Evaluación histológica de la formación de tejido duro después del recubrimiento pulpar directo con RetroMTA (RetroMTA)

El estudio se realizó de acuerdo con los principios de la Declaración de Helsinki de la Asociación Médica Mundial. Se incluyeron en el estudio siete terceros molares maxilares y mandibulares intactos, sin caries, de humanos, de 30 a 37 años de edad, que estaban programados para extracción con fines quirúrgicos o de ortodoncia. Los pacientes recibieron una explicación detallada de la justificación experimental, los procedimientos clínicos y las posibles complicaciones. Todos los protocolos experimentales fueron revisados ​​y aprobados de forma independiente por el Comité de Ética Local de la Universidad Médica de Pomerania, Szczecin, Polonia (número de aprobación KB-0012/27/13).

Protocolo clínico. Para todos los dientes incluidos, se tomaron radiografías periapicales para excluir la presencia de caries o patología periapical. La sensibilidad dental se evaluó mediante pruebas térmicas (Kältespray; M&W Dental, Büdingen, Alemania) y pruebas de sensibilidad eléctrica (Vitality Scanner Pulp Vitality Tester; SybronEndo, Orange, CA, EE. UU.). Estos dientes fueron sometidos a exposición pulpar, recubrimiento directo con RetroMTA y restauración con resina compuesta. Siete meses después, los dientes fueron evaluados clínica y radiográficamente. La evaluación clínica se realizó a la semana ya los 7 meses del procedimiento. Durante las entrevistas clínicas, se preguntó a los pacientes sobre la presencia de dolor, su tipo y duración. Las reacciones a los estímulos térmicos se clasificaron en tres categorías: 1 = respuesta normal (dolor que dura hasta 10 s); 2 = una respuesta extendida (dolor > 10 s); 3 = sin respuesta. Se realizó una prueba eléctrica utilizando un Vitality Scanner y se repitió tres veces. Siete meses después del procedimiento, los dientes fueron extraídos y sometidos a procesamiento y evaluación histológica.

Procesamiento histológico. Inmediatamente después de la extracción, los dientes se sumergieron en una solución de formalina tamponada neutra al 10% y se lavaron suavemente de sangre y saliva. Después de una breve prefijación (≤10 minutos), se tomaron precauciones especiales para facilitar la fijación del tejido pulpar. Las raíces se separaron 5 mm apicalmente a la unión cemento-esmalte, usando un disco de diamante bajo abundante enfriamiento con agua. Luego los dientes fueron tallados con una fresa cilíndrica de diamante de alta velocidad bajo aspersión de agua en un plano mesio-distal o buco-lingual hasta exponer uno o más cuernos pulpares. Se tomaron fotografías y radiografías de cada muestra antes de los pasos sucesivos. Para la desmineralización, las muestras se sumergieron durante 3 a 4 semanas en una solución acuosa que consistía en una mezcla de ácido fórmico al 22,5 % (v/v) y citrato de sodio al 10 % (p/v), con determinación radiográfica del punto final. Luego, todos los especímenes se lavaron con agua corriente del grifo durante 24 horas, se deshidrataron usando grados ascendentes de etanol, se aclararon en xileno, se infiltraron y se incluyeron en parafina (punto de fusión de 56 °C) siguiendo los procedimientos estándar. Se recortaron los bloques de parafina. Con el micrótomo ajustado a 5 μM, se tomaron secciones seriadas hasta agotar todo el tejido pulpar en la cámara. Se recogieron de seis a ocho secciones en cada portaobjetos. Cada quinto portaobjetos se tiñó con hematoxilina y eosina para la detección y evaluación de la formación de tejido mineralizado. Estas secciones teñidas se usaron para ubicar las áreas que presentaban las reacciones inflamatorias más severas y aquellas con puentes menos favorables. Sobre la base de esta evaluación inicial, se tiñeron todos los portaobjetos adyacentes a la ubicación con las condiciones menos favorables. Además, los portaobjetos seleccionados se sometieron a una técnica modificada de Brown y Brenn (Taylor 1966) para teñir bacterias. A continuación, se colocaron cubreobjetos sobre los portaobjetos y se examinaron las secciones con un microscopio óptico. Para cada pulpa se registró la peor condición histológica observada. Si se observaron bacterias en las paredes de la cavidad o en el área de exposición, el caso se excluyó de la evaluación.

Se usaron como control dos dientes intactos (un tercer molar maxilar y uno mandibular) extraídos por pericoronitis. Para probar la confiabilidad de la tinción bacteriana, se examinaron dos dientes con caries profunda, extraídos porque se consideró que no se podían restaurar. Estos dientes fueron procesados ​​usando el mismo protocolo que el grupo experimental.

Los portaobjetos se observaron bajo un microscopio óptico (Leica DMLB; Leica Microsystems, Wetzlar, Alemania) y se tomaron fotografías digitales (Leica DFC420; Leica Microsystems, Wetzlar, Alemania). Se observaron con particular atención los siguientes aspectos: 1) Presencia y tipo de tejido mineralizado formado en el área de la exposición quirúrgica; 2) Morfología de las células que recubren este tejido mineralizado; 3) Presencia y grado de reacciones inflamatorias en el área pulpar subyacente al tejido recién formado; y 4) Presencia de bacterias teñibles en la cavidad experimental o en el área de exposición pulpar.