Bioingeniería de la fracción vascular estromal del tejido sinovial y la almohadilla de grasa en pacientes con lesión del cartílago articular de la rodilla

Introducción: Las lesiones del cartílago afectan hasta al 63% de la población, y pueden causar dolor y limitaciones funcionales importantes. La evolución a la artrosis puede conducir a un empeoramiento de la calidad de vida, además de ser altamente incapacitante. La artrosis se considera una enfermedad de salud pública con una alta carga económica y social sin tratamiento definitivo. A pesar de las diversas técnicas disponibles en la actualidad, no es posible la regeneración completa del cartílago hialino dañado. Por estas razones, la terapia celular con células mesenquimales ha recibido más atención en la investigación debido a la relativa facilidad de procesamiento. La sinovia y la almohadilla de grasa infrarrotuliana son fuentes predecibles y fácilmente accesibles durante el procedimiento artroscópico de rutina, además de exhibir el mayor potencial para la diferenciación condrogénica entre los sitios donantes de células mesenquimales. En un estudio traslacional preclínico anterior (FAPESP - Agencia de Apoyo a la Investigación del Gobierno del Estado de São Paulo), el grupo de autores desarrolló el protocolo de bioingeniería de tejidos en un modelo animal grande de acuerdo con las buenas prácticas de laboratorio para técnicas de uso humano (GMP). Después de completar este paso, los autores ahora proponen el ensayo clínico de fase I/II.

Propósito: El objetivo del estudio es evaluar la efectividad y seguridad para el tratamiento de las lesiones del cartílago articular, con un compuesto de fracción vascular estromal adquirida de la sinovia y la almohadilla grasa infrapatelar de la rodilla, asociado a un andamio de colágeno.

Métodos: Un ensayo clínico de fase I/II (primero en humanos) para evaluar la seguridad y eficacia del tratamiento de lesiones de cartílago con una construcción de ingeniería de tejidos.

Criterios de inclusión: Pacientes con diagnóstico de lesión cartilaginosa única de 3 a 6 cm2 de espesor total, sintomática y sin mejoría con tratamiento conservador. Edad entre 18 y 40 años.

Criterios de exclusión: cualquier cirugía previa para tratar la lesión, presencia de patología en la rodilla contralateral u otras patologías que interfieran con la recuperación. Se realizarán pruebas serológicas a los donantes autólogos, serología completa: VIH, virus de la hepatitis C, hepatitis B, virus linfotrópico T humano, sífilis y Chagas.

Nuestros comités de ética institucional aprobaron el protocolo (CEP local: 4.285.308 y nacional CAAE: 34798720.5.0000.0068).

El constructo de bioingeniería estará compuesto por fracción vascular estromal recolectada de la membrana sinovial y grasa infrapatelar de la rodilla lesionada, sometida a procesamiento enzimático en un solo tiempo quirúrgico, asociada a un andamio de colágeno (Chondro-Gide, Geistlich, Suiza). El tejido sinovial y adiposo se recoge por la vía habitual de la incisión quirúrgica inicial para la reparación del cartílago, y posteriormente se centrifuga durante 3 minutos.

El aislamiento de la fracción vascular-estromal se realizará mediante digestión enzimática con colagenasa IA. La suspensión de células se centrifugará y el botón de células se suspenderá en 1 ml de solución salina al 0,9 %. En un gramo de tejido adiposo se encuentra una media de 2x106 células, estando compuesto el 10% por células estromales derivadas de los adipocitos.

Se recogerán datos demográficos de los pacientes, así como datos sobre la frecuencia de complicaciones en el perioperatorio, postoperatorio inmediato y tardío. El impacto sobre la calidad de vida y la función de la rodilla se evaluará mediante cuestionarios. Se documentará la duración de la estadía en el hospital, así como los costos de atención quirúrgica y ambulatoria. El tejido formado tras la intervención se evaluará mediante la puntuación 3D MOCART modificada.

Los datos demográficos se presentarán en forma de gráficos y tablas, así como las respectivas distribuciones de frecuencia de posibles complicaciones en el perioperatorio y postoperatorio, y la evaluación de la viabilidad económica. Se realizarán análisis estadísticos para comparar los períodos preoperatorio y postoperatorio.

Para evaluar el supuesto de distribución normal se realizará la prueba de Shapiro-Wilk, y para el análisis de homogeneidad de varianzas se realizará la prueba de Levene. En todos los análisis inferenciales se considerará una probabilidad de error tipo I (α) de 0,05. Para evaluar las variables cuantitativas se utilizará la prueba t de Student (o prueba de Mann-Whitney, si las variables no presentan distribución normal) o Análisis de Varianza Multivariado (MANOVA). Para verificar la asociación entre variables categóricas se utilizará la prueba de asociación chi-cuadrado. Para todos los análisis se utilizará el software SIGMAPlot 12.5 (Systat Software, Inc.).

Los autores también realizarán la evaluación por caracterización en laboratorio de la fracción estromal vascular de las células estromales mesenquimales con dos metodologías: análisis de inmunofenotipado por citometría de flujo y análisis de diferenciación celular para linaje osteogénico, previamente validado por el grupo de investigación.

Resultados:

Los resultados primarios se evaluarán antes de la operación, a los 6 y 12 meses después de la operación mediante resonancia magnética 3T (cantidad y calidad de la reparación), cuestionarios de calidad de vida y función de la rodilla, además de las complicaciones perioperatorias y posoperatorias. Los resultados secundarios se evaluarán midiendo los recursos sanitarios utilizados para garantizar la compatibilidad, reproducibilidad y generalización de la técnica.

Hipótesis: Los autores creen que los eventos adversos como dolor, sangrado y fiebre serán similares a los procedimientos quirúrgicos actuales. Los autores creen que habrá una mejora en las puntuaciones de la función de la rodilla y la calidad de vida de los pacientes que se someten al procedimiento a partir de la evaluación no invasiva por resonancia magnética con tejido cartilaginoso de buena calidad.