Гистологическая оценка образования твердых тканей после прямого покрытия пульпы с помощью RetroMTA (RetroMTA)

Исследование проводилось в соответствии с принципами Хельсинкской декларации Всемирной медицинской ассоциации. В исследование были включены семь некариозных интактных третьих моляров верхней и нижней челюсти людей в возрасте 30-37 лет, которые были запланированы для удаления в ортодонтических или хирургических целях. Пациенты получили подробное объяснение экспериментального обоснования, клинических процедур и возможных осложнений. Все экспериментальные протоколы были независимо рассмотрены и одобрены Местным комитетом по этике Поморского медицинского университета, Щецин, Польша (номер утверждения KB-0012/27/13).

Клинический протокол. Для всех включенных зубов были сделаны периапикальные рентгенограммы, чтобы исключить наличие кариеса или периапикальной патологии. Чувствительность зубов оценивали с помощью термического тестирования (Kältespray; M&W Dental, Бюдинген, Германия) и тестирования электрической чувствительности (сканер Vitality Scanner Pulp Vitality Tester; SybronEndo, Оранж, Калифорния, США). Эти зубы были подвергнуты обнажению пульпы, прямому покрытию RetroMTA и реставрации композитным материалом. Через семь месяцев зубы были клинически и рентгенологически оценены. Клиническую оценку проводили через 1 неделю и 7 месяцев после процедуры. Во время клинического интервью пациентов спрашивали о наличии боли, ее типе и продолжительности. Реакции на температурные раздражители были разделены на три категории: 1 = нормальная реакция (боль длительностью до 10 с); 2 = расширенная реакция (боль > 10 с); 3 = нет ответа. Электрический тест был выполнен с использованием сканера Vitality Scanner и повторен трижды. Через семь месяцев после процедуры зубы были удалены и подвергнуты гистологической обработке и оценке.

Гистологическая обработка. Сразу после удаления зубы погружали в 10% нейтральный забуференный раствор формалина и осторожно отмывали от крови и слюны. После кратковременной префиксации (≤10 минут) были предприняты специальные меры предосторожности для облегчения фиксации тканей пульпы. Корни были разделены на 5 мм апикально до цементно-эмалевой границы с помощью алмазного диска при обильном водяном охлаждении. Затем зубы обтачивали высокоскоростным цилиндрическим алмазным бором под водяной струей в мезио-дистальной или щечно-язычной плоскости до обнажения одного или нескольких рогов пульпы. Перед последовательными этапами были сделаны фотографии и рентгенограммы каждого образца. Для деминерализации образцы погружали на 3–4 недели в водный раствор, состоящий из смеси 22,5% (об./об.) муравьиной кислоты и 10% (вес./об.) цитрата натрия, с радиографическим определением конечной точки. Затем все образцы промывали проточной водопроводной водой в течение 24 часов, обезвоживали этанолом возрастающей концентрации, очищали ксилолом, инфильтровали и заливали в парафин (температура плавления 56 °С) по стандартной методике. Парафиновые блоки обрезали. С микротомом, установленным на 5 мкМ, были сделаны серийные срезы до полного исчерпания всей ткани пульпы в камере. На каждом предметном стекле собирали от шести до восьми срезов. Каждое пятое предметное стекло окрашивали гематоксилином и эозином для скрининга и оценки образования минерализованной ткани. Эти окрашенные срезы использовались для локализации областей с наиболее выраженными воспалительными реакциями и областей с менее благоприятным образованием мостовидных мостиков. На основании этой первоначальной оценки все предметные стекла, расположенные рядом с местом с менее благоприятными условиями, были окрашены. Кроме того, выбранные предметные стекла подвергались модифицированному методу Брауна и Бренна (Taylor, 1966) для окрашивания бактерий. Затем на предметные стекла накладывали покровные стекла и срезы изучали с помощью светового микроскопа. Для каждой пульпы регистрировали наихудшее наблюдаемое гистологическое состояние. При обнаружении бактерий на стенках полости или в зоне воздействия случай исключался из рассмотрения.

В качестве контроля использовали два интактных зуба (один верхний и один третий моляр нижней челюсти), удаленные по поводу перикоронита. Чтобы проверить надежность бактериального окрашивания, были исследованы два зуба с глубоким кариесом, которые были удалены, поскольку считались не подлежащими восстановлению. Эти зубы были обработаны по тому же протоколу, что и экспериментальная группа.

Слайды исследовали под световым микроскопом (Leica DMLB; Leica Microsystems, Wetzlar, Германия) и делали цифровые фотографии (Leica DFC420; Leica Microsystems, Wetzlar, Германия). Особо внимательно наблюдали за следующими аспектами: 1) Наличие и тип минерализованных тканей, образовавшихся в области хирургического вмешательства; 2) Морфология клеток, выстилающих эту минерализованную ткань; 3) наличие и выраженность воспалительных реакций в области пульпы, прилежащей к новообразованной ткани; 4) наличие окрашиваемых бактерий в экспериментальной полости или области обнажения пульпы.