Estudio de proteínas en células cancerosas de cabeza y cuello

OBJETIVOS:

• Definir la función y el mecanismo de LZAP en la regulación de ARF.
• Determinar el mecanismo y las consecuencias biológicas de la inhibición LZAP de NF-κB.
• Determine si LZAP tiene actividad supresora de tumores mediante la orientación condicional de LZAP en ratones.

ESQUEMA: Usando técnicas de laboratorio molecular, este estudio examina los mecanismos bioquímicos por los cuales LZAP activa la actividad supresora de tumores transcripcional (tanto dependiente de p53 como independiente de p53) de ARF e inhibe la actividad tumorigénica transcripcional de NF-kB. También se evalúa la regulación LZAP de actividades ARF recientemente identificadas, como el retraso de la fase S y la degradación B23 mediada por ARF. La actividad supresora de tumores de LZAP se evalúa in vivo usando un vector knockout condicional para apuntar a LZAP en ratones y observar la formación de tumores espontáneos e inducidos. Los análisis de laboratorio utilizados para determinar los criterios de valoración del estudio incluyen ADN recombinante estándar, expresión y purificación de proteínas recombinantes, cultivo celular y transfección, marcaje celular, ensayos indicadores, citometría de flujo, levadura-dos híbridos, inmunoprecipitación, inmunotransferencia, inmunofluorescencia, ensayo TUNEL, ensayo ELISA, ensayo Southern transferencia y expresión de proteínas y genes.