Vartioimusolmukkeen intraoperatiivinen molekyylidiagnoosi rintasyöpäpotilailla

Potilaat:

Tutkimukseen osallistui yli 1000 peräkkäistä rintasyöpäpotilasta, joille oli määrätty Sentinel-imusolmukebiopsia (SLNB). Jokaisen keskuksen eettinen komitea hyväksyi tutkimuksen ja jokainen potilas antoi tietoisen suostumuksen. Potilaat, joille oli tehty aikaisempi ipsilateraalinen kainaloleikkaus, suljettiin pois tästä tutkimuksesta.

Näytteenottomenetelmä:

Sentinel-imusolmuke (SLN) poistettiin rasvasta SLNB:n jälkeen. Jos solmu painoi alle 100 mg, solmu arvioitiin histologialla vain leikkauksen jälkeen. Jos solmu painoi yli 100 mg, solmu leikattiin samansuuruisiksi lohkoiksi lyhyen akselin pituuden mukaan: Jos pituus oli alle 4 mm, solmu leikattiin kahdeksi lohkoksi pitkää akselia pitkin (a, b). Leikkauksensisäisesti lohkot a ja b testattiin TIC:llä, ja lohko a valmistettiin OSNA:lle. Leikkauksen jälkeen lohko b arvioitiin histologialla. Jos pituus oli yli 4 mm, solmu leikattiin neljään lohkoon (a, b, c, d). Intraoperatiivisesti kaikki lohkot (a, b, c, d) testattiin TIC:llä ja lohkot a ja c valmisteltiin OSNA:ta varten. Leikkauksen jälkeen lohkot b ja d altistettiin histologialle. ALND suoritettiin vain, jos TIC-tulokset olivat positiivisia.

OSNA-määritys:

Kaikki määrityksen suorittajat osallistuivat kolmen päivän koulutukseen ennen tutkimusta. OSNA-määritys suoritettiin valmistajan ohjeiden mukaisesti. Kolmea eri kalibraattoria, joilla oli määritellyt CK-19-mRNA-kopiopitoisuudet, käytettiin standardikäyrän muodostamiseen Sysmex RD-100i -laitteella. Sitten solmukudokset homogenisoitiin 4 ml:ssa homogenointipuskuria Sysmex LYNORHAG. Sen jälkeen homogenaattia sentrifugoitiin lyhyesti ja käytettiin suoraan templaattina RT-LAMP:lle. CK-19-mRNA:n monistus suoritettiin automaattisesti SysmexTM RD-100i -instrumentissa käyttövalmiin reagenssiin Sysmex LYNOAMP -sarjaan, joka koostuu aluke-nukleotidiseoksesta, entsyymeistä ja CK-19-mRNA-kalibraattoreista sekä positiivisista ja negatiivisista kontrolleista. . Kaikki tulokset esitettiin RD-100i-laitteella kvalitatiivisissa luokissa [++, +, -] ja tarkennettiin edelleen CK-19 mRNA:n kopiomäärällä/μl: ~250 kopiota [-], 250~5000 kopiota [+], ja 5000~ [++]. Tulos [+] oli verrattavissa mikrometastaasin esiintymiseen ja [++] makrometastaasiin.

Histologinen arviointi:

Kaikki histologiseen arviointiin käytetyt solmulohkot kiinnitettiin 10 % puskuroituun formaliiniin ja upotettiin parafiiniin. Jokaisesta lohkosta otettiin neljä 4–6 μm paksua diaa 200 μm:n etäisyydellä toisistaan. Yli 0,2 mm:n metastaaseja pidettiin positiivisina tässä tutkimuksessa. Etäpesäkkeet luokiteltiin American Joint Cancer Committeen seitsemännen kriteerin mukaan. Makrometastaasseja (≥ 2 mm) ja mikrometastaasseja (0,2 - 2 mm, pT1mic) pidettiin solmupositiivisina. Eristettyjä kasvainsoluja [≤0,2 mm, ITC:t, pTO(i+)] pidettiin solmunegatiivisina. Toisen keskuksen vanhempi patologi tarkasteli kaikki diat. Kun oli erimielisyyttä, kolmas vanhempi patologi osallistui lopullisen diagnoosin tekemiseen. Kaikki patologit olivat sokeutuneet OSNA-tuloksiin.

Tilastolliset menetelmät:

Ensisijainen tavoite oli OSNA-määrityksen tarkkuus, herkkyys ja spesifisyys. McNemar-testi suoritettiin vertaamaan ryhmien välistä määrää.