Avaliação histológica da formação de tecido duro após capeamento pulpar direto com RetroMTA (RetroMTA)

O estudo foi conduzido de acordo com os princípios da Declaração de Helsinque da Associação Médica Mundial. Sete terceiros molares superiores e inferiores intactos, livres de cárie, de humanos, com idades entre 30 e 37 anos, que foram programados para extração para fins ortodônticos ou cirúrgicos, foram incluídos no estudo. Os pacientes receberam uma explicação completa da lógica experimental, procedimentos clínicos e possíveis complicações. Todos os protocolos experimentais foram revisados ​​independentemente e aprovados pelo Comitê de Ética Local da Pomeranian Medical University, Szczecin, Polônia (número de aprovação KB-0012/27/13).

Protocolo clínico. Para todos os dentes incluídos, foram feitas radiografias periapicais para excluir a presença de cárie ou patologia periapical. A sensibilidade dentária foi avaliada por testes térmicos (Kältespray; M&W Dental, Büdingen, Alemanha) e testes de sensibilidade elétrica (Vitality Scanner Pulp Vitality Tester; SybronEndo, Orange, CA, EUA). Esses dentes foram submetidos à exposição pulpar, capeamento direto com RetroMTA e restauração com resina composta. Sete meses depois, os dentes foram avaliados clínica e radiograficamente. A avaliação clínica foi realizada em 1 semana e 7 meses após o procedimento. Durante as entrevistas clínicas, os pacientes foram questionados sobre a presença de dor, seu tipo e duração. As reações aos estímulos térmicos foram classificadas em três categorias: 1 = resposta normal (dor com duração de até 10 s); 2 = uma resposta estendida (dor > 10 s); 3 = sem resposta. Um teste elétrico foi realizado usando um Vitality Scanner, e foi repetido três vezes. Sete meses após o procedimento, os dentes foram extraídos e submetidos a processamento e avaliação histológica.

Processamento histológico. Imediatamente após a extração, os dentes foram imersos em solução de formalina tamponada neutra a 10% e cuidadosamente lavados de sangue e saliva. Após uma breve prefixação (≤10 minutos), foram tomadas precauções especiais para facilitar a fixação do tecido pulpar. As raízes foram separadas 5 mm apicalmente à junção amelocementária, usando um disco diamantado sob resfriamento abundante com água. Em seguida, os dentes foram desgastados com uma broca diamantada cilíndrica de alta rotação sob jato d'água no plano mésio-distal ou vestíbulo-lingual até a exposição de um ou mais cornos pulpares. Fotografias e radiografias foram tiradas de cada amostra antes das etapas sucessivas. Para a desmineralização, os espécimes foram imersos por 3 a 4 semanas em uma solução aquosa composta por uma mistura de 22,5% (v/v) de ácido fórmico e 10% (p/v) de citrato de sódio, com determinação radiográfica do ponto final. Em seguida, todos os espécimes foram lavados em água corrente por 24 horas, desidratados com graus crescentes de etanol, limpos em xileno, infiltrados e incluídos em parafina (ponto de fusão de 56 ° C) seguindo procedimentos padrão. Os blocos de parafina foram aparados. Com o micrótomo regulado para 5 μM, foram feitos cortes seriados até esgotar todo o tecido pulpar da câmara. Seis a oito seções foram coletadas em cada lâmina. Cada quinta lâmina foi corada com hematoxilina e eosina para triagem e avaliação da formação de tecido mineralizado. Essas seções coradas foram usadas para localizar as áreas que exibem as reações inflamatórias mais graves e aquelas com pontes menos favoráveis. Com base nessa avaliação inicial, todas as lâminas adjacentes ao local com condições menos favoráveis ​​foram coradas. Além disso, as lâminas selecionadas foram submetidas a uma técnica modificada de Brown e Brenn (Taylor 1966) para coloração de bactérias. Em seguida, lamínulas foram colocadas sobre as lâminas e os cortes foram examinados ao microscópio de luz. Para cada polpa, foi registrada a pior condição histológica observada. Se bactérias fossem observadas nas paredes da cavidade ou na área de exposição, o caso era excluído da avaliação.

Dois dentes intactos (um terceiro molar superior e um inferior) extraídos para pericoronarite foram usados ​​como controle. Para testar a confiabilidade da mancha bacteriana, dois dentes com cárie profunda foram examinados, extraídos por serem considerados não restauráveis. Esses dentes foram processados ​​usando o mesmo protocolo do grupo experimental.

As lâminas foram observadas em microscópio de luz (Leica DMLB; Leica Microsystems, Wetzlar, Alemanha) e fotografias digitais foram tiradas (Leica DFC420; Leica Microsystems, Wetzlar, Alemanha). Os seguintes aspectos foram observados com particular atenção: 1) Presença e tipo de tecidos mineralizados formados na área da exposição cirúrgica; 2) Morfologia das células que revestem este tecido mineralizado; 3) Presença e grau de reações inflamatórias na área pulpar subjacente ao tecido neoformado; e 4) Presença de bactérias coráveis ​​na cavidade experimental ou na área de exposição pulpar.