Untersuchung von Proteinen in Kopf- und Halskrebszellen

ZIELE:

• Definieren Sie die Funktion und den Mechanismus von LZAP bei der Regulierung von ARF.
• Bestimmen Sie den Mechanismus und die biologischen Konsequenzen der LZAP-Hemmung von NF-κB.
• Bestimmen Sie, ob LZAP eine Tumorsuppressoraktivität aufweist, indem Sie LZAP bei Mäusen bedingt gezielt einsetzen.

ÜBERBLICK: Mithilfe molekularer Labortechniken untersucht diese Studie die biochemischen Mechanismen, durch die LZAP die transkriptionelle, tumorsuppressive Aktivität (sowohl p53-abhängig als auch p53-unabhängig) von ARF aktiviert und die transkriptionelle, tumorigene Aktivität von NF-kB hemmt. Die LZAP-Regulierung neu identifizierter ARF-Aktivitäten wie S-Phasen-Verzögerung und ARF-vermittelter B23-Abbau wird ebenfalls bewertet. Die tumorsuppressive Aktivität von LZAP wird in vivo mithilfe eines bedingten Knockout-Vektors bewertet, um LZAP in Mäusen anzugreifen und auf spontane und induzierte Tumorbildung zu achten. Zu den zur Bestimmung der Studienendpunkte verwendeten Laboranalysen gehören standardmäßige rekombinante DNA, rekombinante Proteinexpression und -reinigung, Zellkultur und Transfektion, Zellmarkierung, Reportertests, Durchflusszytometrie, Hefe-Zwei-Hybrid, Immunpräzipitation, Immunblotting, Immunfluoreszenz, TUNEL-Test, ELISA-Test, Southern Blotting sowie Protein- und Genexpression.