Valutazione del comportamento, della funzione esecutiva, della funzione del neurotrasmettitore e dell'espressione genomica Kuvan Nonresponders (IST)

La popolazione prevista dei partecipanti allo studio era di circa 30 pazienti con PKU accertata che ricevevano cure dall'Hayward Genetics Center, che in precedenza non mostravano alcuna diminuzione dei livelli di fenilalanina (PHE) nel sangue (non responsivi) con la somministrazione di sapropterina. I soggetti hanno agito come propri controlli. Successivamente è stato aggiunto allo studio un numero aggiuntivo di pazienti naive alla sapropterina e l'esclusione dell'età superiore a 21 anni è stata omessa per approvazione dell'IRB. Gli endpoint primari sono stati progettati per essere la misurazione della funzione comportamentale e cognitiva, dei livelli di neurotrasmettitori e dell'espressione genica dell'attività enzimatica dopo 4 settimane di trattamento rispetto ai livelli basali.

Al basale dello studio, ogni paziente ha partecipato a una visita clinica di circa 1 ora presso la sede abituale della clinica genetica. Scopo dello studio, progettazione e requisiti sono stati discussi e i consensi/consensi sono stati rivisti e firmati.

Gli inventari di valutazione delle prestazioni e del comportamento delle funzioni esecutive (strumenti BASC-2 e BRIEF) sono stati somministrati a pazienti e genitori dal ricercatore principale (PI) e/o dal coordinatore dello studio.

I campioni di urina sono stati raccolti in modo non invasivo per la misurazione dei livelli di neurotrasmettitore. Sangue raccolto mediante puntura venosa (3-5 ml) per l'analisi dell'espressione di microarray e l'analisi degli aminoacidi plasmatici. Sono stati raccolti i registri alimentari di 3 giorni precedentemente forniti ai partecipanti per il completamento.

Ai partecipanti è stata fornita una fornitura di 4 settimane di Kuvan® e istruzioni su come assumere il farmaco durante il periodo di studio. È stata sottolineata l'importanza di mantenere l'assunzione dietetica abituale (scelte alimentari e formula metabolica) per ridurre al minimo qualsiasi effetto della ricerca non attribuibile alla somministrazione di sapropterina. La sapropterina è stata interrotta alla fine del periodo di studio di 4 settimane. L'eccezione a questo era per i pazienti naïve che risultavano sensibili alla sapropterina.

Tutte queste misurazioni sono state ripetute negli stessi siti con i partecipanti allo studio alla fine della settimana 4 del periodo di studio.

Alla fine delle settimane 1 e 2 ulteriori campioni di sangue sono stati inviati all'Hayward Genetics Center per la misurazione dei livelli di PHE e tirosina (TYR) per accertare che non si fossero verificati cambiamenti significativi nell'assunzione dietetica abituale di un paziente. Questi campioni sono stati prelevati presso l'unità sanitaria statale locale di ogni paziente, come avviene per il normale monitoraggio. L'analisi dei nutrienti dei diari alimentari di 3 giorni è stata condotta presso l'Hayward Genetics Center.

1. Il comportamento e la funzione esecutiva sono stati valutati utilizzando inventari convalidati pubblicati, compilati come auto-rapporti del paziente e come rapporti del genitore (o tutore) quando appropriato. Gli strumenti utilizzati sono stati la scala di valutazione dei genitori del sistema di valutazione comportamentale per i bambini (BASC-2) e la scala di valutazione della personalità auto-segnalata, e gli strumenti della forma genitoriale della funzione esecutiva dell'inventario di valutazione comportamentale della funzione esecutiva (BRIEF). Gli inventari completati sono stati valutati utilizzando strumenti di valutazione elettronici dal coordinatore dello studio e dal PI, con la consultazione degli esperti dell'Harvard Medical Center, se necessario.
2. I campioni di urina sono stati raccolti in modo non invasivo e inviati per l'analisi di catecoli e neurotrasmettitori a un laboratorio NIH specializzato in questa tecnica. I campioni sono stati accecati a questo laboratorio per evitare bias.
3. L'analisi di microarray dei campioni di sangue è stata condotta presso l'Hayward Genetics Molecular Laboratory per determinare qualsiasi effetto sull'espressione genica, e quindi sull'attività enzimatica, a seguito della somministrazione di sapropterina.
4. Gli amminoacidi plasmatici sono stati analizzati presso l'Hayward Genetics Biochemical Laboratory per documentare che i pazienti "non rispondono" alla sapropterina (nessun conseguente abbassamento del PHE nel sangue); e per monitorare eventuali cambiamenti negli aminoacidi plasmatici che potrebbero indicare l'incapacità del paziente di mantenere le normali restrizioni dietetiche. I pazienti ingenui a Kuvan che hanno risposto sono stati annotati e fungono da comparatori.
5. I diari alimentari di 3 giorni completati dai pazienti (o dai genitori/tutori) a casa hanno documentato eventuali cambiamenti sostanziali nell'assunzione dietetica abituale durante il periodo di studio. Questi sono stati analizzati presso l'Hayward Genetics Center utilizzando il programma di analisi web MetabolicPro.