Evaluación del Comportamiento, Función Ejecutiva, Función de Neurotransmisores y Expresión Genómica Kuvan Nonresponders (IST)

La población anticipada de participantes del estudio fue de aproximadamente 30 pacientes con PKU establecidos que recibieron atención del Hayward Genetics Center, a quienes se les detectó previamente que no presentaban una disminución en los niveles de fenilalanina en sangre (PHE) (no respondedores) con la administración de sapropterina. Los sujetos actuaron como sus propios controles. Posteriormente se agregó al estudio un número adicional de pacientes que no habían recibido sapropterina y se omitió la exclusión de edad de más de 21 años según la aprobación del IRB. Los criterios de valoración primarios se diseñaron para medir la función conductual y cognitiva, los niveles de neurotransmisores y la expresión génica de la actividad enzimática después de 4 semanas de tratamiento en comparación con los niveles iniciales.

Al inicio del estudio, cada paciente asistió a una visita clínica de aproximadamente 1 hora en su ubicación habitual de la clínica de genética. Se discutieron el propósito, el diseño y los requisitos del estudio, y se revisaron y firmaron los consentimientos/asentimientos.

El Investigador Principal (PI) y/o el Coordinador del Estudio administraron inventarios de calificación del desempeño de la función ejecutiva y el comportamiento (herramientas BASC-2 y BRIEF) a pacientes y padres.

Las muestras de orina se recogieron de forma no invasiva para medir los niveles de neurotransmisores. Sangre recogida por punción venosa (3-5 ml) para análisis de expresión de micromatrices y análisis de aminoácidos plasmáticos. Se recogieron registros de alimentos de 3 días proporcionados previamente a los participantes para que los completaran.

Los participantes recibieron un suministro de Kuvan® para 4 semanas e instrucciones sobre cómo tomar el medicamento durante el período de estudio. Se enfatizó la importancia de mantener la ingesta dietética habitual (opciones de alimentos y fórmula metabólica) para minimizar cualquier efecto de investigación no atribuible a la administración de sapropterina. La sapropterina se suspendió al final del período de estudio de 4 semanas. La excepción a esto fue para los pacientes ingenuos que respondieron a la sapropterina.

Todas estas medidas se repitieron en los mismos sitios con los participantes del estudio al final de la semana 4 del período de estudio.

Al final de las semanas 1 y 2, se enviaron muestras de sangre adicionales al Hayward Genetics Center para medir los niveles de PHE y tirosina (TYR) para determinar que no se hayan producido cambios significativos en la ingesta dietética habitual del paciente. Estas muestras se extrajeron en la unidad de salud estatal local de cada paciente, como se hace para el seguimiento habitual. El análisis de nutrientes de los diarios de alimentación de 3 días se realizó en el Hayward Genetics Center.

1. El comportamiento y la función ejecutiva se evaluaron utilizando inventarios validados publicados, completados como autoinformes de los pacientes y como informes de los padres (o tutores) cuando correspondía. Los instrumentos utilizados fueron el Sistema de Evaluación del Comportamiento para Niños (BASC-2), la Escala de Calificación de los padres y la Escala de Calificación de la Personalidad Autoinformada, y el Inventario de Calificación del Comportamiento de la Función Ejecutiva (BRIEF) Instrumentos de la Función Ejecutiva para Padres. El coordinador del estudio y el IP calificaron los inventarios completos utilizando instrumentos de evaluación electrónicos, con la consulta de expertos del Centro Médico de Harvard, según fuera necesario.
2. Las muestras de orina se recolectaron de forma no invasiva y se enviaron para el análisis de catecoles y neurotransmisores a un laboratorio del NIH especializado en esta técnica. Las muestras se cegaron a este laboratorio para evitar sesgos.
3. El análisis de micromatrices de muestras de sangre se llevó a cabo en el Laboratorio Molecular de Hayward Genetics para determinar cualquier efecto sobre la expresión génica y, por lo tanto, la actividad enzimática, como resultado de la administración de sapropterina.
4. Los aminoácidos plasmáticos se analizaron en el Laboratorio Bioquímico de Hayward Genetics para documentar que los pacientes "no responden" a la sapropterina (sin reducción resultante de la PHE en sangre); y para monitorear cualquier cambio en los aminoácidos plasmáticos que podrían indicar que el paciente no ha mantenido las restricciones dietéticas habituales. Los pacientes sin experiencia previa con Kuvan que respondieron se anotaron y funcionan como comparadores.
5. Los diarios de alimentos de 3 días completados por los pacientes (o padres/tutores) en el hogar documentaron cualquier cambio sustancial en la ingesta dietética habitual durante el período de estudio. Estos fueron analizados en Hayward Genetics Center utilizando el programa de análisis basado en la web MetabolicPro.