Studio delle proteine ​​nelle cellule tumorali della testa e del collo

OBIETTIVI:

• Definire la funzione e il meccanismo di LZAP nella regolazione dell'ARF.
• Determinare il meccanismo e le conseguenze biologiche dell'inibizione LZAP di NF-κB.
• Determinare se LZAP ha attività di soppressione del tumore mediante il targeting condizionale di LZAP nei topi.

SCHEMA: Utilizzando tecniche di laboratorio molecolare, questo studio esamina i meccanismi biochimici mediante i quali LZAP attiva l'attività trascrizionale e soppressiva del tumore (sia p53-dipendente che p53-indipendente) dell'ARF e inibisce l'attività trascrizionale e tumorigenica di NF-kB. Viene valutata anche la regolazione LZAP delle attività ARF appena identificate, come il ritardo della fase S e la degradazione B23 mediata da ARF. L'attività soppressiva del tumore di LZAP viene valutata in vivo utilizzando un vettore knockout condizionale per mirare a LZAP nei topi e per osservare la formazione di tumori spontanei e indotti. Le analisi di laboratorio utilizzate per determinare gli endpoint dello studio includono DNA ricombinante standard, espressione e purificazione di proteine ​​ricombinanti, coltura cellulare e trasfezione, etichettatura cellulare, saggi reporter, citometria a flusso, lievito-due ibrido, immunoprecipitazione, immunoblotting, immunofluorescenza, saggio TUNEL, saggio ELISA, Southern blotting ed espressione proteica e genica.