Hodnocení chování, exekutivní funkce, funkce neurotransmiteru a genomové exprese Kuvan Nonresponders (IST)

Předpokládanou populací účastníků studie bylo přibližně 30 pacientů se zavedenou PKU, kteří dostávali péči od Hayward Genetics Center, u kterých bylo dříve zjištěno, že nevykazují žádné snížení hladin fenylalaninu (PHE) v krvi (nereagují na léčbu) při podávání sapropterinu. Subjekty fungovaly jako jejich vlastní kontroly. Do studie byl následně přidán další počet pacientů dosud neužívajících sapropterin a na základě schválení IRB bylo vynecháno věkové vyloučení nad 21 let. Primární koncové body byly navrženy tak, aby bylo měření behaviorálních a kognitivních funkcí, hladin neurotransmiterů a genové exprese enzymové aktivity po 4 týdnech léčby ve srovnání se základními hladinami.

Na začátku studie se každý pacient zúčastnil přibližně 1hodinové návštěvy na své obvyklé genetické klinice. Byl prodiskutován účel studie, design a požadavky a souhlasy/souhlasy byly přezkoumány a podepsány.

Hlavní zkoušející (PI) a/nebo koordinátor studie poskytl pacientům a rodičům hodnotící soupisy výkonu a chování výkonných funkcí (nástroje BASC-2 a BRIEF).

Vzorky moči byly odebírány neinvazivně pro měření hladin neurotransmiterů. Krev odebraná venepunkcí (3-5 ml) pro analýzu exprese na mikročipu a analýzu aminokyselin v plazmě. Byly shromážděny 3denní záznamy o jídle, které byly dříve poskytnuty účastníkům k dokončení.

Účastníkům byla poskytnuta zásoba Kuvanu® na 4 týdny a instrukce, jak užívat léky během období studie. Byla zdůrazněna důležitost udržení obvyklého dietního příjmu (výběr potravin a metabolický vzorec), aby se minimalizoval jakýkoli výzkumný účinek, který nelze připsat podávání sapropterinu. Sapropterin byl vysazen na konci 4týdenního období studie. Výjimkou byli naivní pacienti, u kterých bylo zjištěno, že reagují na sapropterin.

Všechna tato měření byla opakována na stejných místech s účastníky studie na konci týdne 4 období studie.

Na konci týdne 1 a 2 byly odeslány další vzorky krve do Hayward Genetics Center pro měření hladin PHE a tyrosinu (TYR), aby se zjistilo, že v obvyklém dietním příjmu pacienta nenastaly žádné významné změny. Tyto vzorky byly odebrány na místní státní zdravotní jednotce každého pacienta, jak se to dělá při běžném monitorování. Nutriční analýza 3denních potravinových deníků byla provedena v Hayward Genetics Center.

1. Chování a exekutivní funkce byly hodnoceny pomocí publikovaných ověřených soupisů, vyplněných jako vlastní zprávy pacientů a případně jako zprávy rodičů (nebo opatrovníků). Používanými nástroji byla rodičovská hodnotící škála Behavioral Assessment System for Children (BASC-2) a škála hodnocení osobnosti s vlastním vykazováním a Behavioral Rating Inventory of Executive Function (BRIEF) Parent Form Instruments of Executive Function. Dokončené soupisy byly hodnoceny pomocí elektronických hodnotících nástrojů koordinátorem studie a PI, s konzultací s odborníky z Harvardského lékařského centra podle potřeby.
2. Vzorky moči byly neinvazivně odebrány a odeslány k analýze katecholů a neurotransmiterů do laboratoře NIH specializující se na tuto techniku. Vzorky byly do této laboratoře zaslepeny, aby se zabránilo zkreslení.
3. Mikročipová analýza krevních vzorků byla provedena v Hayward Genetics Molecular Laboratory za účelem stanovení jakéhokoli účinku na expresi genu, a tím i na aktivitu enzymu, jako výsledek podávání sapropterinu.
4. Aminokyseliny v plazmě byly analyzovány v Hayward Genetics Biochemical Laboratory, aby se zdokumentovalo, že pacienti "nereagují" na sapropterin (žádné výsledné snížení PHE v krvi); a sledovat jakékoli změny v aminokyselinách v plazmě, které by mohly naznačovat, že pacient nedodržuje obvyklá dietní omezení. Pacienti naivní na Kuvan, kteří reagovali, byli zaznamenáni a fungovali jako komparátoři.
5. 3denní stravovací deníky vyplněné pacienty (nebo rodiči/opatrovníky) doma dokumentovaly jakékoli podstatné změny v obvyklém příjmu potravy během období studie. Ty byly analyzovány v Hayward Genetics Center pomocí webového analytického programu MetabolicPro.