Diagnostic moléculaire peropératoire du ganglion sentinelle chez les patientes atteintes d'un cancer du sein

Les patients:

Plus de 1 000 patientes consécutives atteintes d'un cancer du sein devant subir une biopsie du ganglion sentinelle (SLNB) ont été inscrites à l'étude. L'étude a été approuvée par le comité d'éthique de chaque centre et chaque patient a donné son consentement éclairé. Les patients ayant déjà subi une chirurgie axillaire homolatérale ont été exclus de cette étude.

Méthode d'échantillonnage :

Sentinel Lymph Node (SLN) a été dégraissé après SLNB. Si le nœud pesait moins de 100 mg, le nœud n'a été évalué par histologie qu'en postopératoire. Si le nœud pesait plus de 100 mg, le nœud a été tranché en blocs égaux en fonction de la longueur de l'axe court : si la longueur était inférieure à 4 mm, le nœud a été tranché en deux blocs le long de l'axe long (a, b). En peropératoire, les blocs a et b ont été testés par TIC, et le bloc a a été préparé pour OSNA. En postopératoire, le bloc b était évalué par histologie. Si la longueur était supérieure à 4 mm, le nœud était découpé en quatre blocs (a, b, c, d). En peropératoire, tous les blocs (a, b, c, d) ont été testés par TIC, et les blocs a et c ont été préparés pour l'OSNA. En postopératoire, les blocs b et d ont été soumis à une histologie. L'ALND n'était réalisée que si les résultats du TIC étaient positifs.

Dosage OSNA :

Tous les opérateurs d'analyse ont suivi une formation de trois jours avant l'étude. Le test OSNA a été effectué conformément aux instructions du fabricant. Trois calibrateurs différents avec des concentrations définies de copies d'ARNm de CK-19 ont été utilisés pour construire une courbe standard sur l'instrument Sysmex RD-100i. Ensuite, les tissus ganglionnaires ont été homogénéisés dans 4 ml de tampon d'homogénéisation Sysmex LYNORHAG. Ensuite, l'homogénat a été brièvement centrifugé et directement utilisé comme matrice pour RT-LAMP. L'amplification de l'ARNm de CK-19 a été automatiquement effectuée dans l'instrument SysmexTM RD-100i avec un kit de réactifs Sysmex LYNOAMP prêt à l'emploi qui se compose d'un mélange d'amorces-nucléotides, d'enzymes et de calibrateurs d'ARNm de CK-19 ainsi que de contrôles positifs et négatifs . Tous les résultats ont été présentés sur l'instrument RD-100i dans les catégories qualitatives [++, +, -] et précisés par le nombre de copies d'ARNm de CK-19/μl : ~250 copies [-], 250~5000 copies [+], et 5000~ [++]. Le résultat [+] était comparable à la présence d'une micro-métastase, et [++] à une macro-métastase.

Évaluation histologique :

Tous les blocs de nœuds utilisés pour l'évaluation histologique ont été fixés dans du formol tamponné à 10 % et inclus dans de la paraffine. Quatre lames de 4 ~ 6 μm d'épaisseur espacées de 200 μm ont été prélevées dans chaque bloc. Les métastases supérieures à 0,2 mm ont été considérées comme positives dans cette étude. Les métastases ont été classées selon le 7e critère de l'American Joint Cancer Committee. Les macro-métastases (≥ 2 mm) et les micro-métastases (0,2 ~ 2 mm, pT1mic) ont été considérées comme ganglionnaires. Les cellules tumorales isolées [≤0,2 mm, ITC, pT0(i+)] ont été considérées comme ganglions négatifs. Toutes les lames ont été examinées par un pathologiste senior d'un autre centre. Lorsqu'il y avait un désaccord, un troisième pathologiste principal était assisté pour établir le diagnostic final. Tous les pathologistes ont été aveuglés aux résultats de l'OSNA.

Méthodes statistiques:

L'objectif principal était la précision, la sensibilité et la spécificité du test OSNA. Le test de McNemar a été réalisé pour comparer le taux entre les groupes.