Diagnóstico molecular intraoperatorio del ganglio centinela en pacientes con cáncer de mama

Pacientes:

Más de 1000 pacientes consecutivos con cáncer de mama programados para una biopsia de ganglio linfático centinela (SLNB, por sus siglas en inglés) se inscribieron en el estudio. El estudio fue aprobado por el comité ético de cada centro y cada paciente brindó su consentimiento informado. Se excluyeron de este estudio las pacientes que habían sido sometidas a cirugía axilar ipsilateral previa.

Método de muestreo:

Se eliminó la grasa del ganglio linfático centinela (SLN) después de la SLNB. Si el ganglio pesaba menos de 100 mg, el ganglio solo se evaluó mediante histología en el posoperatorio. Si el nodo pesaba más de 100 mg, el nodo se cortaba en bloques iguales según la longitud del eje corto: si la longitud era inferior a 4 mm, el nodo se cortaba en dos bloques a lo largo del eje largo (a, b). Intraoperatoriamente, el bloque ayb fueron probados por TIC, y el bloque a fue preparado para OSNA. En el postoperatorio se evaluó histológicamente el bloque b. Si la longitud era superior a 4 mm, el nodo se cortaba en cuatro bloques (a, b, c, d). Intraoperatoriamente, todos los bloques (a, b, c, d) fueron probados por TIC, y el bloque ayc fueron preparados para OSNA. Después de la operación, los bloques b y d fueron sometidos a histología. Solo se realizó ALND si los resultados de TIC eran positivos.

Ensayo OSNA:

Todos los operadores de ensayos asistieron a un curso de capacitación de tres días antes del estudio. El ensayo OSNA se realizó de acuerdo con las instrucciones del fabricante. Se utilizaron tres calibradores diferentes con concentraciones definidas de copias de ARNm de CK-19 para construir una curva estándar en el instrumento Sysmex RD-100i. Luego, los tejidos de los ganglios se homogeneizaron en 4 ml de tampón de homogeneización Sysmex LYNORHAG. Posteriormente, el homogeneizado se centrifugó brevemente y se usó directamente como plantilla para RT-LAMP. La amplificación del ARNm de CK-19 se realizó automáticamente en el instrumento SysmexTM RD-100i con un kit de reactivos Sysmex LYNOAMP listo para usar que consta de una mezcla de cebadores y nucleótidos, enzimas y calibradores de ARNm de CK-19, así como controles positivos y negativos. . Todos los resultados se presentaron en el instrumento RD-100i en categorías cualitativas [++, +, -] y se especificaron adicionalmente por número de copias de ARNm de CK-19/μl: ~250 copias [-], 250~5000 copias [+], y 5000~ [++]. El resultado [+] fue comparable a la presencia de una micrometástasis, y [++] a una macrometástasis.

Evaluación histológica:

Todos los bloques de nodos utilizados para la evaluación histológica se fijaron en formalina tamponada al 10 % y se incluyeron en parafina. De cada bloque se tomaron cuatro portaobjetos de 4~6 μm de espesor separados 200 μm. Las metástasis mayores de 0,2 mm se consideraron positivas en este estudio. Las metástasis se clasificaron según el 7º criterio del American Joint Cancer Committee. Las macrometástasis (≥2 mm) y las micrometástasis (0,2~2 mm, pT1mic) se consideraron ganglios positivos. Las células tumorales aisladas [≤0,2 mm, ITC, pT0(i+)] se consideraron con ganglios negativos. Todos los portaobjetos fueron revisados ​​por un patólogo senior de otro centro. Cuando había disconformidad, se atendía a un tercer patólogo senior para hacer el diagnóstico final. Todos los patólogos estaban cegados a los resultados de OSNA.

Métodos de estadística:

El objetivo principal era la precisión, la sensibilidad y la especificidad del ensayo OSNA. Se realizó la prueba de McNemar para comparar la tasa entre grupos.