyskland), og der blev taget digitale fotografier (Leica DFC420; Leica Microsystems, Wetzlar, Tyskland). Følgende aspekter blev observeret med særlig omhu: 1) Tilstedeværelse og type af mineraliseret væv dannet i området for den kirurgiske eksponering; 2) Morfologi af celler, der lagdeler dette mineraliserede væv; 3) Tilstedeværelse og grad af inflammatoriske reaktioner i pulpaområdet underliggende til det nydannede væv; og 4) Tilstedeværelse af farvbare bakterier i det eksperimentelle hulrum eller området for pulpeksponering.