Bewertung von Verhalten, Exekutivfunktion, Neurotransmitterfunktion und genomischer Expression Kuvan Nonresponders (IST)

Die erwartete Studienteilnehmerpopulation bestand aus ungefähr 30 etablierten PKU-Patienten, die vom Hayward Genetics Center betreut wurden und bei denen zuvor festgestellt wurde, dass sie bei der Verabreichung von Sapropterin keine Abnahme der Phenylalanin (PHE)-Blutspiegel (Non-Responder) zeigten. Die Probanden fungierten als ihre eigenen Kontrollen. Anschließend wurde eine zusätzliche Anzahl von Sapropterin-naiven Patienten in die Studie aufgenommen, und der Altersausschluss von über 21 Jahren wurde gemäß der IRB-Zulassung weggelassen. Primäre Endpunkte waren die Messung des Verhaltens und der kognitiven Funktion, der Neurotransmitterspiegel und der Genexpression der Enzymaktivität nach 4-wöchiger Behandlung im Vergleich zu den Ausgangswerten.

Zu Beginn der Studie nahm jeder Patient an einem ungefähr einstündigen Klinikbesuch an seinem üblichen Standort in der Genetikklinik teil. Zweck, Design und Anforderungen der Studie wurden besprochen und Zustimmungen/Zustimmungen überprüft und unterzeichnet.

Bewertungsverzeichnisse der Leistung und des Verhaltens exekutiver Funktionen (BASC-2- und BRIEF-Instrumente) wurden Patienten und Eltern vom Hauptprüfarzt (PI) und/oder dem Studienkoordinator verabreicht.

Urinproben wurden nicht-invasiv zur Messung der Neurotransmitterspiegel gesammelt. Durch Venenpunktion entnommenes Blut (3–5 ml) für die Microarray-Expressionsanalyse und die Analyse von Plasmaaminosäuren. 3-Tages-Lebensmittelaufzeichnungen, die den Teilnehmern zuvor zur Vervollständigung zur Verfügung gestellt wurden, wurden gesammelt.

Die Teilnehmer erhielten eine 4-wöchige Versorgung mit Kuvan® und Anweisungen zur Einnahme des Medikaments während des Studienzeitraums. Es wurde betont, wie wichtig es ist, die übliche Nahrungsaufnahme (Nahrungsauswahl und Stoffwechselformel) beizubehalten, um alle Forschungseffekte zu minimieren, die nicht auf die Sapropterin-Verabreichung zurückzuführen sind. Sapropterin wurde am Ende des 4-wöchigen Studienzeitraums abgesetzt. Die Ausnahme hiervon waren die naiven Patienten, bei denen festgestellt wurde, dass sie auf Sapropterin ansprechen.

Alle diese Maßnahmen wurden am Ende der 4. Woche des Studienzeitraums an denselben Standorten mit Studienteilnehmern wiederholt.

Am Ende der Wochen 1 und 2 wurden zusätzliche Blutproben an das Hayward Genetics Center zur Messung der PHE- und Tyrosin (TYR)-Spiegel geschickt, um sicherzustellen, dass keine signifikanten Änderungen in der üblichen Nahrungsaufnahme eines Patienten aufgetreten sind. Diese Proben wurden, wie für die übliche Überwachung, in der örtlichen staatlichen Gesundheitseinheit jedes Patienten entnommen. Die Nährstoffanalyse der 3-tägigen Ernährungstagebücher wurde im Hayward Genetics Center durchgeführt.

1. Verhalten und Exekutivfunktion wurden anhand veröffentlichter validierter Inventare bewertet, die als Patientenselbstberichte und gegebenenfalls als Eltern- (oder Erziehungsberechtigte-)Berichte ausgefüllt wurden. Die verwendeten Instrumente waren die Parental Rating Scale und die Self-Reporting Personality Rating Scale des Behavioral Assessment System for Children (BASC-2) sowie das Behavioral Rating Inventory of Executive Function (BRIEF) Parent Form Instruments of Executive Function. Die abgeschlossenen Bestandsaufnahmen wurden mit elektronischen Bewertungsinstrumenten vom Studienkoordinator und PI bewertet, bei Bedarf mit Rücksprache mit Experten des Harvard Medical Center.
2. Urinproben wurden nicht-invasiv gesammelt und zur Analyse von Katechinen und Neurotransmittern an ein auf diese Technik spezialisiertes NIH-Labor geschickt. Die Proben wurden gegenüber diesem Labor verblindet, um Verzerrungen zu vermeiden.
3. Im Hayward Genetics Molecular Laboratory wurde eine Microarray-Analyse von Blutproben durchgeführt, um etwaige Auswirkungen auf die Genexpression und somit die Enzymaktivität als Ergebnis der Sapropterin-Verabreichung zu bestimmen.
4. Plasmaaminosäuren wurden im Biochemischen Labor von Hayward Genetics analysiert, um zu dokumentieren, dass Patienten auf Sapropterin „nicht ansprechen“ (keine daraus resultierende Senkung des Blut-PHE); und um alle Änderungen der Plasmaaminosäuren zu überwachen, die darauf hindeuten könnten, dass ein Patient die üblichen diätetischen Einschränkungen nicht einhält. Kuvan-naive Patienten, die darauf ansprachen, wurden notiert und fungieren als Vergleichspersonen.
5. 3-tägige Ernährungstagebücher, die von Patienten (oder Eltern/Erziehungsberechtigten) zu Hause geführt wurden, dokumentierten alle wesentlichen Änderungen der üblichen Nahrungsaufnahme während des Studienzeitraums. Diese wurden im Hayward Genetics Center mit dem webbasierten Analyseprogramm MetabolicPro analysiert.