Bioengenharia da Fração Vascular do Tecido Sinovial e da Almofada Gordurosa em Pacientes com Lesão da Cartilagem Articular do Joelho

Introdução: As lesões da cartilagem atingem até 63% da população, podendo causar dor e importantes limitações funcionais. A evolução para osteoartrite pode levar a uma piora da qualidade de vida, além de ser altamente incapacitante. A osteoartrite é considerada uma doença de saúde pública com alto impacto econômico e social sem tratamento definitivo. Apesar das várias técnicas disponíveis hoje, a regeneração completa da cartilagem hialina danificada não é possível. Por esses motivos, a terapia celular com células mesenquimais tem recebido maior atenção nas pesquisas devido à relativa facilidade de processamento. A sinóvia e o coxim adiposo infrapatelar são fontes previsíveis e facilmente acessíveis durante o procedimento artroscópico de rotina, além de exibirem o maior potencial de diferenciação condrogênica entre os locais doadores de células mesenquimais. Em um estudo translacional pré-clínico anterior (FAPESP - Financiadora de Pesquisas do Governo do Estado de São Paulo), o grupo de autores desenvolveu o protocolo de bioengenharia de tecidos em um modelo animal de grande porte de acordo com as boas práticas de laboratório para técnicas de uso humano (BPF). Concluída esta etapa, os autores propõem agora o ensaio clínico fase I/II.

Objetivo: O objetivo do estudo é avaliar a eficácia e segurança no tratamento de lesões da cartilagem articular, com um composto de fração vascular estromal adquirida da sinóvia e do coxim adiposo infrapatelar do joelho, associado a um scaffold de colágeno.

Métodos: Um ensaio clínico de fase I/II (primeiro em humanos) para avaliar a segurança e a eficácia do tratamento de lesão de cartilagem com uma construção de engenharia de tecidos.

Critérios de inclusão: Pacientes diagnosticados com uma única lesão de cartilagem de espessura total de 3 a 6 cm2, sintomática e sem melhora com tratamento conservador. Idade entre 18 e 40 anos.

Critérios de exclusão: qualquer cirurgia prévia para tratamento da lesão, presença de patologia no joelho contralateral ou outras patologias que interfiram na recuperação. Serão realizados testes sorológicos para doadores autólogos, sorologia completa: HIV, vírus da hepatite C, hepatite B, vírus T-linfotrópico humano, sífilis e Chagas.

Nossos comitês de ética institucionais aprovaram o protocolo (CEP local: 4.285.308 e CAAE nacional: 34798720.5.0000.0068).

A construção de bioengenharia será composta por fração vascular estromal coletada da membrana sinovial e gordura infrapatelar do joelho lesionado, submetida a processamento enzimático em tempo cirúrgico único, associada a um scaffold de colágeno (Chondro-Gide, Geistlich, Suíça). Os tecidos sinovial e adiposo são coletados pela via usual da incisão cirúrgica inicial para reparação da cartilagem e, posteriormente, centrifugados por 3 minutos.

O isolamento da fração vascular-estromal será realizado por meio de digestão enzimática com colagenase IA. A suspensão de células será centrifugada e o botão de célula será suspenso em 1 mL de solução salina 0,9%. Em um grama de tecido adiposo, encontra-se em média 2x106 células, sendo 10% compostas por células estromais derivadas de adipócitos.

Serão coletados dados demográficos dos pacientes, bem como dados sobre a frequência de complicações no perioperatório, pós-operatório imediato e tardio. O impacto na qualidade de vida e na função do joelho será avaliado por meio de questionários. O tempo de permanência no hospital, bem como os custos cirúrgicos e ambulatoriais, serão documentados. O tecido formado após a intervenção será avaliado pelo escore 3D MOCART modificado.

Os dados demográficos serão apresentados em forma de gráficos e tabelas, bem como as respectivas distribuições de frequência de possíveis complicações no perioperatório e pós-operatório e a avaliação da viabilidade econômica. Análises estatísticas serão realizadas para comparar os períodos pré e pós-operatório.

Para avaliar a hipótese de distribuição normal, será realizado o teste de Shapiro-Wilk e, para a análise de homogeneidade das variâncias, será realizado o teste de Levene. Em todas as análises inferenciais será considerada uma probabilidade de erro tipo I (α) de 0,05. Para avaliação das variáveis ​​quantitativas será utilizado o teste t de Student (ou teste de Mann-Whitney, caso as variáveis ​​não apresentem distribuição normal) ou Análise de Variância Multivariada (MANOVA). Para verificar a associação entre variáveis ​​categóricas, será utilizado o teste de associação qui-quadrado. Para todas as análises, será utilizado o software SIGMAPlot 12.5 (Systat Software, Inc.).

Os autores também farão a avaliação por caracterização laboratorial da fração estromal vascular das células estromais mesenquimais com duas metodologias: análise de imunofenotipagem por citometria de fluxo e análise de diferenciação celular para linhagem osteogênica, previamente validada pelo grupo de pesquisa.

Resultados:

Os desfechos primários serão avaliados no pré-operatório, aos 6 e 12 meses de pós-operatório por ressonância magnética 3T (quantidade e qualidade do reparo), questionários de qualidade de vida e função do joelho, além de complicações perioperatórias e pós-operatórias. Os desfechos secundários serão avaliados por meio da mensuração dos recursos de saúde utilizados para garantir compatibilidade, reprodutibilidade e generalização da técnica.

Hipótese: Os autores acreditam que eventos adversos como dor, sangramento e febre serão semelhantes aos procedimentos cirúrgicos atuais. Os autores acreditam que haverá melhora nos escores de função do joelho e na qualidade de vida dos pacientes submetidos ao procedimento a partir da avaliação não invasiva por ressonância magnética com tecido cartilaginoso de boa qualidade.