乳腺癌患者前哨淋巴结的术中分子诊断

患者：

计划进行前哨淋巴结活检 (SLNB) 的 1000 多名连续乳腺癌患者参加了该研究。 该研究得到了每个中心的伦理委员会的批准，并且每个患者都提供了知情同意书。 既往接受过同侧腋窝手术的患者被排除在本研究之外。

取样方法：

前哨淋巴结 (SLN) 在 SLNB 后脱脂。 如果淋巴结重量小于 100mg，则仅在术后通过组织学评估淋巴结。 如果节点重量超过 100mg，则节点按短轴长度切成相等的块：如果长度小于 4mm，则节点沿长轴（a，b）切成两块。 术中，a、b 块经 TIC 检测，a 块为 OSNA 准备。 术后，b 块通过组织学评估。 如果长度超过 4mm，则将节点切成四个块（a、b、c、d）。 术中，所有块（a、b、c、d）均通过 TIC 进行测试，块 a 和 c 为 OSNA 准备。 术后，对块 b 和 d 进行组织学检查。 仅当 TIC 结果为阳性时才进行 ALND。

OSNA 测定：

所有化验操作员在研究前都参加了为期三天的培训课程。 根据制造商的说明进行 OSNA 测定。 使用具有确定的 CK-19 mRNA 拷贝浓度的三种不同校准品在 Sysmex RD-100i 仪器上构建标准曲线。 然后，将淋巴结组织在 4ml 匀浆缓冲液 Sysmex LYNORHAG 中匀浆。 之后，将匀浆短暂离心并直接用作 RT-LAMP 的模板。 CK-19 mRNA 的扩增在 SysmexTM RD-100i 仪器中自动进行，该仪器带有即用型试剂 Sysmex LYNOAMP 试剂盒，该试剂盒由引物-核苷酸混合物、酶和 CK-19 mRNA 校准物以及阳性和阴性对照组成. 所有结果都在 RD-100i 仪器上以定性类别 [++、+、-] 呈现，并通过 CK-19 mRNA 拷贝数/μl 进一步指定：~250 拷贝 [-]、250~5000 拷贝 [+]、和 5000~ [++]。 结果 [+] 与微转移的存在相当，而 [++] 与宏观转移的存在相当。

组织学评估：

用于组织学评估的所有节点块固定在 10% 缓冲福尔马林和石蜡包埋中。 每块取4～6μm厚的玻片4片，相距200μm。 大于 0.2mm 的转移在本研究中被认为是阳性的。 根据美国联合癌症委员会第 7 条标准对转移进行分类。 宏观转移（≥2mm）和微转移（0.2~2mm，pT1mic）被认为是淋巴结阳性。 孤立的肿瘤细胞 [≤0.2mm，ITCs，pT0(i+)] 被认为是淋巴结阴性。 所有载玻片均由另一中心的高级病理学家审核。 当出现分歧时，第三位高级病理学家会参与做出最终诊断。 所有病理学家都不知道 OSNA 结果。

统计方法：

主要目标是 OSNA 测定的准确性、灵敏度和特异性。 进行 McNemar 检验以比较组间的比率。