Intraoperativ molekylær diagnose af sentinel lymfeknude hos brystkræftpatienter

Patienter:

Mere end 1000 på hinanden følgende brystkræftpatienter, der var planlagt til Sentinel Lymfeknudebiopsi (SLNB), blev indskrevet i undersøgelsen. Undersøgelsen blev godkendt af hvert centers etiske udvalg, og hver patient gav informeret samtykke. De patienter, der havde gennemgået tidligere ipsilateral aksillær kirurgi, blev udelukket fra denne undersøgelse.

Prøveudtagningsmetode:

Sentinel Lymph Node (SLN) blev affedtet efter SLNB. Hvis knudepunktet vejede mindre end 100 mg, blev knudepunktet kun vurderet ved histologi postoperativt. Hvis knudepunktet vejede mere end 100 mg, blev knudepunktet skåret i lige store blokke i henhold til længden af ​​den korte akse: Hvis længden var mindre end 4 mm, blev knudepunktet skåret i to blokke langs den lange akse (a, b). Intraoperativt blev blok a og b testet af TIC, og blok a blev forberedt til OSNA. Postoperativt blev blok b vurderet ved histologi. Hvis længden var mere end 4 mm, blev knudepunktet skåret i fire blokke (a, b, c, d). Intraoperativt blev alle blokke (a, b, c, d) testet af TIC, og blok a og c blev forberedt til OSNA. Postoperativt blev blok b og d udsat for histologi. ALND blev kun udført, hvis TIC-resultaterne var positive.

OSNA assay:

Alle assayoperatørerne deltog i et tre-dages træningskursus før undersøgelsen. OSNA-assay blev udført i overensstemmelse med producentens instruktioner. Tre forskellige kalibratorer med definerede CK-19 mRNA kopikoncentrationer blev brugt til at konstruere en standardkurve på Sysmex RD-100i instrument. Derefter blev knudevæv homogeniseret i 4 ml homogeniseringsbuffer Sysmex LYNORHAG. Derefter blev homogenatet kortvarigt centrifugeret og direkte anvendt som skabelon for RT-LAMP. Amplifikation af CK-19 mRNA blev automatisk udført i SysmexTM RD-100i instrument med et brugsklart reagens Sysmex LYNOAMP kit, som består af en primer-nukleotidblanding, enzymer og CK-19 mRNA kalibratorer samt positive og negative kontroller . Alle resultaterne blev præsenteret på RD-100i-instrumentet i kvalitative kategorier [++, +, -] og yderligere specificeret ved CK-19 mRNA kopinummer/μl: ~250 kopier [-], 250~5000 kopier [+], og 5000~ [++]. Resultatet [+] var sammenligneligt med tilstedeværelsen af ​​en mikrometastase og [++] med en makrometastase.

Histologisk vurdering:

Alle knudeblokke anvendt til histologisk evaluering blev fikseret i 10 % bufret formalin og paraffinindlejret. Fire 4~6μm tykke objektglas med 200μm fra hinanden blev taget fra hver blok. Metastaser større end 0,2 mm blev betragtet som positive i denne undersøgelse. Metastaser blev klassificeret i henhold til det 7. kriterium af American Joint Cancer Committee. Makrometastaser (≥2 mm) og mikrometastaser (0,2~2 mm, pT1mic) blev betragtet som nodepositive. Isolerede tumorceller [≤0,2 mm, ITC'er, pT0(i+)] blev betragtet som knudenegative. Alle objektglassene blev gennemgået af en senior patolog fra et andet center. Da der var uenighed, blev en tredje seniorpatolog tilset for at stille den endelige diagnose. Alle patologerne var blinde for OSNA-resultaterne.

Statistiske metoder:

Det primære mål var nøjagtigheden, sensitiviteten og specificiteten af ​​OSNA-analysen. McNemar test blev udført for at sammenligne hastigheden mellem grupper.