Histologisk evaluering av hardvevsdannelse etter direkte pulpakapping med RetroMTA (RetroMTA)

Studien ble utført i samsvar med prinsippene i World Medical Association Declaration of Helsinki. Syv kariesfrie, intakte, maxillære og underkjeve-tredje jeksler fra mennesker i alderen 30-37 år, som var planlagt for ekstraksjon for kjeveortopedisk eller kirurgiske formål, ble inkludert i studien. Pasientene fikk en grundig forklaring på den eksperimentelle begrunnelsen, kliniske prosedyrer og mulige komplikasjoner. Alle eksperimentelle protokoller ble uavhengig gjennomgått og godkjent av den lokale etiske komiteen ved Pomeranian Medical University, Szczecin, Polen (godkjenningsnummer KB-0012/27/13).

Klinisk protokoll. For alle inkluderte tenner ble det tatt periapikale røntgenbilder for å utelukke tilstedeværelsen av karies eller periapikal patologi. Tannfølsomhet ble vurdert ved termisk testing (Kältespray; M&W Dental, Büdingen, Tyskland) og elektrisk sensitivitetstesting (Vitality Scanner Pulp Vitality Tester; SybronEndo, Orange, CA, USA). Disse tennene ble utsatt for masseeksponering, direkte dekning med RetroMTA og restaurering med en komposittharpiks. Syv måneder senere ble tennene klinisk og radiografisk evaluert. Klinisk vurdering ble utført 1 uke og 7 måneder etter prosedyren. Under kliniske intervjuer ble pasientene spurt om smerte, type og varighet. Reaksjoner på termiske stimuli ble klassifisert i tre kategorier: 1 = normal respons (smerte som varer opptil 10 s); 2 = en utvidet respons (smerte > 10 s); 3 = ingen respons. En elektrisk test ble utført med en Vitality Scanner, og ble gjentatt tre ganger. Syv måneder etter prosedyren ble tennene trukket ut og gjenstand for histologisk behandling og evaluering.

Histologisk prosessering. Umiddelbart etter ekstraksjon ble tennene nedsenket i en 10 % nøytral bufret formalinløsning, og forsiktig vasket fra blod og spytt. Etter kort prefiksering (≤10 minutter) ble det tatt spesielle forholdsregler for å lette pulpavevsfiksering. Røttene ble separert 5 mm apikalt til semento-emaljekrysset ved bruk av en diamantskive under rikelig vannkjøling. Deretter ble tennene slipt med en høyhastighets sylindrisk diamantbor under vannspray i et mesio-distalt eller bucco-lingualt plan inntil et eller flere fruktkjøtthorn ble eksponert. Fotografier og røntgenbilder ble tatt av hver prøve før påfølgende trinn. For demineralisering ble prøvene nedsenket i 3 til 4 uker i en vandig løsning bestående av en blanding av 22,5 % (v/v) maursyre og 10 % (v/v) natriumsitrat, med radiografisk bestemmelse av endepunktet. Deretter ble alle prøvene vasket i rennende vann fra springen i 24 timer, dehydrert ved bruk av stigende etanolkvalitet, renset i xylen, infiltrert og innebygd i parafin (smeltepunkt på 56 °C) etter standardprosedyrer. Parafinblokkene ble trimmet. Med mikrotomen satt til 5 μM, ble seriesnitt tatt inntil hele massevevet i kammeret ble utmattet. Seks til åtte seksjoner ble samlet på hvert objektglass. Hvert femte objektglass ble farget med hematoksylin og eosin for screening og evaluering av dannelse av mineralisert vev. Disse fargede seksjonene ble brukt til å lokalisere områdene som viser de mest alvorlige betennelsesreaksjonene, og de med mindre gunstig brodannelse. Basert på denne innledende evalueringen ble alle objektglass ved siden av stedet med de mindre gunstige forholdene farget. I tillegg ble de utvalgte objektglass utsatt for en modifisert Brown og Brenn-teknikk (Taylor 1966) for farging av bakterier. Deretter ble dekkglass plassert på objektglassene, og snittene ble undersøkt med et lysmikroskop. For hver masse ble den verste histologiske tilstanden observert registrert. Hvis det ble observert bakterier på hulromsveggene eller i eksponeringsområdet, ble tilfellet ekskludert fra evaluering.

To intakte tenner (en maxillær og en underkjeve tredje molar) ekstrahert for perikoronitt ble brukt som kontroll. For å teste påliteligheten til bakterieflekken, ble to tenner med dyp karies undersøkt, ekstrahert fordi de ble ansett som ikke-restaurerbare. Disse tennene ble behandlet med samme protokoll som forsøksgruppen.

Objektglass ble observert under et lysmikroskop (Leica DMLB; Leica Microsystems, Wetzlar, Tyskland) og digitale fotografier ble tatt (Leica DFC420; Leica Microsystems, Wetzlar, Tyskland). Følgende aspekter ble observert med spesiell forsiktighet: 1) Tilstedeværelse og type av mineralisert vev dannet i området for den kirurgiske eksponeringen; 2) Morfologi av celler som legger dette mineraliserte vevet i lag; 3) Tilstedeværelse og grad av betennelsesreaksjoner i pulpaområdet underliggende til det nydannede vevet; og 4) Tilstedeværelse av fargebare bakterier i forsøkshulen eller området for masseeksponering.