RetroMTAによる直接パルプキャッピング後の硬組織形成の組織学的評価 (RetroMTA)

この研究は、世界医師会ヘルシンキ宣言の原則に従って実施されました。 歯列矯正または外科的目的で抜歯が予定されていた、30～37 歳の人間の、齲蝕のない無傷の上顎および下顎第 3 大臼歯 7 本が研究に含まれていました。 患者は、実験の理論的根拠、臨床手順、および合併症の可能性について徹底的な説明を受けました。 すべての実験プロトコルは、ポーランドのシュチェチンにあるポメラニアン医科大学のローカル倫理委員会によって個別に審査および承認されました (承認番号 KB-0012/27/13)。

臨床プロトコル。 含まれるすべての歯について、虫歯または根尖病変の存在を除外するために、根尖レントゲン写真が撮影されました。 歯の感受性は、熱試験（Kältespray; M&W Dental、Büdingen、ドイツ）および電気感受性試験（Vitality Scanner Pulp Vitality Tester; SybronEndo、Orange、CA、USA）によって評価されました。 これらの歯は、歯髄露出、RetroMTA による直接キャッピング、およびコンポジットレジンによる修復を受けました。 7 か月後、歯は臨床的および X 線写真で評価されました。 臨床評価は、処置の 1 週間後と 7 か月後に実施されました。 臨床面接中に、患者は痛みの有無、その種類と期間について尋ねられました。 熱刺激に対する反応は、3 つのカテゴリに分類されました。1 = 正常な反応 (10 秒まで続く痛み)。 2 = 拡張応答 (痛み > 10 秒); 3 = 応答なし。 Vitality Scanner を使用して電気的テストを行い、3 回繰り返しました。 手順の 7 か月後、歯を抜き取り、組織学的処理と評価を行いました。

組織学的処理。 抜歯直後に10%中性緩衝ホルマリン溶液に歯を浸し、血液と唾液をやさしく洗い流しました。 短いプレフィックス (≤10 分) の後、歯髄組織の固定を容易にするために特別な予防措置が取られました。 根は、大量の水冷下でダイヤモンドディスクを使用して、セメントエナメル接合部まで5 mmの先端で分離されました。 次いで、１つまたは複数の歯髄角が露出するまで、近遠心面または頬舌面で水噴霧下で高速円筒形ダイヤモンドバーを用いて歯を研削した。 連続するステップの前に、各サンプルの写真とレントゲン写真を撮りました。 脱灰のために、標本を 22.5% (v/v) ギ酸と 10% (w/v) クエン酸ナトリウムの混合物からなる水溶液に 3 ～ 4 週間浸漬し、エンドポイントを X 線写真で測定しました。 次に、すべての標本を流水で 24 時間洗浄し、グレードの高いエタノールを使用して脱水し、キシレンで洗浄し、浸潤させ、標準的な手順に従ってパラフィン (融点 56 °C) に包埋しました。 パラフィンブロックを切り取った。 ミクロトームを 5 μM に設定して、チャンバー内の歯髄組織全体がなくなるまで連続切片を採取しました。 各スライドで 6 ～ 8 のセクションが収集されました。 ミネラル化組織形成のスクリーニングと評価のために、5枚ごとのスライドをヘマトキシリンとエオシンで染色しました。 これらの染色された切片を使用して、最も重度の炎症反応を示す領域と、ブリッジングがあまり好ましくない領域を特定しました。 この最初の評価に基づいて、条件の悪い場所に隣接するすべてのスライドが染色されました。 さらに、選択されたスライドは、細菌を染色するための修正されたブラウンおよびブレン技術 (Taylor 1966) にかけられました。 次に、スライドにカバー スリップを置き、光学顕微鏡を使用して切片を調べました。 各歯髄について、観察された最悪の組織学的状態が記録されました。 空洞壁または露出領域に細菌が観察された場合、その症例は評価から除外されました。

歯冠周囲炎のために抜去された 2 本の無傷の歯 (上顎 1 本と下顎第 3 大臼歯 1 本) を対照として使用しました。 細菌染色の信頼性をテストするために、深い齲蝕のある 2 本の歯が検査され、修復不可能と見なされたため抜歯されました。 これらの歯は、実験グループと同じプロトコルを使用して処理されました。

スライドを光学顕微鏡 (Leica DMLB; Leica Microsystems, Wetzlar, Germany) で観察し、デジタル写真を撮影しました (Leica DFC420; Leica Microsystems, Wetzlar, Germany)。 以下の側面は、特に注意して観察されました。 2) この石灰化組織を層状化する細胞の形態。 ３）新たに形成された組織に隣接する歯髄領域における炎症反応の存在および程度。および 4) 実験キャビティまたはパルプ露出領域における染色可能な細菌の存在。