Histologische Bewertung der Hartgewebebildung nach direkter Pulpaüberkappung mit RetroMTA (RetroMTA)

Die Studie wurde in Übereinstimmung mit den Grundsätzen der Deklaration von Helsinki des Weltärztebundes durchgeführt. Sieben kariesfreie, intakte obere und untere dritte Molaren von Menschen im Alter von 30–37 Jahren, die für kieferorthopädische oder chirurgische Zwecke extrahiert werden sollten, wurden in die Studie eingeschlossen. Die Patienten erhielten eine gründliche Erklärung der experimentellen Begründung, der klinischen Verfahren und möglicher Komplikationen. Alle experimentellen Protokolle wurden unabhängig geprüft und von der lokalen Ethikkommission der Pommerschen Medizinischen Universität, Szczecin, Polen (Genehmigungsnummer KB-0012/27/13) genehmigt.

Klinisches Protokoll. Für alle eingeschlossenen Zähne wurden periapikale Röntgenaufnahmen gemacht, um das Vorhandensein von Karies oder periapikaler Pathologie auszuschließen. Die Zahnempfindlichkeit wurde durch thermische Tests (Kältespray; M&W Dental, Büdingen, Deutschland) und elektrische Empfindlichkeitstests (Vitality Scanner Pulp Vitality Tester; SybronEndo, Orange, CA, USA) beurteilt. Diese Zähne wurden einer Pulpafreilegung, einer direkten Überkappung mit RetroMTA und einer Restauration mit einem Kompositharz unterzogen. Sieben Monate später wurden die Zähne klinisch und röntgenologisch beurteilt. Die klinische Beurteilung wurde 1 Woche und 7 Monate nach dem Eingriff durchgeführt. In klinischen Interviews wurden die Patienten nach dem Vorhandensein von Schmerzen, ihrer Art und Dauer gefragt. Reaktionen auf thermische Stimuli wurden in drei Kategorien eingeteilt: 1 = normale Reaktion (Schmerz dauert bis zu 10 s); 2 = eine verlängerte Reaktion (Schmerz > 10 s); 3 = keine Antwort. Ein elektrischer Test wurde mit einem Vitality Scanner durchgeführt und dreimal wiederholt. Sieben Monate nach dem Eingriff wurden die Zähne extrahiert und einer histologischen Aufarbeitung und Beurteilung unterzogen.

Histologische Verarbeitung. Unmittelbar nach der Extraktion wurden die Zähne in eine 10%ige neutral gepufferte Formalinlösung getaucht und vorsichtig von Blut und Speichel abgewaschen. Nach einer kurzen Präfixation (≤ 10 Minuten) wurden besondere Vorkehrungen getroffen, um die Fixierung des Pulpagewebes zu erleichtern. Die Wurzeln wurden 5 mm apikal von der Zement-Schmelz-Grenze getrennt, wobei eine Diamantscheibe unter reichlicher Wasserkühlung verwendet wurde. Dann wurden die Zähne mit einem zylindrischen Hochgeschwindigkeits-Diamantbohrer unter Wasserstrahl in einer mesio-distalen oder bukko-lingualen Ebene geschliffen, bis ein oder mehrere Pulpahörner freigelegt waren. Von jeder Probe wurden vor den aufeinanderfolgenden Schritten Fotografien und Röntgenaufnahmen gemacht. Zur Demineralisierung wurden die Proben 3 bis 4 Wochen in eine wässrige Lösung, bestehend aus einer Mischung aus 22,5 % (v/v) Ameisensäure und 10 % (w/v) Natriumcitrat, getaucht und der Endpunkt röntgenologisch bestimmt. Dann wurden alle Proben 24 Stunden lang unter fließendem Leitungswasser gewaschen, mit aufsteigendem Ethanolgehalt dehydriert, in Xylol gereinigt, infiltriert und gemäß Standardverfahren in Paraffin (Schmelzpunkt 56 °C) eingebettet. Die Paraffinblöcke wurden beschnitten. Mit dem auf 5 &mgr;M eingestellten Mikrotom wurden serielle Schnitte genommen, bis das gesamte Pulpagewebe in der Kammer erschöpft war. Auf jedem Objektträger wurden sechs bis acht Schnitte gesammelt. Jeder fünfte Objektträger wurde mit Hämatoxylin und Eosin zum Screening und zur Bewertung der mineralisierten Gewebebildung gefärbt. Diese gefärbten Schnitte wurden verwendet, um die Bereiche zu lokalisieren, die die schwersten Entzündungsreaktionen zeigten, und diejenigen mit weniger günstiger Überbrückung. Basierend auf dieser ersten Bewertung wurden alle Objektträger neben dem Standort mit den ungünstigeren Bedingungen gefärbt. Zusätzlich wurden die ausgewählten Objektträger einer modifizierten Brown- und Brenn-Technik (Taylor 1966) zum Anfärben von Bakterien unterzogen. Als nächstes wurden Deckgläschen auf die Objektträger gelegt und die Schnitte wurden unter Verwendung eines Lichtmikroskops untersucht. Für jede Pulpa wurde der schlechteste beobachtete histologische Zustand aufgezeichnet. Wenn Bakterien an den Kavitätenwänden oder im Expositionsbereich beobachtet wurden, wurde der Fall von der Bewertung ausgeschlossen.

Als Kontrolle wurden zwei intakte Zähne (ein oberer und ein unterer dritter Molar) verwendet, die wegen Perikoronitis extrahiert wurden. Um die Zuverlässigkeit der bakteriellen Färbung zu testen, wurden zwei Zähne mit tiefer Karies untersucht, die extrahiert wurden, weil sie als nicht wiederherstellbar galten. Diese Zähne wurden nach dem gleichen Protokoll wie die Versuchsgruppe verarbeitet.

Die Objektträger wurden unter einem Lichtmikroskop (Leica DMLB; Leica Microsystems, Wetzlar, Deutschland) betrachtet und digitale Fotos wurden gemacht (Leica DFC420; Leica Microsystems, Wetzlar, Deutschland). Folgende Aspekte wurden mit besonderer Sorgfalt beobachtet: 1) Anwesenheit und Art von mineralisiertem Gewebe, das sich im Bereich der chirurgischen Freilegung gebildet hat; 2) Morphologie von Zellen, die dieses mineralisierte Gewebe überlagern; 3) Vorhandensein und Ausmaß von Entzündungsreaktionen im Pulpabereich unterhalb des neu gebildeten Gewebes; und 4) Anwesenheit von färbbaren Bakterien in der experimentellen Kavität oder dem Bereich, in dem die Pulpa freigelegt ist.