Ocena zachowania, funkcji wykonawczej, funkcji neuroprzekaźnika i ekspresji genomowej Kuvan Nonresponders (IST)

Przewidywana populacja uczestników badania obejmowała około 30 pacjentów z ustaloną PKU, otrzymujących opiekę w Hayward Genetics Center, u których wcześniej stwierdzono brak obniżenia poziomu fenyloalaniny (PHE) we krwi (osoby niereagujące na leczenie) po podaniu sapropteryny. Badani działali jako ich własne kontrole. Następnie do badania dodano dodatkową liczbę pacjentów, którzy nie byli wcześniej leczeni sapropteryną, a wykluczenie wieku powyżej 21 lat zostało pominięte na podstawie zgody IRB. Pierwszorzędowymi punktami końcowymi były pomiary funkcji behawioralnych i poznawczych, poziomów neuroprzekaźników i ekspresji genów aktywności enzymów po 4 tygodniach leczenia w porównaniu z poziomami wyjściowymi.

Na początku badania każdy pacjent uczestniczył w około 1-godzinnej wizycie w poradni genetycznej w ich zwykłej lokalizacji. Omówiono cel, projekt i wymagania badania oraz przejrzano i podpisano zgody/zgody.

Inwentarze oceniające wydajność i zachowanie funkcji wykonawczych (narzędzia BASC-2 i BRIEF) były podawane pacjentom i rodzicom przez głównego badacza (PI) i/lub koordynatora badania.

Próbki moczu pobrano nieinwazyjnie w celu pomiaru poziomów neuroprzekaźników. Krew pobrano przez nakłucie żyły (3-5 ml) do analizy ekspresji na mikromacierzy i analizy aminokwasów w osoczu. Zebrano 3-dniowe zapisy żywności, które zostały wcześniej przekazane uczestnikom do uzupełnienia.

Uczestnikom zapewniono 4-tygodniowy zapas Kuvan® i instrukcje, jak przyjmować lek w okresie badania. Podkreślono znaczenie utrzymania zwykłego spożycia diety (wyborów żywności i formuły metabolicznej) w celu zminimalizowania wszelkich efektów badawczych, których nie można przypisać podaniu sapropteryny. Sapropterynę przerwano pod koniec 4-tygodniowego okresu badania. Wyjątkiem byli nieleczeni pacjenci, u których stwierdzono reakcję na sapropterynę.

Wszystkie te pomiary powtórzono w tych samych miejscach z uczestnikami badania pod koniec 4 tygodnia okresu badania.

Pod koniec 1. i 2. tygodnia dodatkowe próbki krwi wysłano do Hayward Genetics Center w celu zmierzenia poziomów PHE i tyrozyny (TYR), aby upewnić się, że nie nastąpiły żadne znaczące zmiany w zwykłej diecie pacjenta. Próbki te zostały pobrane w lokalnej stanowej jednostce zdrowia każdego pacjenta, tak jak ma to miejsce w przypadku zwykłego monitorowania. Analiza składników odżywczych z 3-dniowych dzienników żywności została przeprowadzona w Hayward Genetics Center.

1. Zachowanie i funkcje wykonawcze oceniano za pomocą opublikowanych, zatwierdzonych wykazów, wypełnianych jako samoopisy pacjentów oraz, w stosownych przypadkach, jako raporty rodziców (lub opiekunów). Użyte instrumenty to Skala Oceny Zachowania Dzieci (BASC-2) i Skala Oceny Osobowości Samoopisowej oraz Inwentarz Oceny Zachowania Funkcji Wykonawczej (BRIEF) Instrumenty Funkcji Wykonawczej dla Rodziców. Ukończone inwentarze zostały ocenione za pomocą elektronicznych instrumentów oceny przez Koordynatora badania i PI, w razie potrzeby po konsultacji z ekspertami z Harvard Medical Center.
2. Próbki moczu pobrano w sposób nieinwazyjny i wysłano do analizy katecholi i neuroprzekaźników do laboratorium NIH specjalizującego się w tej technice. Próbki zostały zaślepione w tym laboratorium, aby zapobiec stronniczości.
3. Analiza mikromacierzy próbek krwi została przeprowadzona w Hayward Genetics Molecular Laboratory w celu określenia wpływu podania sapropteryny na ekspresję genów, a tym samym na aktywność enzymów.
4. Aminokwasy osocza były analizowane w Hayward Genetics Biochemical Laboratory w celu udokumentowania, że ​​pacjenci „nie reagują” na sapropterynę (brak wynikającego z tego obniżenia PHE we krwi); oraz do monitorowania wszelkich zmian aminokwasów w osoczu, które mogłyby wskazywać na nieprzestrzeganie przez pacjenta zwykłych ograniczeń dietetycznych. Pacjenci naiwni wobec Kuvana, którzy odpowiedzieli, zostali odnotowani i funkcjonują jako komparatory.
5. 3-dniowe dzienniki żywieniowe wypełniane przez pacjentów (lub rodziców/opiekunów) w domu dokumentowały wszelkie istotne zmiany w zwykłym spożyciu diety w okresie badania. Zostały one przeanalizowane w Hayward Genetics Center przy użyciu internetowego programu do analizy MetabolicPro.