Avaliação do Comportamento, Função Executiva, Função de Neurotransmissor e Expressão Genômica Kuvan Nonresponders (IST)

A população participante do estudo antecipada era de aproximadamente 30 pacientes com PKU estabelecidos recebendo cuidados do Hayward Genetics Center, que não apresentavam diminuição nos níveis de fenilalanina (PHE) no sangue (não respondedores) com a administração de sapropterina. Os sujeitos agiram como seus próprios controles. Um número adicional de pacientes virgens de sapropterina foi subsequentemente adicionado ao estudo, e a exclusão de idade acima de 21 anos de idade foi omitida por aprovação do IRB. Os endpoints primários foram projetados para medir a função comportamental e cognitiva, os níveis de neurotransmissores e a expressão gênica da atividade enzimática após 4 semanas de tratamento em comparação com os níveis basais.

Na linha de base do estudo, cada paciente compareceu a uma visita clínica de aproximadamente 1 hora em sua clínica de genética habitual. O objetivo, o desenho e os requisitos do estudo foram discutidos e os consentimentos/assentimentos revisados ​​e assinados.

Inventários de classificação de desempenho e comportamento da função executiva (ferramentas BASC-2 e BRIEF) foram administrados a pacientes e pais pelo Investigador Principal (PI) e/ou pelo Coordenador do Estudo.

Amostras de urina foram coletadas de forma não invasiva para medição dos níveis de neurotransmissores. Sangue coletado por punção venosa (3-5 ml) para análise de expressão de microarray e análise de aminoácidos plasmáticos. Registros alimentares de 3 dias previamente fornecidos aos participantes para preenchimento foram coletados.

Os participantes receberam um suprimento de 4 semanas de Kuvan® e instruções sobre como tomar o medicamento durante o período do estudo. Foi enfatizada a importância de manter a ingestão dietética habitual (escolhas alimentares e fórmula metabólica) para minimizar qualquer efeito de pesquisa não atribuível à administração de sapropterina. A sapropterina foi descontinuada no final do período de estudo de 4 semanas. A exceção a isso foi para os pacientes ingênuos que responderam à sapropterina.

Todas essas medidas foram repetidas nos mesmos locais com os participantes do estudo no final da semana 4 do período do estudo.

No final das semanas 1 e 2, amostras de sangue adicionais foram enviadas ao Hayward Genetics Center para medição dos níveis de PHE e tirosina (TYR) para verificar se não ocorreram mudanças significativas na ingestão alimentar habitual do paciente. Essas amostras foram coletadas na unidade de saúde estadual local de cada paciente, como é feito para o acompanhamento usual. A análise nutricional dos diários alimentares de 3 dias foi realizada no Hayward Genetics Center.

1. O comportamento e a função executiva foram avaliados usando inventários validados publicados, preenchidos como auto-relatos do paciente e como relatórios dos pais (ou responsáveis), quando apropriado. Os instrumentos utilizados foram o Sistema de Avaliação Comportamental para Crianças (BASC-2) Escala de Avaliação dos Pais e Escala de Avaliação da Personalidade de Autorrelato, e o Inventário de Avaliação Comportamental da Função Executiva (BRIEF) Instrumentos de Formulário para Pais da Função Executiva. Os inventários concluídos foram pontuados usando instrumentos de avaliação eletrônica pelo Coordenador do Estudo e PI, com consulta de especialistas do Harvard Medical Center, conforme necessário.
2. Amostras de urina foram coletadas de forma não invasiva e enviadas para análise de catecols e neurotransmissores a um laboratório do NIH especializado nessa técnica. As amostras foram cegas para este laboratório para evitar viés.
3. A análise de microarranjos de amostras de sangue foi realizada no Hayward Genetics Molecular Laboratory para determinar qualquer efeito na expressão gênica e, portanto, na atividade enzimática, como resultado da administração de sapropterina.
4. Os aminoácidos plasmáticos foram analisados ​​no Hayward Genetics Biochemical Laboratory para documentar que os pacientes "não respondem" à sapropterina (sem redução resultante do PHE no sangue); e monitorar quaisquer alterações nos aminoácidos plasmáticos que possam indicar falha do paciente em manter as restrições dietéticas usuais. Pacientes virgens de Kuvan que responderam foram anotados e funcionam como comparadores.
5. Diários alimentares de 3 dias preenchidos por pacientes (ou pais/responsáveis) em casa documentaram quaisquer mudanças substanciais na ingestão alimentar habitual durante o período do estudo. Estes foram analisados ​​no Hayward Genetics Center usando o programa de análise baseado na web MetabolicPro.