Käyttäytymisen, toimeenpanotoiminnan, välittäjäaineen toiminnan ja genomisen ilmentymisen arviointi Kuvan Non Responders (IST)

Odotettu tutkimukseen osallistujapopulaatio oli noin 30 vakiintunutta PKU-potilasta, jotka saivat hoitoa Hayward Genetics Centeristä ja joiden ei aiemmin havaittu laskeneen veren fenyylialaniinin (PHE) pitoisuuksia (ei reagoineet) sapropteriinia annettaessa. Koehenkilöt toimivat omana kontrollinaan. Myöhemmin tutkimukseen lisättiin ylimääräinen määrä potilaita, jotka eivät olleet saaneet sapropteriinia, ja yli 21-vuotiaiden ikäraja poistettiin IRB-hyväksynnän perusteella. Ensisijaiset päätepisteet suunniteltiin mittaamaan käyttäytymis- ja kognitiivisia toimintoja, välittäjäainetasoja ja entsyymiaktiivisuuden geeniekspressiota 4 viikon hoidon jälkeen verrattuna lähtötasoihin.

Tutkimuksen lähtötilanteessa jokainen potilas osallistui noin tunnin mittaiseen klinikkakäyntiin tavanomaisessa genetiikkaklinikan sijaintipaikassaan. Tutkimuksen tarkoituksesta, suunnittelusta ja vaatimuksista keskusteltiin, ja suostumukset tarkasteltiin ja allekirjoitettiin.

Päätutkija (PI) ja/tai tutkimuskoordinaattori antoivat potilaille ja vanhemmille toimeenpanotoiminnan suorituskyvyn ja käyttäytymisen arviointiinventaarioita (BASC-2- ja BRIEF-työkalut).

Virtsanäytteet kerättiin ei-invasiivisesti välittäjäainetasojen mittaamiseksi. Veri, joka on kerätty laskimopunktiolla (3-5 ml) microarray-ilmentymisanalyysiä ja plasman aminohappojen analysointia varten. Osallistujille aiemmin toimitetut 3 päivän ruokakirjat kerättiin.

Osallistujille annettiin 4 viikon Kuvan®-saanti ja ohjeet lääkkeen ottamiseen tutkimusjakson aikana. Korostettiin tavanomaisen ravinnonsaannin (ruokavalinnat ja aineenvaihduntakaava) säilyttämisen tärkeyttä minimoimaan kaikki tutkimusvaikutukset, jotka eivät johdu sapropteriinin antamisesta. Sapropteriini lopetettiin 4 viikon tutkimusjakson lopussa. Poikkeuksena olivat naiivit potilaat, joiden havaittiin reagoivan sapropteriiniin.

Kaikki nämä toimenpiteet toistettiin samoissa paikoissa tutkimuksen osallistujien kanssa tutkimusjakson viikon 4 lopussa.

Viikkojen 1 ja 2 lopussa lisäverinäytteitä lähetettiin Hayward Genetics Centeriin PHE- ja tyrosiinitasojen (TYR) mittaamiseksi sen varmistamiseksi, ettei potilaan tavanomaisessa ravinnonsaannissa ole tapahtunut merkittäviä muutoksia. Nämä näytteet otettiin kunkin potilaan paikallisessa terveydenhuollon yksikössä, kuten tavallisessa seurannassa. Kolmen päivän ruokapäiväkirjojen ravintoaineanalyysi suoritettiin Hayward Genetics Centerissä.

1. Käyttäytymistä ja toimeenpanotoimintaa arvioitiin käyttämällä julkaistuja validoituja selvityksiä, jotka täydennettiin potilaan omakohtaisina raportteina ja tarvittaessa vanhemman (tai huoltajan) raportteina. Käytetyt välineet olivat Behavioral Assessment System for Children (BASC-2) vanhempien luokitusasteikko ja itseraportoiva persoonallisuusluokitusasteikko sekä Behavioral Rating Inventory of Executive Function (BRIEF) Parent Form Instruments of Executive Function. Tutkimuskoordinaattori ja PI pisteyttivät valmiit inventaariot käyttämällä sähköisiä arviointivälineitä Harvard Medical Centerin asiantuntijoiden kanssa tarvittaessa.
2. Virtsanäytteet kerättiin ei-invasiivisesti ja lähetettiin katekolien ja välittäjäaineiden analysointia varten tähän tekniikkaan erikoistuneeseen NIH:n laboratorioon. Näytteet sokkoutettiin tähän laboratorioon harhan estämiseksi.
3. Verinäytteiden mikrosiruanalyysi suoritettiin Hayward Genetics Molecular Laboratoryssa sen määrittämiseksi, mikä vaikutus geenin ilmentymiseen ja siten entsyymiaktiivisuuteen on sapropteriinin antamisen seurauksena.
4. Plasman aminohapot analysoitiin Hayward Genetics Biochemical Laboratoryssa sen dokumentoimiseksi, että potilaat "ei reagoi" sapropteriiniin (ei tuloksena veren PHE:n laskua); ja seurata plasman aminohappojen muutoksia, jotka voivat viitata potilaan kyvyttömyyteen noudattaa tavallisia ruokavaliorajoituksia. Potilaat, jotka eivät olleet Kuvanille vastanneet, huomioitiin ja toimivat vertailijoina.
5. Potilaiden (tai vanhempien/huoltajien) kotona täyttämät kolmen päivän ruokapäiväkirjat dokumentoivat kaikki olennaiset muutokset tavanomaisessa ruokavaliossa tutkimusjakson aikana. Nämä analysoitiin Hayward Genetics Centerissä MetabolicPro-verkkopohjaisella analyysiohjelmalla.