Valutazione istologica della formazione di tessuto duro dopo incappucciamento diretto della polpa con RetroMTA (RetroMTA)

Lo studio è stato condotto in conformità con i principi della Dichiarazione di Helsinki dell'Associazione medica mondiale. Sono stati inclusi nello studio sette terzi molari mascellari e mandibolari liberi da carie, intatti, di età compresa tra 30 e 37 anni, di cui era prevista l'estrazione per scopi ortodontici o chirurgici. I pazienti hanno ricevuto una spiegazione completa del razionale sperimentale, delle procedure cliniche e delle possibili complicanze. Tutti i protocolli sperimentali sono stati esaminati e approvati in modo indipendente dal Comitato etico locale dell'Università medica della Pomerania, Stettino, Polonia (numero di approvazione KB-0012/27/13).

Protocollo clinico. Per tutti i denti inclusi, sono state eseguite radiografie periapicali per escludere la presenza di carie o patologia periapicale. La sensibilità dei denti è stata valutata mediante test termici (Kältespray; M&W Dental, Büdingen, Germania) e test di sensibilità elettrica (Vitality Scanner Pulp Vitality Tester; SybronEndo, Orange, CA, USA). Questi denti sono stati sottoposti a esposizione della polpa, incappucciamento diretto con RetroMTA e restauro con una resina composita. Sette mesi dopo, i denti sono stati valutati clinicamente e radiograficamente. La valutazione clinica è stata eseguita a 1 settimana ea 7 mesi dopo la procedura. Durante le interviste cliniche, ai pazienti è stato chiesto della presenza di dolore, del suo tipo e della sua durata. Le reazioni agli stimoli termici sono state classificate in tre categorie: 1 = risposta normale (dolore che dura fino a 10 s); 2 = una risposta estesa (dolore > 10 s); 3 = nessuna risposta. È stato eseguito un test elettrico utilizzando un Vitality Scanner ed è stato ripetuto tre volte. Sette mesi dopo la procedura i denti sono stati estratti e sottoposti a elaborazione istologica e valutazione.

Elaborazione istologica. Immediatamente dopo l'estrazione, i denti sono stati immersi in una soluzione di formalina tamponata neutra al 10% e lavati delicatamente da sangue e saliva. Dopo una breve prefissazione (≤10 minuti), sono state prese speciali precauzioni per facilitare la fissazione del tessuto pulpare. Le radici sono state separate di 5 mm apicalmente dalla giunzione smalto-cementizia, utilizzando un disco diamantato sotto abbondante raffreddamento ad acqua. Quindi i denti sono stati fresati con una fresa diamantata cilindrica ad alta velocità sotto getto d'acqua in un piano mesio-distale o bucco-linguale fino a esporre uno o più corni pulpari. Sono state scattate fotografie e radiografie di ciascun campione prima delle fasi successive. Per la demineralizzazione, i campioni sono stati immersi per 3-4 settimane in una soluzione acquosa costituita da una miscela di acido formico al 22,5% (v/v) e citrato di sodio al 10% (p/v), con determinazione radiografica dell'end-point. Quindi tutti i campioni sono stati lavati in acqua corrente per 24 ore, disidratati utilizzando gradi ascendenti di etanolo, purificati in xilene, infiltrati e incorporati in paraffina (punto di fusione di 56 °C) seguendo le procedure standard. I blocchi di paraffina sono stati tagliati. Con il microtomo impostato a 5 μM, sono state prelevate sezioni seriali fino all'esaurimento dell'intero tessuto pulpare nella camera. Su ciascuna diapositiva sono state raccolte da sei a otto sezioni. Ogni quinto vetrino è stato colorato con ematossilina ed eosina per lo screening e la valutazione della formazione di tessuto mineralizzato. Queste sezioni colorate sono state utilizzate per localizzare le aree che presentano le reazioni infiammatorie più gravi e quelle con un bridging meno favorevole. Sulla base di questa valutazione iniziale, tutti i vetrini adiacenti alla posizione con le condizioni meno favorevoli sono stati colorati. Inoltre, i vetrini selezionati sono stati sottoposti a una tecnica modificata di Brown e Brenn (Taylor 1966) per la colorazione dei batteri. Successivamente, i vetrini coprioggetto sono stati posizionati sui vetrini e le sezioni sono state esaminate utilizzando un microscopio ottico. Per ogni polpa è stata registrata la peggiore condizione istologica osservata. Se sono stati osservati batteri sulle pareti della cavità o nell'area di esposizione, il caso è stato escluso dalla valutazione.

Due denti intatti (un terzo molare mascellare e uno mandibolare) estratti per pericoronite sono stati usati come controllo. Per testare l'attendibilità della macchia batterica sono stati esaminati due denti con carie profonda, estratti perché ritenuti non restaurabili. Questi denti sono stati elaborati utilizzando lo stesso protocollo del gruppo sperimentale.

I vetrini sono stati osservati al microscopio ottico (Leica DMLB; Leica Microsystems, Wetzlar, Germania) e sono state scattate fotografie digitali (Leica DFC420; Leica Microsystems, Wetzlar, Germania). Sono stati osservati con particolare attenzione i seguenti aspetti: 1) Presenza e tipologia di tessuti mineralizzati formatisi nell'area dell'esposizione chirurgica; 2) Morfologia delle cellule che stratificano questo tessuto mineralizzato; 3) Presenza e grado di reazioni infiammatorie nell'area pulpare sottostante al tessuto neoformato; e 4) Presenza di batteri colorabili nella cavità sperimentale o nell'area di esposizione della polpa.