Análisis comparativo de tumores 2-D en gliomas familiares

Los investigadores proponen estudiar los cambios genéticos en pacientes con glioma familiar como primer paso para identificar los genes que causan estos tumores. Con consentimiento informado, se adquirirán ADN de tejido tumoral y no tumoral, cortes histológicos, genealogías e información clínica detallada para pacientes con gliomas familiares. Se utilizará una metodología de cribado genómico denominada exploración genómica 2D. Las diferencias detectadas entre el tumor y los tejidos normales (sangre, fibroblastos) identificarán eventos que ocurren en el proceso tumoral. Una comparación de los eventos en los gliomas familiares y esporádicos describirá algunas de las vías que se sospecha están involucradas tanto en la iniciación como en la progresión del tumor. Brevemente, los fragmentos de ADN se amplifican con la reacción en cadena de la polimerasa (PCR) de tejido tumoral y normal utilizando cebadores diseñados para identificar de 100 a 1000 sitios aleatorios dentro del genoma. Los cebadores de PCR se hibridarán en todo el genoma y generarán una cantidad manejable de productos de PCR cortos que se detectan mediante electroforesis en gel y autorradiografía. La PCR tanto para el tumor como para los tejidos constitucionales se amplifica durante 20 a 25 ciclos para garantizar una señal adecuada pero para evitar entrar en una fase no exponencial de la amplificación de la PCR. Los productos se marcan radiactivamente y luego se ejecutan en un gel de secuenciación estándar. El carril único que contiene los productos de PCR marcados se corta y luego se superpone sobre un gel de clasificación desnaturalizante con una clasificación de desnaturalizante del 10 al 75 %. Luego, el ADN marcado se separa en la segunda dimensión y el ADN se detecta mediante Southern Transfer a una membrana de nailon o mediante secado en gel y película de exposición directa. Una comparación directa de las señales de PCR del tumor y el tejido constitucional identifica la pérdida o ganancia de señal que refleja los mismos fenómenos dentro del genoma. El aislamiento y caracterización de fragmentos constantemente alterados en gliomas proporcionará el primer paso en la búsqueda de genes responsables de la iniciación y progresión de los gliomas. Debido a la colaboración entre investigadores de diferentes centros en Canadá, los investigadores actuales tienen una oportunidad única de realizar el estudio en la mayor colección de gliomas familiares del mundo. Esperan varias anomalías genómicas en cada tumor. Algunos de estos pueden verse en varios pacientes. Los datos se analizarán principalmente utilizando estadísticas descriptivas, con frecuencia de anomalías genéticas en diferentes ubicaciones cromosómicas descritas.